Импрегниране и пълнене на хистологичен материал - основа на хистология

Получаване на висококачествени хистологични препарати изисква равномерно тънки парчета с обект на изследване. За да ги получите, е необходимо да се импрегнира парчета тъкан и се изсипва една среда, която ще им много добри рязане направи.
Трябва да се помни, че процесът на импрегниране и пълнене на материала изисква голямо внимание. Невежеството на основните принципи и неспазването на необходимите условия може да доведе до факта, че този въпрос не е подходящ за рязане на филийки или получено ще бъде с лошо качество.
Най-широко използваните материали за тази цел са парафин, целоидин и желатин.

Попълнете парафин

Този метод се използва широко в изследователски лаборатории хистологично поради относителната скорост на пълнене (в рамките на 1-2 дни след обезводняване), възможността за получаване на серийни срези и тънки секции за цитологични изследвания (дебелина 1-3 микрона), и удобство на блока за съхранение неоцветени секции ( практически неограничено време). Недостатъци на метода трябва да включват значително пресоване на материала (20%), поради влиянието на висока температура по време на импрегнирането на парафин. Вода-богат, ронлив тъкан са неподходящи за изливане в парафин. Известен недостатък е необходимостта от отстраняване на восъка от раздели, преди да бъдат боядисани.
Парафин при стайна температура - твърд хомогенен вещество. Има няколко степени на парафин: Мека (точка на топене 45-54 ° С) и твърдо вещество (точка на топене 58-60 ° С).
В повечето случаи, се използва за изливане парафин с точка на топене 54-56 ° С Ако рязане се приема при ниска температура на околната среда, най-добре е да се прилагат восък с ниска точка на топене (48-50 ° С). Желаната степен на твърдост се постига чрез смесване на восък в различни комбинации от твърди и меки класове.
Ако точката на топене восък не е известна, тя може да се определи. За тази цел, стопен парафин nasasyvayut в тънък стъклен капилярен и се оставя да се втвърди. След това капилярата се пречиства от външната страна и спазване восъкът заедно с термометър потопен в химическата чашата с вода, която постепенно се загрява, като се разбърква със стъклена пръчка. След като восък започва да се топи в капилярна, точка температура, което показва неговата точка на топене.
Трябва да се помни, че обичайната парафин венозна често съдържа примеси газове, които мехурчета форма при изливане, давайки парафин повишена чупливост и значително влошаване на качеството на рязане материал. За да премахнете тези примеси трябва прясно парафин за дълго време остава в стопен формата на плоски пластини (да се увеличи зоната за отделяне на газове) при 70 ° С (за тази цел могат да бъдат адаптирани шкаф сушене). Възможно е да се подложи някои от стопения парафин и се нагрява (до дим), последвано от бързо охлаждане също.
Ако восъкът, въпреки подходящо обучени, поддържа скованост, е необходимо да се добави чист пчелен восък в размер на 2-5%, което ще даде по-голяма еластичност парафин.
Попълнете парафин изисква внимателно спазването на две основни условия са изпълнени: 1) на наркотици трябва да бъде напълно дехидратирани, 2) не съдържа алкохол. Първото условие, както вече знаем, е гарантирано в процеса на дехидратация и уплътняване на батерията се увеличава концентрацията на алкохол.

Премахване на алкохол.

За премахване на алкохол и да се подготви парафин импрегниран материал се обработва с разтворител като парафин способността за изместване на алкохола. Такива вещества включват хлороформ, бензен, толуен, ксилен, въглероден дисулфид и др. Най използва хлороформ и бензол. Толуен и ксилен се прави парчета трудно.
Трябва да се помни, че венозна хлороформ опаковка могат да бъдат заразени и съдържа вода, която е несъвместима с изискванията за вещества, използвани при получаването на обекта за импрегниране. За да се освободи от алкохол и хлороформ вода натискането за дълго време върху калциев хлорид. Хлороформ магазин на тъмно, тъй като светлината лесно се разгражда.

Напояване техника.

