Крепежни - основите на хистология

Видео: База под сянката. Търсите най-добрия.

Средствата за фиксиране и тяхното приложение

Приложими ключалки са разделени на две основни групи: 1) определяне на веществото (прости скоби) -
2) задържане на сместа (сложни ключалки). Има много и от двете. Това ръководство съдържа най-често срещаните улова.

прости раздели

Формалин (формол). Формалин е най-евтиният и най-често срещаните фиксатор. В чист вид е светъл, силно ароматна течност, състояща се от 40% воден разтвор на формалдехид. За предпочитане се използва 10% воден разтвор, към който една част формалин (т. Е. 40% разтвор на формалдехид) се разрежда с 9 части вода. Изисква се разтвор за чешмяна вода, така че дестилирани причини подуване на тъканите. Широкото използване на формалин се дължи на редица свойства: а) висока степен на разпространение б) способността да се поддържа добра форма, цвят и структура на тест obekta- с) да има траен ефект на заключване (до няколко години), не значително нарушаване на качеството materiala- ж) и запазване на мазнини и липиди. Висока дифузия капацитет и незначителен необмислена действия на формалин позволи сравнително бързо и дълбоко прониква в тъканта, която ви позволява да запишете части от размера на или повече от 1 см тяло, а ако е необходимо, доста големи тела изцяло.
определяне на тъкан във формалин време на 24-48 часа. Нормално формалин, обикновено се състои от смес на метилов алкохол и мравчена киселина, количеството, което увеличава под въздействието на светлина.
При охлаждане, мътност появява във формалин разтвор се утаява като бяло твърдо вещество (параформалдехид). Същото се наблюдава утайка по стените на съда и изпаряването на формалин. Следователно, формалин трябва да се съхранява в тъмно плътно затворени стъклени съдове при температура не по-ниска от 9 ° С
Неутрализация на формалдехид. Добавка формалин мравчена киселина дава разтвор леко кисели по природа, което е нежелателно при прилагането на редица методи на изследване (някои реакции хистохимични посребряваше разтвор на сребърен нитрат). Процесът е много проста неутрализация формалин: калциев карбонат се излива в съд (или магнезиев карбонат) в такова количество, че долната част на образувания слой дебелината на 1,5-2 см формалин след това се излива няколко пъти разклащат енергично и се оставя да престои 24-48 часа .. през това време разтворът се неутрализира.
Страничните ефекти на формалин. Дългосрочно съхранение на лекарства в концентриран разтвор на формалин дава прекомерни тъкани плътност, допълнително усложнява работа и намалява качеството на препарата. Може да елиминира този недостатък чрез поставяне на материала до 2 седмици в 1% разтвор на сребърен нитрат или 10% разтвор на лимонена киселина. Дългосрочно съхранение в 10% разтвор на формалин също води до подуване на обекта, който трябва да се забравя, когато се измерва след фиксиране.
При определяне на формалин препарати често се появява тъмно кафява кристална утайка - в резултат на взаимодействие с формалин тъкани са на хемоглобина. Той се отделя чрез поставяне неоцветени секции 1-5% разтвор на амоняк или 70% етилов алкохол за различни периоди от време (от 5 минути до 4 часа). Препаратът след това се промива добре с и се обработва по-нататък.
винаги Трябва да се помни, че дългосрочен ефект на формалин изпарения дразнят лигавиците. Омокрящите кожата тен ефект прави формалин, и след многократно често контактна екзема е суха. Ето защо, преди да се дисекция на формалин препарати slaboammiachnuyu поставени във вода (миризма) и работи с гумени ръкавици (ако е възможно при засмукване устройство).
Етилов алкохол. Действието на заключване се извършва поради отнемане на вода от протеини тъкан и коагулацията. Въпреки редица отрицателни свойства алкохол (клетъчна свиване в резултат на бързото изтегляне на вода, разтваряне и екстракция на мазнини и хемоглобин), е като фиксатор е широко използван в микроскопичен техниката. Това е така, защото етилов алкохол носи бързо фиксиране, което не изисква обезводняване тъкани преди изливане в парафин и целоидин. Като химически активна субстанция, алкохол е особено подходящ, когато хистохимични изследвания. Той е добре запазена вещество като муцин, гликоген, пикочна киселина, желязо, калций, които са лесно разтворими в други задържащи течности.
Най-често се използва 96% и абсолютен етанол. Някои автори препоръчват също с концентрация от 80 и 90%. време за фиксиране зависи от материала :. за тънки филми - 15-30 минути на парчета с дебелина 3-4 мм - 2-4 часа, поради факта, че алкохолът е по-лек от вода, тя се екстрахира от тъкани, потъва към дъното. Следователно, при парчета от материала трябва непременно да се приложат дебел слой от памук. Прекомерното наркотици остава в алкохол причинява прекомерно уплътнение тъкан, което е лошо за неговата последваща обработка.
Метилов алкохол (метанол). Безцветна течност, в чиста форма прилича на миризма етилов алкохол, същата техническа (суров) метанол има неприятна миризма, причинена от смес от други вещества. Микроскопското техника се използва под формата на абсолютен алкохол лишени от примеси за кръвни намазки фиксиране. Най-добре е да се използва метанол, за да се осигури анализ.
Трябва да се помни, че метанолът е мощен отрова, изисква спазването на правилата за използване и съхранение, предвидени токсични вещества от група А.
Ацетон. През последните години все повече се използва в хистологичните лаборатории за целите на хистохимично фиксиране е поради лекотата, с ацетон, възможността за бързо решение и да го поддържа в много химични съединения, включително активността на много ензими. Недостатъкът -Violation цитологично тънка структура. се прибавя Използване бъде безцветно (безводен). Заключване може да бъде като парчета тъкан (вж. Стр 157), както и разрез. Получен по криостатни срези изправени четка върху плъзгача се прехвърля в запечатан чаша със студен (5-10%) и ацетон се поставя в баня от сух лед или в камерата за криостат. определяне време зависи от дебелината на участъците (5-10 m средно може да се съхранява в продължение на няколко дни).
Сред други фиксиращи средства трябва да бъдат споменати живак дихлорид (корозивен сублимиране), соли на тежки метали (кобалт, платина, уран и други подобни. Г.), И киселина (оцетна киселина, трихлороцетна киселина, пикринова, осмий, хром, и т.н.). В чиста форма, тези съединения се използват рядко, но те са неразделна част от много фиксиране смеси.

