Оцветяване и заключение секции - на базата на хистологията

Видео: Обобщение на хистологични проби под покривно.

За парче получава по един от горните методи, е възможно да се изследва в микроскоп, е необходимо, че структурните компоненти на съставните тъканите са добре различими при преминаваща светлина, и че границата е защитен от възможно замърсяване и повреждане. Ето защо, по-нататъшно намаляване на неговата обработка включва боядисване, избелване и заключение.

Общи бележки

Въпреки факта, че части от живопис, има дълга история, до този момент напълно неясен същността на механизмите на действие на много бои. Несъмнено само, че в основата на микроструктури оцветяване тъкан са физико-химични процеси. От физически фактори трябва първо да се отбележи, феномен на дифузия (проникване) адсорбция (абсорбция повърхност) и отстраняване (дълбоко импрегниране) багрилото и разтворимостта на химичното вещество - електролитни разтвори и багрилни свойства на тъкани самите. Еднакво важно е плътността на тъканите и dispersiveness багрило. Първото свойство определя последователността на оцветяване отделните структури, а вторият - на скоростта на процеса на оцветяване.
Тя се основава на свойствата на електролитно отделяне използва в практиката на хистологични багрила в три групи: основния, киселинни и неутрални.
Основният багрилото е багрило база или негова сол и оцветители клетъчни и тъканни структури на киселинен характер, като хроматин ядро, съдържащо ДНК и ендозом, съдържаща РНК. Следователно терминът базофилия (нежен базови) да определят тъканни компоненти, оцветяване с основни багрила (thionine, хематоксилин, метил зелено, и т.н.).
Киселина багрило - багрило киселина или нейна сол, при което той оцветяване материал и частици от основния характер, например, гранули от еозинофили, цитоплазмата на някои клетки на предния дял на хипофизата и т.н. Следователно терминът oksifiliya (ацидофилни - нежен киселина). Тъканни елементи оцветяване кисели багрила. В тази група вещества включват еозин, еритрозин, кисела fuchsine, конго червено и др.
Неутрален багрилно съединение е образувана от водни разтвори на киселинни и основни багрила (багрилно съединение с киселина база багрило). Тази група включва Судан, eozinovokisly метиленово синьо и др.
Не трябва да се бърка с неутрално багрило смес неутрално багрило, характеризираща се с едновременното присъствие в разтвор на основни и кисели багрила. Терминът неутрофилия Същото важи и за резултатите от оцветяване с двете багрила групи, тъй като отразява собственост на багрилото не и баланса между киселинни и основни свойства на покрити елементи.
Трябва да се помни, че качеството на цвета и устойчивостта й може да окаже значително въздействие метод фиксация, предварително и след лечение препарати. Ето защо, ние трябва стриктно да спазва всички насоки и общите правила на оцветяване.
Също така трябва да се подчертае, че по-голямата част от неспецифични хистологични багрила, т. Е. не разкрива химичната природа на компоненти тъкан. Те могат да се използват само за изучаване на морфологичните особености на микроструктури.
Багрила, използвани за хистологични цели, разделени на естествени и изкуствени.
Съществуват няколко вида на хистологичен оцветяване: прогресивно, регресивно, преки, косвени, прости и сложни.
Прогресивно оцветяване - е метод, при който филии са в багрило, докато, докато те достигнат изискваните оцветяването ниво.
Регресия - пребоядисвам първите секции, и след това се довежда до желания цвят чрез промиване с подходяща течност, която позволява по-ясно разграничение отделните елементи тъкани.
Ние винаги трябва да имате предвид: а) от улея течността внимателното отстраняване (в противен случай тя ще продължи да работи и ще наруши резултат от цвета) - б) от предпочитаната използването на тънки srezov- в) че се развеждат багрила дават по-добри резултати, отколкото силните решения (дебел разрез и висока концентрация на диференциацията на багрилото трудно и води до неравномерно цветни части) - г), че цветът трябва да се извършва под контрола на микроскопа.
Използването на регресивни техники за оцветяване изисква определено умение, което се придобива постепенно.
Директен оцветяване - оцветяване обект директно в разтвор на багрилото, непряко (байц) - парче оцветени желания багрило само след специална предварителна обработка байц багрила.
В един прост оцветяване едно багрило се използва. комплекс формулировка оцветяване включва третиране няколко багрила (две или повече) едновременно или последователно (вж. хематоксилин-еозин оцветяване метод Van Gieson).
Всички методи за хистологично оцветяване могат да бъдат разделени на две основни групи: а) Изследването използва за получаване на общата прогнозна представяне на обекта на изследване (боядисани предимно ядрото и цитоплазмата на клетките) - б) специално, които позволяват да се боя точно тъкани и клетъчни елементи, които изследователи интерес (клетъчна органел, влакнести структури, и така нататък. д.). Методи съставящи втората група, са по-сложни и изискват специални методи на фиксиране.
За да получите добри резултати с всеки метод за оцветяване на хистологични препарати и е необходимо да се спазват определени правила.