Обезводнения и компактни части на изместване от смес от абсолютен алкохол абсолютен алкохол-хлороформ (1: 1) в продължение на 2-3 часа и след това в чист хлороформ където поплавък първоначално (качеството на повърхността), и след като импрегниране постепенно мивка. В процеса на отстраняване на алкохол хлороформ се промени 2-3 пъти по време на 1.5-3 часа (в зависимост от свойствата на обекта и дебелината на парчетата). Когато стойността на парче от 1 cm х 1 се провежда в хлороформ в продължение на 30 минути. След това, следвайки принципа на постепенно заместване парафин хлороформ обект се поставя в смес от равни части парафин (за предпочитане мек) и хлороформ. Тази смес се втвърдява при стайна температура, при нагряване до 37 ° С се стапя и се превръща в течна консистенция. Парчетата са хлороформ-парафин при 37 ° С в продължение на 5-6 часа (при 56 ° С, времето съкратен до 30 минути - 1 час). Ако е необходимо да се забави по-нататъшна обработка на материала е възможно след обект потапяне в смес от хлороформ с екстракт парафин контейнер от пещта и се оставя при стайна температура една нощ (или дори няколко дни) в затворено състояние, и след това отново чрез стапяне в пещ при 56 ° С, трансфер стоящи в следващия горещ парафин импрегниране. Прекалено пребиваване обект в стопения парафин хлороформ-влошава качеството на рязане.

За пълно освобождаване на обекта от хлороформ парчета извършва последователно в две или три части от стопен парафин. Времето за престой в парафинови парчета зависи от размера и тъканни свойства. Парчетата дебелина 2-5 mm трябва да бъде общо 2-5 часа в парафин.
Ако обектът е обезводнен и не съдържа алкохол, забавяне парафин не намалява качеството на обекта, дори когато са импрегнирани в рамките на няколко дни.

Фиг. 61.
Устройство за наливане парафин. Обяснението в текста.

В присъствието на парчетата в резултатите от останалите вода и алкохол лечение влошава в пряка зависимост от продължителността на престоя на прекомерен обект в стопения парафин. Парафинът импрегниране може да се използва няколко пъти, но е необходимо да се следват стриктно заповедта да не се смесват части от парафин. За тази тегло бутилки (или чаши) трябва да идентифицират съответните номера (1, 2, 3).

Наливане.