Определяне смес (сложни ключалки) и тяхното използване

Liquid Мюлер. В момента на прилагането му в чист вид е ограничен. Въпреки това, той служи като изходен разтвор за получаване на такива общи фиксатори като течност Zenker е, Horta, Максимов и сътр .: Структура
калиев дихромат 2,5 гр
Натриев сулфат 1гр
Дестилирана вода 100 мл
За по-добро разтваряне на калиев бихромат се препоръчва за затопляне на вода.
течност (sulemovaya смес) Zenker на. Един от най-добрите клипове за приготвяне на препарати за преглед и подготовка за серия от тънки хистологични изследвания. Тя осигурява добри Възможност за тъкани. Съставът и начина на употреба:
100 мл Mueller течен живак дихлорид (HgCl2) 5 г ледена оцетна киселина, 5 мл
(Добавени директно към равно количество формалин може да бъде заменен от Галера преди upotrebleniem-).
Дебелина на записаните парчета не трябва да надвишава 5 мм. Време определяне 1-24 часа в зависимост от дебелината и свойствата на обекта.
Последващи действия лечение. След щателно промиване с течаща вода в продължение на 20-24 часа (водата трябва да бъде безцветни) парчета се поставят в 70% алкохол, за да се отстрани йод от тъкани живак дихлорид утаява. За тази цел, 70% алкохол се прибавят няколко капки 90% алкохол, съдържащ 100 мл 2 грама йод и 3 г калиев йодид, за да се получи разтвор на силен цвят чай. Изпирането на живак дихлорид се провежда в няколко порции йодирани алкохол, той променя след 18-24 часа преди прекратяване на осветяване (живак дихлорид утайка разтваряне обезцвети алкохол).
След фиксация, пълнене течност Zenker се препоръчва при целоидин или целоидин-парафин, тъй като парафин пълнене води до значително свиване и набръчкване на тъканни структури.
течност Максимов (Zenker-формол). Това всъщност е модифициран течен Zenker, където ледена оцетна киселина се замества с формалин. Фиксаторът се използва широко за проучвания хематология. Тя дава добро оцветяване на кръвни клетки и им позволява да се идентифицират специфични детайлност.

Видео: КОЖА FINGER SKIN дебела кожа хистология

Съставът и начина на употреба:
течност Mueller
калиев дихромат 2,5 гр
Натриев сулфат 1гр
Дестилирана вода 100 мл
5 г живачен дихлорид
Формалин 10 мл