1. Оцветяващи разтвори трябва да са чисти, така че всяко багрило трябва да се филтрува преди употреба, и водният разтвор, получен само с дестилирана вода.

Фиг. 77.
Местоположение биологични очила (батерийни) за последователни точки обработка залепени към стъклото (депарафиниране, дехидратация).

1. Предпочитание: а) оцветяване ниска концентрация за дълго време преди преходно оцветител високо kontsentratsii- б) използването на регресионни методи.
2. Внимателно извърши всички процедури в подготовка за боядисване на кройката и пост-обработка.

техниката оцветяване

Адванс подготовка. Преди да се пристъпи с оцветяването на секции, те обикновено се подлага на специална предварителна обработка, естеството на които зависи от материала и фиксиране методи секциониране.
Парафинови секции изискват най-изтънчените обучението. Тъй като восък не разполага с достатъчно прозрачност и възпрепятства оцветяване процес (хистологични багрила - е водни или алкохолни разтвори, слабо проникващи тъкан в парафин), тя трябва да се отстрани от среза. За това намаление се подлага на депарафиниране - на обратен процес на този извършва по време на подготовката на обекта на запълване в парафин, разрязани т.е. последователно извършва чрез парафинови концентрация разтворител алкохоли връзката надолу и се поставя във вода ... На практика това се осъществява по такъв начин.
Човек може да замени 96% алкохол, за да замести част от абсолютен етанол, а вместо това се използва 70% 80% или 60% алкохол. Важно е да се запази само на концепцията.

Обозначение биологични чаши (или високи бутилки тегло), се излива в съответните решения и разположен в последователност (Фиг. 77), която позволява извършване на манипулации следната схема.
Забележка. В случаите, когато материалът е фиксиран в течности, съдържащи живак дихлорид участъци трябва да се подложи на по-нататъшна обработка, след поставянето им в 96 ° алкохол йодиран алкохол. Времето на престой на изключване на разтвора се регулира емпирично чрез наблюдение под микроскоп за разтваряне живак дихлорид утайки. Тъй като йод неблагоприятно засяга много багрила се отстраняват чрез секции след третиране (в 70% алкохол) разтвор giposulfata 0.25% до изчезването на жълтеникав цвят. След получаване giposulfata прането в дестилирана вода.
Tselloidinovye секции могат да бъдат боядисани, без да сваляте целоидин. В тези случаи, дяловете на 70% алкохол (в които се съхраняват или в която се събира в процеса на рязане) се прехвърля в 50% алкохол и след това с дестилирана вода. Ако се използва багрило петно ​​целоидин, последният се отстранява чрез поставяне на парче в една от целоидин разтворител (смес от равни количества от абсолютен етанол и етер, ацетон, метилов алкохол). След разтваряне целоидин парче се обработва по същия начин, както в депарафиниране (низходящ концентрация алкохоли - вода).
Желатинови секции освободени от желатин, поставяне в леко подкиселява дестилирана вода се загрява до 37 ° С Ако устройството се подлага на допълнително уплътняване във формалин, след това се отстранява желатинът не е възможно, и че в някои случаи може да попречи микроскопия.
Замразени срези не изискват предварителна обработка, тъй като обикновено те се събират при рязане в дестилирана вода.
Предварителна обработка и след боядисване може да бъде подложен на двете залепен към пързалки и свободно плаващи секции. В първия случай, използвайте биологични чаши, специална клетка, високо тегло бутилки. За да се увеличи пропускателната способност, очила с резени подредени по двойки страна, не ръба носител (обратно) един с друг и разположени в триъгълник (фиг. 78), или (в по-голям контейнер), разположени двойки една след друга, разделени от използване на различни инструменти (извито стъкло или метална плоча, и така нататък. д.). За да работите с безплатни-отрязъци използвани стъклен, ниски бутилки с тегло или чаши. Не поставили филии фаянс се прехвърля от един към друг с чаша (или метал) на куката или шпатула и стъкло - с пинсети.