След последното импрегниране на обекта се пълни с разтопен парафин, специално подготвени за тази цел и се съхраняват в инкубатор.
Като форми, използвани за леене на различни устройства.
Г-образни гладки колена, изработени от метал (мед, олово, стомана). Препоръчително е да се прилага на площадите, дългата страна е равна на 8-10 см, на кратко - 3 см, височина - 1,5-2 см площади, пуснати на полиран метал или стъклена плоча и, чрез плъзгане на ъгли създават желаните размери мухъл ..
Хартиени кутии от лист дебела хартия по схемата показана на фиг. 61, където пореден номер показва последователността, и линиите - посоката на огъване лист. Те могат също така да е фолио, но в тези случаи трябва да бъде веднага след леене още течен парафин потапяне на етикета на хартия. Удобство хартия форми е способността да се променя значително техния размер, лекота на етикетиране (с молив по стените) и дългосрочно съхранение излетия материал.
За да се запълни малки обекти може да се приложи час стъкло, порцелан правоъгълни тави от един акварел и други устройства.
Напълнете както следва. Предназначен за изливане парафин затопля до 58-60 ° С и внимателно се излива в приготвената матрицата, напълване до ръба и се избягва образуването на въздушни мехурчета (добри за тази цел имат висока порцелан чаша с дръжка и гърло). След това загрята метална шпатула или форцепс на, прехвърлени бързо подготвени за леене плесен обект в парафин и ориентирани в желаната позиция. След това матрицата е с водно охлаждане (10-18 ° С). Ако запълване произведени чрез използване на метални ъгли, плаката се поставя в плоска чиния, така че долната си повърхност не е в контакт с дъното на съда (върху стъклени или метални пръчки). След това внимателно се излива във вода за образуване на горните краища (не наводняване на повърхността) и се оставя да се втвърди восък. Когато попълните в полето за хартия се свали постепенно в съда с вода и се оставя да плува до пълното втвърдяване на парафина.
В процеса на втвърдяване на кратера на блок повърхност се свива, които трябва да бъдат взети предвид при избора на височината на формата. Ако формата не е достатъчно висока, или не е изцяло запълнена с парафин, и тънък слой обхваща предмета, по време на втвърдяването горната част ще се подава от блока.
Етикетиране материал трябва да се направи непосредствено преди леене, или парчета могат лесно да бъдат объркани, особено при попълване множество обекти в единна форма. За тази цел се използва хартия кутии, съответстващи на данни, прилагани в молив на стената на формите. Ако устройството трябва да се отстранява от калъпа, хартиената лента със символи вмъква в восък си точка и, ако е необходимо, допълнителни знаци върху повърхността на замразен парафин дисекция игла или скалпел.
Трябва да се помни, че: 1) когато восъкът се втвърдява плътно прилепва към стъклото и се отделя трудно, така че повърхността на стъклото преди изливане устройства да бъдат смазани glitserinom- 2) бавно прехвърляне на обекта под формата на парафин и недостатъчно използване на нагрят инструменти (особено ако в лаборатория охлажда ) води до образуването по повърхността на парчета парафин филм, значително влошава качеството zalivki- 3) използването на много студена вода (температура под 10-8 ° с) води до свиване на блок от всички страни, и Реформацията, а понякога и да treschinam- 4) бавно замразяване единици във въздуха и при замръзване на водата да влоши качеството на запълване.
С добро звено за пълнене трябва да е гъста и еднородна консистенция. Губим млечно включвания показват, лошо качество на уреда и значително да влошат рязане материал, а понякога е невъзможно.
По този начин, процесът на изливане на восък може да бъде представена със следната схема: измиване след фиксиране, дехидратация в алкохоли с увеличаване на концентрацията (50 и 60% от 4-6 канала 70, 80 и 90% за 8-12 часа в двете части 100% алкохол за 12-24 часа), провеждане чрез смес от хлороформ и абсолютен етанол (2-3 часа), потапяне в чист хлороформ (две или три смени за 1 Vi часа) накисване в хлороформ-парафин (при 37 ° с 3-6 часа) при 56 ° с в продължение на 30 минути, 1 час) импрегниране на парафин (в три порции по 1 час VR), въведете parafin1.
В случаите, когато условията на труд, за да се намали времето на изготвянето на парафинови блокчета, че е възможно да се прилагат ускорени запълване. За тази цел, парче тъкан с дебелина 1,5-2 мм се поставя в чист (или 96%) от алкохол или ацетон (за фиксиране и дехидратация) в продължение на 1-2 часа, като по този начин получаване на единична заключване смяна.
Целта след това се провежда в продължение на два часа 1-1U2 промени чист хлороформ (в пещ, предварително загрята до 37 ° С) в продължение на 30-60 минути промяна в смес от хлороформ: парафин (1: 1), след това се потапят в парафин 2 пъти ( 45-60 мин) и се излива. В този режим на целия процес от вземане на проби от материал преди изливане отнема 8-9 часа. Въпреки това, качеството на препарата се влошава до голяма степен се дължи на бързото изтегляне на вода към алкохол (или ацетон). Ето защо, е необходимо използването на този метод, само в крайни случаи.
За да се намалят разходите за труд и подемно-транспортна gistol9gicheskuyu условия за обработка на стандартизация, създадени различни устройства за автоматизиране на процеса на подготовка за рязане (заключване, уплътняване, обезводняване, засенчване) и дори оцветяване.
1). Ако се използва вместо хлороформ ксилен, в съответните фази време намалява приблизително 2-кратно.
Техният принцип на действие се основава на автоматично движение на държача съда с порест материал да се третира чрез серия от чаши, съдържащи необходимите решения. Устройства, задвижвани от AC мрежа и снабдени с механизъм в състояние да изпълнява режим предварително зададено обработка по време на почти цикъл и за завършването му. Патриотичен индустрия произвежда два вида устройства - AT-3 и gistohromator.
Недостатък на устройството е невъзможността за обработка на режим индивидуализация различни части от структурата на органите в случай на тяхната едновременна подготовка невъзможност глоба диференциация чрез оцветяване, висока консумация на химикали по време на работа с малък брой обекти и други.

