Търсене методи антиепилептични средства - фармакологична регулиране на психични процеси

МЕТОД търсене на биологично активни вещества с антиепилептични СВОЙСТВА
Въпреки сравнително голям арсенал от налични антиконвулсанти, се нуждаят от нови антиепилептични лекарства все още е голям, поради липса на ефикасност, честотата на токсични и странични ефекти на съществуващите лекарства.
Проблеми на съвременната фармакология и неврологията в областта на епилепсия могат да бъдат обобщени, както следва:

1. търсене на нови, по-ефективни и по-малко токсични агенти в сравнение с съществуващите лекарства;
2. създаване на лекарства с селективни ефекти срещу някои видове пристъпи, пароксизмална и непрекъснати епилептични нарушения психопатологични генезис;
3. проучване на молекулярно-биологични механизми на действие на известни и нови лекарства, и на тази основа развитието на научни методи на изследване в експериментални и клинични;
4. фармакокинетиката антиепилептици изследване, определянето на ефективни концентрации на всяко лекарство и записва тези данни при определяне на единични и дневните дози, курсове на продължителността на лечението;
5. идентифициране на различията в ефекти и механизми на действие на различни антиепилептични лекарствени групи, за да се определи местоположението на всяка група в комбинираното лечение на епилепсия.

Въпрос на експерименталното търсене на антиепилептични лекарства е един от най-развитите в фармакология.
Това се дължи на факта, че в края на миналия век, много добре развита експериментални модели на епилепсия. Започвайки с работата на АД Сперански за електрическа стимулация на мозъка, експериментален патофизиология, фармакология натрупан опит в създаването на модели на епилепсия. За тази цел се използват дразнене различни мозъчни области на електрически шок, различни химични агенти, причиняващи конвулсии, когато се прилага за приложение или за чувствителни части на мозъка. Това е описано огромен брой конвулсивни отрови, като действа с различни механизми в мозъка и да доведе до типичните промени в невронната активност, биоелектричната активност на мозъка, припадъци.
Swinyard [1949] Chen и др. [1954] предложи теста за избор на антиконвулсанти. От ECT постоянно се използва за създаване на модел на големи припадъци и избор на антиконвулсивни лекарства за способността им да се предотврати тоник-разгъватели фаза електроконвулсивна припадъци. Като модел на малки епилептични припадъци най-често използваните модел korazolovaya припадъци, въпреки че в зависимост от дозата и начина на приложение и korazol може да доведе до смущения, които са типични за малки припадъци от неговите електрофизиологични корелати на връх вълна и отмествания са типични за големи генерализирани конвулсии.
Въпреки сравнително дългата история на този въпрос, така че засега няма единство при избора на методи за търсене на антиепилептични лекарства, всяка лаборатория използва свой собствен набор от методи или друг метод, както и избора си, обикновено не е оправдано. Съществуващите методологични препоръки [Saratikov 1977] изброява методи, които могат да бъдат напълно характеризирани на етапа на предклинични експериментални изследвания със значителни aktivnostyu- заявки за търсене антиконвулсантен лекарствен препарат, първичен скрининг на вещества с антиепилептична активност в тях не се обсъжда.
В същото време, от наша гледна точка, това е изключително важно да се прави разлика между различните етапи от изследването в търсенето на нови антиконвулсанти. Необходимо е също така да се намерят такива методологични подходи, които ще позволят не само да се идентифицират ново вещество с антиконвулсивни свойства, но също така и да се раздели групата на антиепилептични лекарства на основния механизъм на действие. Неврофизиология постижения правят тази задача възможно. Това позволява впоследствие да идентифицират по-ясно показанията за клиничната употреба на наркотици във всяка група, се определят неговата роля при лечението на различни епилептични разстройства.
През 1980 г. Koela предложеният набор от тестове за начално и по-задълбочени проучвания на антиконвулсанти. В първоначалния етап на изпитания, следните конвулсивни средства, използвани за създаване на модели на епилепсия: максималният elektroshok- korazol, pikrotoksin- стрихнин.
В етапа на тестване в дълбочина, за да се симулира малки припадъци korazol предложени за използване електрическа стимулация на бялото вещество и сетивно-моторни части на мозъка да симулира психомоторни припадъци - електрическа стимулация на хипокампуса.
Eadie, Тайърър [1983] препоръчваме следните модели на епилептични синдроми, подходящи клинични прояви на епилепсия

