Методи за оцветители - основа на хистология

Видео: Автоматична машина за боядисване на Leica ST5010 XL

Оцветяването с хематоксилин-еозин (определяне такива)

Този метод е най-честата хистологичните на практика, защото благодарение на комбинация от оцветители, принадлежащи на две противоположни групи, дава преглед на състоянието на изследваните органи и тъкани.
Хематоксилин - натурално растително багрило, който е разтворим във вода, алкохол и глицерин *.

Видео: оцветяване на косата: balayazh, shatush, Ombre, подчертавайки, тониране. Територия стил La Rouge

* Последното обстоятелство е противопоказание за заключение, глицерол срезове, оцветени с хематоксилин.

разтвор хематоксилин има основни свойства, което прави добро ядрото показва структурните компоненти, които включват нуклеинови киселини. Въпреки това, багрилото има свойството не хематоксилин и продукта -gematein окисление.
Еозин - изкуствен оцветител разтворим във вода или алкохоли, има киселинни свойства, петно ​​клетъчна цитоплазма розово.
Има много методи за получаване на багрилни разтвори на хематоксилин, но своята същност е една - му окисляване.
Това са най-често срещаните рецепти.
Sour Ерлих хематоксилин. В 100 мл 96% алкохолен разтвор на 2 г хематоксилин, се добавят по 100 мл дестилирана вода, след това с 100 мл чист глицерин, 3 г калиев стипца (химически чист) и 10 мл ледена оцетна киселина, разклаща се и се оставя да светне "зрял" за 14 дни , като се разклаща от време на време. За да се осигури постоянен достъп на въздух (процес хематоксилин окисляване) трябва да се съд с широко гърло и капак с входяща няколко слоя марля. Процесът на "узряване" на разтвора става бледа червена тъмно червено. В плътно затворен багрило задържа свойства за дълго време.
Хематоксилин Boehmer. В 10 мл 100% алкохол за разтваряне на 1 г кристален хематоксилин и се добавят 200 мл 10% воден разтвор на охладени и се филтрува поташ стипца. Решението е "зрял" в светлината на 4-5 дни, след което може да се използва. Преди употреба разтвор багрило се филтрува всеки път. С течение на времето, тя ще се развали.
Sour gemalaun Майер. В 1000 мл дестилирана вода за разтваряне на 1 г хематоксилин, добавя се 0,2 грама натриев йодат (NaIO3), 50 г калиев стипца (химически чист) и се разбърква непрекъснато, да се изчака пълното им разтваряне (флуида става виолетово-синьо). След това, 50 г хлорал хидрат и 1 г кристален лимонена киселина, при което разтворът става пурпурно червено. В добре затворен съд на химически чиста стъклена оцветител се съхранява дълго време.
Предимството на този метод - бързо окисляване хематоксилин натриев йодат, при което разтворът не изисква "узряване" и може да се използва директно за боядисване.
Получаване на оцветяване разтвор hematein: а) 1 грама фабрика hematein разтваря в 50 мл 96% алкохол (с леко затопляне) - б) 5 г калиев стипца (химически чист) се разтваря в 1 л дестилирана вода. След това двата разтвора се декантира, филтруват се и се добавят малко тимол (за съхранение). Използва се без "узряването". Разтворът е добре запазена в плътно затворен контейнер.
Получаване еозин 0.1 багрило се разтваря в 100 ml дестилирана вода.
Преди боядисване, е необходимо да се подготвят на работното място почистване настрана всички ненужни предмети, задаване на микроскопа и осветление към него, да се поставят в определен ред на ястия със съответните течности, проверка на "батериите" за обезводняване и избелващи агенти, филтърни бои решения, за да се подготвят покритие (и ако необходимост и при спазване) от стъкло и така нататък. д. Само тогава може да започне да се оцвети препарати.
Техниката на оцветяване. Ако се започне с определяне продължителността, тъй като тя зависи от процеса на фиксиране, естеството и свойствата на лекарството и се багрила и т.н. За тази цел отстраняват от дестилирана вода три стъкло с парче .. (Събирането лекарства за вода -. Виж предишния раздел) отстраняване на излишната влага около тях (в противен случай боята ще се разпространи през стъклото и се разрежда с вода) се поставя в хоризонтално положение и nakapyvayut пипета багрило разтвор за завършване съставът на покритието. След 2 минути отцежда оцветяващ разтвор * от един от стъкло и се поставя в дестилирана вода (за промиване излишък боя). Останалите две стъклото Освободеният от хематоксилин 4-6 минути, съответно. След почистване на задната страна на стъклото, лекарството се приема при ниско увеличение микроскоп (ако е необходимо, и за големи, покрити с препарат покривно). Когато се оцветяват, използвайки свободно плаващи раздели куки прехвърлени няколко парчета в боята, излива се върху часовниково стъкло или бутилка с тегло ниска, а след това през същите интервали от време, се отстранява, промива се с дестилирана вода, се изправи на чиста предметно стъкло и визуално наблюдавана в микроскоп.
Възможни варианти на резултатите а) ядро ​​боядисани в бледо лилав цвят без ясно разграничение микроструктури - подготовка nedokrash д п б) на сърцевината тъмно лилав (почти черен, но с червеникав оттенък), структурни елементи са неясни, цитоплазмата се боядисани - подготовка perekrashen- в) червено-лилаво ядро ​​с различен нуклеоли и хроматина, цитоплазма ярко черно-бял - нормално оцветяване.