Получаване комбиниран парафинови блокчета

През последните години в лабораторията използва метод за едновременно пълнене на парчета от няколко сходни органи в едно цяло. За да бъде съвместните обекти пълнене, носени от акумулатора на алкохол в същото време и на етапа, когато е необходимо да се получи броя на крайната форма, нарязани ръбовете, така че правилната комбинация те могат тясно се придържат една към друга и в същото време да има различна форма, което позволява определяне на идентичността на всеки обект. След това битове прекарват заедно през междинна среда, парафин импрегниране и се поставят в калъп за леене в определен ред, опитвайки се да събере на едно място на региона в процеса на леене. Схема на парчета и тяхното предназначение се въвеждат незабавно в протоколната книга.
Тези блокове могат да се комбинират и отделно от вече напълнени парчета, като им дава твърдо състояние изисква форма и след това се поставя в гореща восък в топлинен баня. След пълното разтопяване на парчетата парафинови излива заедно в една единица. От успешно изпълнен в блока с по две, три или четири парчета, можете да се подготвите по-добри, плавни съкращения. Такива комбинирани филийки са необходими за хистохимическите проучвания. Оценка хистохимично реакция се провежда чрез интензивността на цвета на микроструктури за изпитване, което означава, че в сравнение секции трябва да имат една и съща дебелина и са в еднакви условия в провеждането както на хистохимично реакцията, и други лекарства обработка стъпки. Всички тези условия и се предлагат в този метод. В допълнение, много по-лесно микроскопия продукти и условията за едновременно изследване на подобни съкращения в цялостното зрително поле (при ниски увеличения).
Получаване на хистологични препарати от комбинирани блокове (разбира се, когато е оправдано) има редица технически и икономически предимства, тъй като намалява рязане на време и всички последващи етапи на обработка на секции и консумация на реагенти стъкло и други материали в директно пропорционално на броя на пълни парчета.
произвеждат блокове Стикер върху дървени блокчета. За тази цел от втвърден парафин скалпела на нарязани правоъгълен елемент, така че предметът от всички страни заобиколени от слой от восък е 1-3mm дебелина. След това, пускането на дървен куб парченцето твърд парафин се разтопи го гореща метална шпатула (или скалпел) се извършва със същия парафин блок с помощта на шпатула върху долната повърхност и натиснете надолу го бързо на куба.

Попълнете целоидин

Този метод е много често срещана практика в патологични лаборатории, както дълги накисване тъкани и попълването им в среда, без излагане на висока температура позволява да се осигури най-доброто запазване на микроструктури. Освен това, с този метод не е необходимо да се отстранят части от носителя на запълване.
метод Tselloidinovy ​​е необходимо за изследване на лесно деформируем материал, или стратификация (трахеалната стена интегрално очната ябълка и др.). Недостатъци на метода - продължителността на процеса на пълнене, ограничени единица време съхранение и неудобство на тяхното съдържание (в алкохол), и трудност получаване на тънки серийни срези.
В чиста форма целоидин е вещество, което е разтворимо в смес с етер. Използва се за изливане на 2%, 4% и 8% разтвори целоидин, които трябва да бъдат предварително подготвени.
Изходният материал може да служи като готов - венозна целоидин в плочки и целоидин получени от филм, фотографски и рентгенов филм. Трябва да се отбележи, че не е възможно да се използват най-различни филми за тази цел. Използваем филм трябва да се разтваря в абсолютен алкохол и етер.
Получаване на целоидин филм и рентгенови филми започва с отстраняване на емулсия слой, за който се поставя на филма за 20-30 минути в топла алкална вода (10-15% разтвор на натриев карбонат) и след това се промива с твърда четка за завършване пречистване на емулсията. След това филмът бе старателно се промива с топла вода, промива се с течаща студена вода в продължение на няколко часа и се суши при стайна температура. Изсушеният филм се нарязва напречно с ножица в широки ленти 5-10 mm и обезмаслени в хлороформ в продължение на 24 часа. След това частите се поставят върху чиста филтърна хартия и се сушат 10-12 часа, предварително покрити с лист хартия.
Стандартна целоидин също предварително нарязани на малки парченца (или протриване на обикновен кухня ренде) и се суши върху филтърна хартия при стайна температура до пълното втвърдяване (защитен от прах).

Получаване на разтвори.