Проучванията механизмите на действие на антиепилептични лекарства, тестване на различни антиконвулсанти оценъчни методи са в основата на препоръки за това как да се намери тази група лекарства.

Етапи на изучаване на нови биологично активни средства

Както вече споменахме, след получаване на нови химически съединения, те преминават през няколко етапа на публично и частно изследване. За антиепилептични лекарства е следващата цел на изследването: 1) регистрацията на нови химични съединения;

1.  Анализ на структурата и биологичната предсказание дейност;
2. първоначалното изследване на психотропни свойства и антиконвулсанти;
3.  по-задълбочено изследване на антиепилептични свойства в различни модели конвулсивни sindroma- 5) идентификация на нови активни съединения, принадлежащи към определена група от антиепилептични лекарства върху основните механизми на действие 6) чрез тест лекарство, за да определи тяхната фармакологична и неблагоприятни effektov- 7) изследване на безопасността на потенциален нов антиепилептично лекарство за програма, при условие на изискванията на фармакологичните komiteta- 8) проучване на фармакокинетиката preparata- 9) CUS еска изпитване на потенциала антиепилептично preparata- 10) изследване на фини механизми на действие.

Провеждане първоначалното тестване на химичните съединения на антиконвулсивна активност

Първоначално проучване на антиконвулсивно действие на веществата трябва да отговори на следните въпроси: 1) дали веществото притежава антиконвулсивно aktivnostyu- 2) приблизително определяне на тежестта на този aktivnosti- 3), за да се реши дали е целесъобразно да се изяснят или задълбочено проучване на антиконвулсивно вещество
Основно проучване на антиконвулсивни свойства на нови химични съединения се извършва от нас заедно с идентифицирането на потенциалните психотропни свойства, както е описано по-горе.
Изглежда целесъобразно съвместно прилагане на методи за идентифициране на типа психотропна активност и антиконвулсивно действие, поради следните причини. Психотропни и антиконвулсивни свойства на веществата са близки и непрекъснато се преплитат в спектъра на действие като психотропни и антиепилептични лекарства
Както вече бе подчертано по-горе, антиепилептични свойства са едни от невролептици, антидепресанти, те имат постоянна. В същото време, структурата на действието
Повечето антиконвулсанти представени успокоително, успокояващо нервната система свойства. Затова откриването в хода на такова всеобхватно проучване на седативни свойства на новия материал е prognostically важно да учат своите антиконвулсивни свойства, както и обратното.
В допълнение, такава обща изследователска програма прави на едно проучване на химичните вещества по-икономичен, информативно, тъй като позволява на някои групи животни, най-ниската цена материал, за да получите най-много информация за различните видове дейност.
В първичния изследване, ние използваме само два модели на гърчове: максимален електрошок (50 тА, 0.2 сек, 50 Hz) и korazolovye крампи. Тези два теста, тъй като опитът показва, са достатъчни, за да се идентифицират лекарства, които могат да потиснат различните видове конвулсивни разстройства.
В допълнение, antikorazolovoe действие може да показва анксиолитични свойства на веществата показват възможен механизъм на ОАВАергични лекарство активност. Електроконвулсивна припадъци развиват до известна последователност на фазите - клонични, тоник, тонично-екстензорен. В процеса на оценка на вещества действие за този модел се определя от два показателя:
а) броя на животните в групата, който е развил тоник-разгъватели фазово
б) броят на умрелите животни в група (сравнение на контрол и експериментални групи).
Индикация на антиконвулсивните ефекти на веществото са блокада тонично-екстензорни припадъци фази и защита на животните от смърт.
При използване korazolovoy припадъци модел korazol прилага интраперитонеално в абсолютен летална доза - 150 мг / кг. В контролната група, всички животни са отбелязани клонични гърчове допълнително 3-7 мин. смъртта настъпва веднага след разработването на фазата на тоник-екстензия. Оценява следните параметри: а) продължителността на живота на животните във всяка gruppe- б) наличието на тонично-екстензорен фаза придружаваща в) клонични фаза.
Признаци на антиконвулсантният активността на веществата е удължаване на живота в експерименталната група в сравнение с контролната, защита от смърт (регистриран брой мъртви и оцелелите животни в група), липсата на тоник фаза разгъватели, отсъствие или съкращаване клонични фаза изземване.
Ако антиконвулсивно ефект е светла и неоспорим (100% защита на животните срещу тоник-разгъватели фаза на максимална тест електрошок и 100% защита от смърт по време на тест Corazol) могат да отидат в проучването стъпка дълбочина.
Ако резултатът е съмнителен, а не толкова ярка, че е препоръчително да се извършват проучвания за квалификациите.
В последния случай, същите тестове се повтарят на групи
включва голям брой животни, допълнени с интравенозен тест титруване Corazol, стрихнин, и след като е направено това решение да се проведе по-задълбочено изследване.