време за фиксиране на 6 часа. Дебелината на парчета не по-голям от 5 mm. Допълнителна обработка и пълнене на същото, дори след фиксиране в течност Zenker на.
Ако течност Максимов се добавят 10 мл 2% разтвор осмиева киселина и се увеличи времето на фиксиране до 24 часа, може едновременно да получат osmirovanie мазнини.
Забележка. Mercury дихлорид е мощен отрова, така че консумацията на реагент и съхранението изисква съответствие с правилата, предвидени за групи вещества А.
Фиксиране на Navashin-Крилов. Определяне този метод дава добри резултати, когато оцветени ядра и протоплазматични структури с желязо хематоксилин. Състав Navashin заключване:
Хромна киселина 1% разтвор на 10 мл
Формалин 10% 10 "
Дестилирана вода 90 "
Ледена оцетна киселина (добавя непосредствено преди фиксирането) 2 '
Парчетата от 5 mm в дебелина трябва да бъдат записани 4-6 гл след това внимателно се изплаква с вода (24-36 часа) за отстраняване на остатъци хромова киселина, които нарушават оцветители.
GI Крилов препоръчва преди измиване пренос бита чрез няколко порции 5-10% формалин до прекратяване жълто оцветяване разтвор (формалин отстраняване на хромна киселина от тъканта). Тази процедура намалява времето на промиване във вода.
Bouin течност. Той е един от най-добрите улова. Относително бързо прониква в тъканите, което води до леко (2,5%) от тяхната компресия. Много добри цветове тъканни структури. Използва се като лекарства за преглед и за тънки изследвания и за фиксиране на ембриони.
Съставки:
наситен разтвор на пикринова киселина 75 мл
Формалин 25 "
Ледена оцетна киселина 5 '
Източване на течности произведени изброени непосредствено преди фиксиране. Тъй като пикринова киселина е слабо разтворим във вода, е необходимо да се получи наситен разтвор предварително. Съдът се излива 25-30 г кристален киселина и 1 литър гореща дестилирана вода. Излишната киселина при охлаждане се утаява и може да се използва при получаването на нова партида от разтвора. Разтворът може да се съхранява за неопределено време.
Продължителност фиксиране материал 2-24 часа в зависимост от големината на обекта. Въпреки това, по-дълго (няколко дни) парчетата остават на фиксатора не понижава качеството на фиксиране и последваща обработка.
След определяне на прехвърля в 70-80% алкохол материал (за отстраняване на пикринова киселина), която е 1-3 пъти промяна. Изработване попълнете парафин.
Забележка. Обект, фиксирани в течност на Bouin, не е напълно напоена целоидин.
Liquid Carnoy. Има добра фиксатор за хистологични изследвания (ядро), и за много хистохимични методи (нуклеинови киселини, протеини, полизахариди). Недостатъкът е леко свиване на цитоплазмата и съединителната тъкан.
Съставки:
Абсолютен етанол 60 мл (могат да бъдат заменени без
96% алкохол)
Хлороформ 30 "
Ледена оцетна киселина 10 "
Carnoy течност получен преди фиксиране. Парчетата от 5 mm се фиксират за 1-5 часа (в зависимост от дебелината на обекта). След фиксиране парчета директно прехвърлени в абсолютен етанол (ако фиксатор се получава в 96% алкохол, парчетата трябва да се изплакнат 2-3 пъти в 96% етанол, където, ако е необходимо, те могат да бъдат оставени в продължение на 2-3 часа).
Забележка. Трябва да се внимава, че материалът е бил в аванс за не повече, отколкото е необходимо за пълното му импрегниране като удължаването фиксиране подобрява сцеплението и запечата обекта.
Фиксатор FSO (формалин, алкохол, оцетна киселина) Бродски.
Това се препоръчва за изследване на тъканна структура и цитохимични количествен анализ на нуклеинови киселини. Предимството на фиксатор на FSO Carnoy на преди това формалдехид инхибира активността на ензими, които разрушават нуклеинови киселини (нуклеази) в клетки, като по този начин заключени количествено по-добре запазена ДНК и РНК.
Съставът и начина на употреба:
Неразредена формалин неутрални 3 части
96% етилов алкохол 1 част
Ледена оцетна киселина 0,3 части
Парчета от тъкан 2x2 или 2x3 мм- времето за обработка на 1-4 часа в зависимост от свойствата на обекта.
След фиксиране парчета изплакнати с вода за 12 часа, или (за цитохимични цели) за едновременно с три промени на 70% алкохол. Бързо се дехидратират и се изсипва в восъка.
Shabadash заключване. Той препоръчва като най-добрата ключалка за хистохимично откриване на гликоген (особено когато то е малко по-централната нервна система).
Съставки:

Парчетата тяло (не повече от 3x3 mm) заключване 3 часа в първия разтвор и след това мигрира във втория разтвор в продължение на 3 часа. Промива се три или четири промени на 70% алкохол в продължение на 2 часа. Излива се в парафин или целоидин.

Видео: Ура! ПРОФ пазаруване MAC, MAFE, Graftobian, Бен Nye Banana прах