За да се получи 500 мл разтвор целоидин, вземат 10 г изсушена целоидин, излива се в запечатана стъкленица се прибавя 250 мл абсолютен етанол и се оставя да престои в продължение на 24 часа, като се разклаща периодично (под влияние на алкохол целоидин набъбва). След това 250 мл безводен етер, разтваряне набъбналия целоидин.
По същия метод се получава 4% и 8% разтвори. Приготвени разтвори трябва да се съхраняват в добре затворени съдове да се предотврати изпаряване на течната среда и концентрацията на промените в разтвор. Най-добър за тази цел са химически колби с шлифовани запушалки земята и шапки. Шлайфане капачка трябва да се смазват с вазелин. В такива съдове целоидин решения могат да се съхраняват за дълго време без промяна на свойства.
Трябва да се помни, че етерът и суха целоидин силно запалими, и когато се работи с тях, за да се вземат всички предпазни мерки, предвидени за работа с леснозапалими вещества.
За tselloidinovyh необходимо да се използва само алкохол и безводен етер, за още по-малко количество вода за приготвяне на разтвори прави трудно да се импрегнира обект, и дава процеса на уплътняване, което от своя страна намалява качеството на блока. Тъй като етер за анестезия не съдържа вода, тя е много подходяща за получаването на целоидин. Технически въздух често замърсена вода, алкохол и други вещества, така че е необходимо предварително третиране. За тази цел Съдът се напълва с етер гранулиран калциев хлорид (шепа 1 L) и се оставя в продължение на 2-3 дни, след което внимателно се филтрира. Последната процедура, ако е възможно, трябва да се направи в аспиратор, стъклена затваряне на капака на фуния за да се предотврати изпаряване на етера (когато е необходимо да се има предвид неговото лесно запалимост). Филтруваният етер се прибавя натриев метал (5.3 грама в 500 мл) и запушалка, в която е поставена стъклена тръба, запълнена с калциев хлорид (за осигуряване на добива на водород и предотвратяване на кораба от водната пара, въздух). След 2 дни, обичайната контейнера плътно затворена капачка. Като такива, естерът може да се съхранява за дълъг период от време.
Ако не е сигурно, че въздухът изсъхне, е необходимо да се проведе на пробата. Флаконът с 2-3 мл етер се прибавя същото количество въглероден дисулфид и се разбърква. Появата на мътност показва наличието на вода.

Напояване целоидин обект - по-скоро дълга процедура. Първоначално напълно дехидратирани в абсолютен алкохол материал се поставя в смес от равни части от алкохол и безводен етер (целоидин разтворител), след това се прехвърлят в течен 2% разтвор целоидин които последователно като импрегниране заменя дебели 4% и 8% разтвори. Продължителността на накисване тъкани е пряко пропорционална на плътността и дебелината на резени и варира от 2 (за насипни обект 3-5 мм) за 6-7 дни във всеки разтвор. След завършване на импрегнирането на обекта се прехвърля в стъклена чаша с вертикални страни и плоско дъно и е изпълнен с нова порция 8% разтвор целоидин, така че да се намали обемът след запечатване среда два пъти (концентриране до концентрация 16%) се поддържа над парче слой 2-3 мм целоидин , А близо местоположението на обекта на повърхността причинява деформация на лекарства, дължащи се компресионни сили, възникващи по време на разтвора на кондензация.
След това матрицата се залива със снимки поставят в ексикатор върху решетка, и се поставя в чаша с хлороформ, които по двойки и се появява целоидин уплътнение на желаната консистенция. За да се определи времето за край на процеса, външната стена на чашата залепени хартиена лента с марка на начало и край (долната половина) ниво целоидин разтвор. Ние трябва да се избегне бързото конденз и регулиране на процеса, периодично да затворите мухъл. Чрез затваряне на края на целоидин повърхността излива в 70% алкохол и се оставя за през нощта. След намаляване на материал изпълнен под формата на правоъгълни парчета, така че около обект продължава целоидин слой с дебелина 2-3 мм. нарязаните могат да се съхраняват за дълго време в 70% алкохол под формата на слепени дървени блокове на кубчета и се nenakleennymi. В последния случай, всяко парче увити в марля, която се поставя на лист хартия с подходящ надпис, направено с молив.
Схематично, процеса на определяне на обекта за получаване на блок е както следва (с най-големите парчета или повече 1 х 1 cm).

1. Изплакнете в течаща вода в продължение на 24 часа.

Фиг. 62.
Напояване целоидин парчета Кисел.