Провеждане на задълбочени изследвания на активната фаза на антиконвулсантни вещества

дълбочина етап проучване има за цел да се идентифицират следните странични ефекти на веществото:

1. ) Количествено определяне на ефекта на антиконвулсивни средства при различни модели на пристъпи;
2.  сравнение на ефекта на всяко вещество със същия индекс референтен препарат (като референтни препарати обикновено се използват фенобарбитал, дифенилхидантоин, етосуксимид, диазепам);
3.  определяне на широчината на нови терапевтични агенти, както и защитна индекс и сравняване на тези стойности с позоваване лекарството;
4.  отсъждане относно осъществимостта на клинични изпитания на лекарството, ако има някои предимства пред референтните препарати;
5.  прехвърляне на определена група от антиконвулсанти на механизма на антиконвулсантния ефект.

По време на проучването в дълбочина сме използвали доста широка гама от модели на гърчове, което прави възможно да се вземат предвид различните механизми на епилептичен активност: 1) тестване на максимален електрошок (мишки и плъхове);

1. korazol при доза от 110 мг / kg- 3) интравенозно титриране metrazole 1%, 0.01% натриев стрихнин, бикукулин, пикротоксин;
2. хиперкинезия, причинени от централните стимуланти m-холинергични (ареколин), N-холинергични (никотинови), серотонинергични (5-хидрокситриптофан) системи mozga- 5) Създаване на фокус изземване чрез прилагането на 50 U пеницилин чрез имплантирано канюла към зоната на сензорно на кората на главния мозък krysy- 6 ) аудиогенни конвулсии (до 100 db за 1,5 мин) при плъхове на МС.