* Багрилото се излива в съда, където се разтваря, както е подходящ за по-нататъшна употреба.

След като се установи оптимално време хематоксилин, в рамките на 3-5 минути излишната боя се промиват в дестилирана вода и след това се поставят лекарства в чешмяна вода, където са те да придобият син цвят (10-14 минути) поради синка за пране ядра в слабо алкална среда (чешмяна вода може да бъде заменен дестилирана леко това алкализира с амоняк). След това отново лекарството се поставя за 3-5 минути в дестилирана вода.
В допълнение към по-горе метод прогресивно хематоксилин оцветяване на ядрата съществува метод регресия. Парче изписана ядра след промиване с дестилирана вода се поставя в 1-6 подкислява с 70 ° алкохол (5-7 капки силна солна киселина в 100 мл алкохол) и контролиран цветен микроскоп монитор отслабване (пурпурен отслабва и амплифицирани червеникаво тон ядра) , Освен конвенционално лечение.
Hematein петна ядра и киселинна gemalaunom Mayer произвеждат по същия начин, но лекарството е особено добре изплакнете необходимо, тъй като остатък unremoved киселина може да наруши оцветяване.
В края на изплакване оцветени с хематоксилин препарат в дестилирана вода, тя се екстрахира отново и излишната влага се отстранява nakapyvayut еозин разтвор. оцветяване време също е избран емпирично чрез вариране на експозицията на 1 до 4-5 минути.
Вариантите са: а) цветно цитоплазма и извънклетъчната образование са едва забележими розово или жълто оттенък - наркотик nedokrashen- б) общия фон на интензивен червен цвят, микроструктура вижда ясно, ядрена граница е неясна - наркотик perekrashen- в) общия фон на умерено розово-жълт цвят, ядрото ясно konturiruyutsya - оцветяване успешна.
След еозин оцветяване е завършена, багрилото се излива в бутилката (като хематоксилин и може да се използва многократно), препаратът се промива с дестилирана вода, се провежда чрез повишаването на концентрацията алкохоли карболфуксин-ксилен, ксилен и вградени в балсам.
Трябва да се знае, че еозин лесно се промива с вода и алкохоли, ниска концентрация, следователно притежават лекарството през течността трябва бързо потопени само веднъж и само в 96% и 100% алкохол може да се съхранява в продължение на 1-2 минути. Ако лекарството се изписана еозин, след отстраняване на излишната боя, увеличаване измиване време (в дестилирана вода) и се провежда чрез слаби алкохоли.
За подобряване на оцветяването свойства прилагат еозинови багрило подкисляване с разтвор на оцетна киселина (1 капка на 3% оцетна киселина в 100 мл от багрило).
използват гореописаните двойно оцветяване метод преглед лекарства и други.
Има бои за оцветяване в червено ядро ​​(шафранинов, кармин стипца) и цитоплазма - зелен (зелена светлина), оранжево (Orange G).

Видео: Методи раздели на срочно наети служители

Оцветяване на Heidenhain желязо хематоксилин

(Разрешаването на някой, но най-добри резултати, след като сублимират и хромирани ключалки)

Iron хематоксилин за разлика от по-горе решения хематоксилин петното не само ядрото, но и различни цитоплазмени и някои вътреклетъчни структури. Този имот е въз основа на факта, че преди изготвянето на боядисване е гравиран в разтвор на железен стипца, които се възприемат по различен начин от различни тъкани елементи. Последваща обработка гравиран разтвор тъкани хематоксилин води до образуването на черен влак gemateinovogo лак, който в процеса на диференциация на филийки частично от тъканта отново в разтвор. Така, вида на желязо оцветяване с хематоксилин - типичен регресивен багрило.
От гореизложеното следва, че чрез вариране на времето за ецване, оцветяване и диференциация, е възможно да се получи различна крайна ефект в зависимост от целите на изследването (идентифицирани само ядрена структура, или цитоплазмена и извънклетъчна образуване двете).
Получаване на разтвори. 1. Разтвор на железен стипца. Разтваря се 10 г железен стипца (сулфат желязо амоняк) в 100 ml дестилирана вода. Можете да ядете само леки виолетови кристали. Жълт, зелен, белезникави кристали трябва да се избягват.

1. разтвор хематоксилин. Разтваря се 1 гр хематоксилин в 10 мл 96% етанол и се разрежда с дестилирана вода до 100 мл, отбелязвайки, нивото на течността в съда и след това се оставя да "зрял" за 4-5 седмици, осигурявайки постоянен достъп на светлина и въздух (за това е необходимо за покриване на гърлото на контейнера сгънати няколко слоя марля, и като изпаряване добави вода към първоначалното ниво). Разтворът се променя по време на зреенето светло кафяво до тъмно кафяво. Преди използване разтворът се разрежда с равно количество дестилирана вода.