1. Дехидратиран в алкохоли с увеличаване на силата (включително две промени на абсолютен алкохол) - 12- 24 часа във всяка алкохол.
2. Поставете обекта в смес от абсолютен етанол-етер (1: 1) в продължение на 4-20 часа.
3. Прехвърля се течността до 2% целоидин за 2-6 дни.
4. Прехвърляне на 4-6% целоидин за 2-6 дни.
5. За да се премести в разгара на 8-10% целоидин за 2-7 дни.
6. Изсипете свеж целоидин обект.
7. Запечатайте в хлороформ изпарения в ексикатор.
8. Изсипете 70% алкохол, нарязани на блокове и ги поставете в алкохол 70 ° за съхранение.

Времето на всеки етап е избран емпирично в зависимост от свойствата на материала, размера и качеството парчета целоидин на.
Има начин да запълни целоидин, при импрегнирането се провежда в един съд при постепенно повишаване концентрация целоидин (Kiselev) (фиг. 62). За тази цел, след напускане на материала в две промени в безводен алкохол-етер (1: 1) се поставят в запечатани с широко гърло буркан, в което се излива известен обем (50 или 100 мл) от прясно алкохол-етер. След това, в торбата се излива от марля частици сух целоидин в такова количество, че когато напълно разтворен концентрация разтвор е 8-10% (5 г на 50 мл). Кошница затвори с резба, така че само неговата долна повърхност опи spirt- етер, след което съдът се плътно затворен. Целоидинът разтваря постепенно и непрекъснато се увеличава концентрацията на разтвора. Терминът импрегниране 4-10 дни. Ако искате да се ускори разпадането на целоидин, буркан леко наклонена, ако бавно - вдигне чантата. В края на импрегниране на обекта е изпълнен по обичайния начин.
Имайте предвид, че бързото появата на повърхността на дебел филм целоидин (по време на сгъстяване) показва наличието на целоидин вода. При тези условия, печата ще бъде неравномерно и мътна среда може значително се влошава качеството на рязане и оцветяване. Препоръчителна материал освобождаване от целоидин (поставяне в безводен алкохол-етер) и се излива нова порция от безводен целоидин.
Ако в процеса на концентрация в целоидин въздушни мехурчета изглежда, че е необходимо да се излее си безводен капак алкохол-етер и щит чаша повърхност. Обикновено след това мехурчетата идват на самата повърхност, но ако не, тогава те се отстраняват чрез дисекция игла. Добре подготвени tselloidinovy ​​блок трябва да бъде почти прозрачна и да има консистенцията на дъвка училище.
Ако, обаче, съгласно условията на работата, необходима за да се намали времето за готвене tselloidinovogo блок, е възможно да се приложи метода на ускореното леене. За тази цел, на тънки парчета тъкан (дебелина не по-големи от 2 mm) се поддържа в две или три промени на 96% (или абсолютно) от алкохола в продължение на 6-8 часа (общо време) и след това се поставя на 12-16 часа дебелина (10- 12%) целоидин. След това блокът се нарязва, залепен върху дървен куб пресова под стъкло, относно следващата парче памук, напоена в хлороформ за 1-1 h / 2 часа. Съхранява както обикновено в 70% алкохол.
Трябва да се помни, че секциите за качество, приготвени от такива блокове, значително по-лоши от на блоковете, пълни по конвенционален начин. За да приложите метода на ускореното леене е необходимо само в крайни случаи.
Стикер tselloidinovyh блокове. Дървени блокове, предназначени за стикери tselloidinovyh блокове трябва първо да бъдат обработени за отстраняване на извлеци от тях. В противен случай тези вещества през блока за съхранение в алкохол в разтвор (или директно в целоидин), което значително намалява качеството на блоковете.
Най-често срещаният метод е, както следва. Многократно нагряват дървени блокове за няколко дни (след всеки алтернативен кипяща вода), след което се оставя да престои в продължение на няколко дни в 70-80% алкохол (или алкохол-етер) и след това внимателно се изсушават.
Етикет да бъдат отстранени от устройството tselloidinovy ​​алкохол, блотират с филтърна хартия и се поставят в долната повърхност на смес от алкохол и етер (1: 1) преди целоидин разтваряне (1-2 минути). След това повърхността на дървен куб (препоръчително е да се направи груба) прилага скалпел или шпатула няколко капки 12-16% целоидин, който е потопен в блока. Така че е необходимо да се избягва силен pridavlivaniya единица, като течност се измества и целоидин блок придържа свободно. Поставени са блокове 5-10 мин поставя в широко гърло, буркан с 70% алкохол, където те могат да се съхраняват за дълго време. Преди това те маркирани в молив.
За продължително съхранение единици трябва да следват цвета и алкохол в случай на възникване на жълтеникав цвят да се замени с нова част, така че пребиваващи в жълти оцветители препарати алкохол влошава.