В тестове 1, 2, 4 и 6 се определя по метода на Litchfield, Wilcoxon [1949] ED-50 - средната ефективна доза блокиране развитието на припадъци или тонично-екстензорен фаза на припадък в 50% от животните.
В случай на интравенозно титриране metrazole, стрихнин, бикукулин определен праг конвулсивен доза от отрова, което води до начало на пристъпите или фаза тонично-екстензорни припадъци.
При създаването на пеницилин епилептичен фокус се определя от броя на пристъпите на час, както и специфични промени EEG с течение на времето (минути) в контрола и на различни интервали от време след прилагането на изследваното лекарство.
Този набор от тестове разкрива спектъра на дейност на новото вещество, да се уточни за кой модел е най-ефективен.
Количествени показатели, определени за всеки тест на референтните и тестовите продукти осигуряват основата за преценки за стойността на продукта, неговите предимства в сравнение с позоваването на тежестта на основният ефект, набор от свойства. Освен това, от определени същите параметри ширина терапевтичен ефект (LD50 / ED50), както и защитна индекс (TD50 / ED50).
TD50 - токсични ефекти от веществото - се определя от способността да причиняват токсични странични ефекти, такива като атаксия, обща депресия в 50% от животните.
Ако подготовката на тест от тежестта на основните ефекти, кръг от дейности, ширината на терапевтично действие, защитната индекса е по-добра от известните модели на лекарства, решението относно целесъобразността от изучаване на неговата безопасност, за да се проведат по-нататъшни клинични проучвания.

Диференцираното обучение група принадлежност на нов антиконвулсанти механизъм на действие

Горните методологични подходи, използването на различни модели на пристъпи на цялостен добре характеризиран животното позволяват антиепилептично ефект, но не се прави разлика между различните групи лекарства с възможност за промяна на припадък активност.
В тези тестове, по същество се държат по същия начин и класически антиконвулсанти, като например фенобарбитал, benzonala и 1,4-бензодиазепини и сукцинимиди, валпроева киселина и производни.
В същото време, на ефекта на тези лекарства върху епилептичен процес е неясна.
Въз основа на нашите данни, възможността за разделяне на антиепилептично действие лекарства в три групи според тяхната връзка с появата и разпространението на епилептичен активност, препоръчва на етапа на изследване в дълбочина провежда специално проучване на идентифицираните неврони pomatia на мекотело Helrt. Електрофизиологични опити с микроелектрода техника [Балабан 1978] пейсмейкър се провеждат с "пристъп" висцерални ганглийни неврони мида на спонтанно активни букални ганглии мотоневрони. Определена влияние на вещества: а) на спонтанна активност на невроните, "възпламенен" aktivnost- б) мембрана напрежение в) за осъществяване на 0,1 0.05% разтвор на metrazole в тези neyronah- ж) реакция на ортодроматична стимулация.
Като количествен освен директен запис на невронална активност в осцилоскоп за запис се използва: а) честотата на импулсите в minutu- б) стойността на потенциала на трансмембранен. Изследваните вещества се прилагат към разтвора на перфузия при различни концентрации, често 1-10-4M-1-10_6M.

Сравнение на данните от тези експерименти с резултатите от експерименти с модели на синдром конвулсантет PAS животни дава основите включват ново антиепилептично лекарство в една от три групи:

1.  засяга ритъм endoneyronalnuyu неврон блокиращия поява на епилептичен активност (тип фенобарбитал);
2.  и потискане на появата и разпространението на припадък активност (тип дифенилхидантоин);
3.  блокиране само размножаване епилептичен активност (бензодиазепини тип).

По време на периода на "до" проучвания, включващи различни специалисти изследвали действието на активното вещество с други органи и системи, идентифицират допълнителни полезни или нежелани странични ефекти в сърдечно-съдовата, дихателната, ендокринната и други системи на тялото.
Изследване на механизмите на действие на антиепилептични лекарства трябва да бъде въз основа на наличната информация за молекулярната биология на развитието на епилепсия активност и антиконвулсивни ефекти. Това включва изследване на ефекта на нови лекарства: 1) на биоелектричната активност на мозъка в нормална и патологична присъствие protsessa- 2) асиметрия mozga- 3) пространствен синхронизация между различните региони mozga- 4) активност на различни функционални характеристики на неврони, особено пейсмейкъра активност "възпламенен" neyronov- 5) волта-амперна характеристика на йонни токове в възбудими мембрани kletok- 6) синаптичните peredachu- 7) медиаторни системи, по-специално отношенията с GABA 8) биоенергетично система в нервните процеси kletkah- 9) други системи на тялото, в допълнение към нерв.