Ако е необходимо да се осигури разтвор бързо готвене хематоксилин (без климатик), след това към разтвор, получен съгласно горната рецепта се прибавя 0,1 г натриев йодат (NaIO3), които бързо се окислява в хематоксилин и hematein прави багрило, подходящи за използване в рамките на 1 час след разтварянето ,
Провеждане оцветяване. Предварителна обработка. секции са в дестилирана вода, прехвърля се в 2.5% разтвор на железен стипца (получен чрез разреждане с дестилирана вода източник 10% разтвор) и се оставя в продължение на 3-12 часа.
Метод за заглаждане може да бъде значително ускорено (до 1-3 минути) при 37 ° С чрез поставяне на контейнера с филии в термостат В края на ецване разтвор се съхранява.
Оцветяване. След промиване с дестилирана вода, секции се поставят в разредена (два пъти) хематоксилин разтвор за 1-36 часа, докато завърши потъмняване (пребоядисвам добре от nedokrasit). Както при обличане, време боядисване може да бъде съкратен (2-3 часа - 30 минути) чрез поставяне на контейнера с резени боядисване в инкубатор при 37 ° С
Диференциацията. Това е най-важният етап на оцветяване. Оцветените срезове се старателно измити в две или три порции дестилирана вода (7- 10 минути) и се поставят в разтвор на железен стипца, служи за ецване. Степен на диференциация периодично наблюдава под микроскоп. За този раздел се промива с дестилирана вода и се обработва в желаната увеличение (докато водната потапяне, покрита с покривно предварително). Ако процес диференциация е бързо, е необходимо да се намали концентрацията на железен разтвор стипца, разреждане с дестилирана вода.
След като се получи желаната степен на оцветяване, секциите се промива старателно в движение или често сменяем чешмяна вода в продължение на 10-12 минути (недостатъчно диференциране изпиране течни състави, получени в резултат на промяна на цвета), и след това се изплакват с дестилирана вода, обезводнени, и вградени в осветяване балсам.

Бързо метод на оцветяване с хематоксилин желязо Gurvich

В случай на необходимост от незабавно оцветяване на срезове с хематоксилин Heidenhain желязо се използва в метод за бърза Gurvich (същите реагенти).
След отстраняване на стъклото от частта на дестилирана вода, попива парче гладка филтърна хартия и се покриват с 2.5% разтвор на железен стипца. След това, на задната страна на стъклото се нагрява над лампа алкохол за производство на пара (не прегрее!), И дава малко да се охлади процедура отопление се повтаря 2-3 пъти. След стипца се изпразва без промиване парче nakapyvayut хематоксилин и отново се нагрява до пара. Цветни води нагоре, докато раната не придобива синьо-черен цвят. След това се промива с дестилирана вода се излива стипца и следват хода на диференциация в микроскоп. След завършване на диференциация парче внимателно се промива без стипца (в два или три промени на дестилирана вода и след това в движение), обезводнени, и вградени в осветяване балсам. Когато се работи с безплатен плаваща точка се препоръчва да ги залепят върху предметно стъкло, веднага след изваждане от водата и поведение оцветяване, както е описано. Обработка на секции могат да дадат неравномерно оцветяване в свободно плаваща държава.
Общи бележки. Горното описание офорт, оцветители и диференциация зависи от много фактори (качество на реактиви изследвани собственост на обекта, цели и задачи на изследването и т. Г.) и е определен емпирично за всеки отделен случай. Най-важният етап оцветяването е диференциацията, тъй като отделните структурни компоненти на клетките и тъканите при различни скорости връщат натрупаната багрило. Бързият обезцветява хомогенна част от цитоплазмата и след това гранулирани компоненти и най-малко структурни елементи на ядрото.
Когато се работи с tselloidinovymi филийки, трябва първо да се освободи лекарството от целоидин (вж. Съответния раздел), тъй като тя е значително по-оцветени с хематоксилин и железен обезцветява по време на диференциация. Разтваряне трябва да се извърши преди целоидин ецване в железен стипца, тъй като след като разтворимостта влошава значително.

Видео: Част 29. Проблеми в coloristics. Sedin. Част 1.

етикетиране пързалки

След секциониране етикети (или непосредствено преди него) на плъзгача трябва да се прилага към съответните символи. Това е особено важно в серийни секции и обработката на експерименталния материал. Специфичното съдържание на приложението зависи от естеството на изследването и от настройките, направени в дадена лаборатория. Най-сигурният начин - vytsarapyvanie специални знаци моливи изби с твърд метал тип "спечели". По-малко надеждни надписи мастило. Съществуват различни техники за мастило чрез обработка в течни среди не се отмиват или намазани: а) преди залепване секции единия край на плъзгача, смазана протеин с глицерол, нагрява на огън до дима след охлаждане се прилага към активната част на необходимите символи и отново температура над plamenem- б) прилагане на подходящ букви, и след това намалена в тази част на прозореца 1-2% разтвор целоидин за образуване на защитен филм и други подобни. г.