Попълнете целоидин-парафин

Този метод комбинира предимствата на парафин и tselloidinovoy запълва. Употребата му се препоръчва за лечение на:. 1) тръжните обекти, които са лесно сгъстен когато леене на восък (мезенхимни тъкани, хемопоетични органи и т.н.) - 2) Органите, които са стратифицирани в рязане на блока в парафин (трахеята, кожата и т.н.) ...
Метод. Пране и обезводняване на стандарта. Тъй безводен алкохол материал се поставя в смес от равни части от алкохол и етер (4-20 часа), последвано от 2% разтвор на целоидин. След завършване на импрегниране (24-48 часа), обектът се прехвърля в чист хлороформ, където това е, докато не потъва под повърхността (30 минути - 1 час). След това материалът в същото време се прехвърля в нова порция хлороформ (време се регулира в зависимост от размера на парчетата и свойствата на материала). След обектно блотират с филтърна хартия и се прехвърля в стопената смес от хлороформ с парафин, които държат в продължение на 20 минути при температура от 58 ° С (след потапяне съдове парчета може да бъде оставен на масата до сутринта и дори няколко дни). След импрегниране и пълнене, както по време на нормална метод парафин.
Налице е модификация на този метод, съгласно който материалът се импрегнира със смес от равни части от 2% разтвор на целоидин и рициново масло 1-3 дни.
След това обектът се разтваря в хлороформ, който се променя три пъти за 1 час (за отстраняване на рициново масло). Следващите етапи като в леене на восък. Този метод се препоръчва за плътни обекти запълване (кожни, трахеята).

Попълнете желатин

Методът е подходящ за ембриологични проучвания, леене свободни тъкани и органи (не предизвиква набръчкване), с проучвания за идентифициране на мазнини и липиди. Нарязва на желатин блок само замразяване микротом.
За изливане получават две решения: а) 25% разтвор - 25 г натрошен или на прах желатин се разтваря във водна баня (при 37 ° С) в 75 мл 1% разтвор на фенол (за да се избегне изпаряване съд трябва да бъде затворен) - б) 12.5 % разтвор - 1 част от дебел разтвор се разрежда с 1 част топъл 1% разтвор на фенол за получаването на който в 100 мл дестилирана вода се разтваря 1 г фенол при непрекъснато разбъркване.
Сготвените желатинови разтвори излива в отделни тръби или други малки съдове части, подходящи за единично леене (разтворът се използват самостоятелно, тъй претопяване втвърдяване се влошава) и плътно се затварят.
Метод. Внимателно се промива материал се прехвърля от държача за импрегниране на първата течност (12.5%) разтвор на желатин за 3-20 часа (в зависимост от дебелината и свойствата на обекта), след това същия срок в плътен разтвор (25%) (целия процес продукцията в инкубатор при 37 ° с, в добре запушалка буркани в, за да се избегне изпаряване на водата и желиращи желатин, след това се излива нова порция 25% желатинов разтвор) се поставят в предварително загрята форми и се охлажда във вода, като се внимава, че не удари желатин (водата трябва предварително лято но се охлажда в хладилник). След втвърдяване на желатина намали квадратни блокове, които са за уплътняване поставя за 24 часа в 20-25% разтвор на формалин и след това се съхранява в 10% разтвор на формалин.
Ако блока уплътнение във формалин започне твърде рано, това е хлъзгав и чупливи. Отстраняването на желатинови резени, те се поставят в 10% разтвор на калиев хидроксид (КОН) за 30 минути и се държи в термостат при температура 37-40 ° С
След това срезовете бяха добре изплакнати с чешмяна вода и се оцветяват. по този начин не се премахне напълно желатина от съкращения.