Фиг. 78.
стъкло Местоположение с резени в чашата.
Съдове трябва да бъде ясно етикетирани и подредени в определен ред, предоставяща желаната последователност на работа.
Забележка. При прехвърляне на секции от един разтвор на друг трябва да се гарантира, че последващото част на течност възможно най-малко замърсени предишния (по-специално, когато се движат от ксилол алкохол). За да направите това, прехвърлете слайдовете и свободно плаващи секции се опитват да се осигури максимална течност отток, осигурявайки в същото време да се гарантира, че кройката не изсъхна (изсушаване забележимо намазали нарязани). Предметните стъкла се подреждат по двойки, трябва да изключите и бързо изсушаване на гърба на филтърна хартия или плат, като се внимава да не се смесват отстрани. Също така трябва да бъдете внимателни, когато намаляване и премахване на изрезките от стъклото, защото в този случай може да се почеса по секции.
Трябва да се промени навременни решения, което им пречи да прекомерно замърсяване.
Ако срезове в хода на по-нататъшна преработка се отлепва от стъклото (използвайки различни киселинни или алкални разтвори или недостатъчно трайно свързване), след това може да се коригира чрез прилагане tselloidinovuyu защита. За тази секция на вода поставени последователно с 70% и 96% алкохол, след това стъклото се потапя в разтвор на 0,5-1% целоидин, отстраняването се оставя да изсъхне малко (не пълно изсъхване!) И се поставя в 70% алкохол.

Фиг. 79.
Устройство за едновременна обработка на голям брой очила със филийки.

Резултатът от тези манипулации парче и прилежащите части на плъзгача tselloidinovoy покрити с тънък слой, с което се постига чрез повишаване на частта и върху стъклото. След това секциите се промиват в дестилирана вода и се оцветяват.
Провеждане оцветяване. Когато оцветени секции са прехвърлени на водни бои дестилирана вода и оцветяване с алкохол - от алкохол директно към подходяща концентрация оцветяващ разтвор (директно оцветяване) или в първата течна офорт (непряко оцветяване). Когато лекарството придобива желаната интензивност цвят се промива във вода (или алкохол), за да се отстрани излишната боя и след това, ако е необходимо, се диференцират в подходящ течен. Излишната боя се отмива толкова дълго, колкото той не престава да се движи от съкращаването на промивна течност.
Оцветяване на срезове залепени стъкло, може да се осъществи както чрез поставянето им в разтвор на оцветяване и оцветител nakalyvaniya срязване. В първия случай се използва стъклени чаши, съдове или специални метални стелажи, което позволява едновременно да се боя голям брой (40-50) на стъкло (фиг. 79). За оцветяване убождане в плоски плочи или тарелки се поставят успоредни стъклени пръчки, които се полагат върху стъклени слайдове. За да не стик измества, техните краища са свързани чрез гумена тръба. След това срязване чрез пипета разтвор nakapyvayut
багрило. Ако петното е дълъг, за да се избегне изпаряване на мястото на боя парче е покрита с малка чаша часовник или чаша. Подобен ефект може да се постигне чрез поставяне на стъкла с багрило накапва в блюдо на Петри, в същото време поставяне на номер на вълна, напоена с вода. След като чашата е затворена, овлажняване се появява, което води до значително намаляване разтвор изпаряване оцветител. Оцветяване безплатни сечения, както в предварителната подготовка, са в Buxy или стъклен.

Видео: H & E петно

Видео: РП FNKTS: комплекс цвят и заключения Prisma-Film