Получаване tselloidinovyh секции - основа на хистология

Видео: етапите на производство на хистологични препарати

Видео: Яйце MEN хистология тестис

Режещи ножове се използват tselloidinovyh блокове от тип А и В с ъгъл на наклон по-малък, отколкото при рязане парафин блок. ъгъл на рязане трябва да бъде малък и зависи от плътността на блок (блок по-мек от остро ъгъл). Крепежни и обучение преди разполагането блок произвежда, както и в подготовката на парафинови срези. По време на режещия нож и блокът е постоянно навлажнена с 70-80% алкохол. Tselloidinovye секции са по-малки, отколкото на парафина, тенденцията за съсирване и не се придържат към ножа. Следователно, в случай на усукване може да се разпространи с четка директно върху повърхността на перката.
Готов tselloidinovye секции са събрани в 70% алкохол, където те се съхраняват до по-нататъшна обработка, която може да произвежда и двете безплатни парче и след предварителен ги залепи върху пързалки. В последния случай, за разлика от парафин секции залепване се извършва непосредствено преди оцветяване. Един от най-често срещаните методи е Rubashkina. Разширеният tselloidinovy ​​парче се прехвърля с помощта на шпатула до протеин намазана слайд с глицерол (с необходимостта да се движи възможно най-малко алкохол) и се притиска гладка нагъната филтърна хартия. След това се излива в филийки чист карамфилово масло. След като напълно антирефлексно (5-20 мин), декантира масло, предметно стъкло с нарязани на 96% или абсолютен алкохол, който заменя 2-3 пъти 5-10 мин (за подуване целоидин). След това, за да завърши целоидин секции разтваряне поставят се прехвърля на алкохол-етер или метил алкохол и след това се извършва чрез концентрация низходящ алкохол (с вода).
Получаване целоидин-парафинови срези не се различават от секциониране на парафинови блокове по време на работа, поставяне - също.

РЯЗАНЕ замразяване микротом

Обикновено, на отрязания материал замразяване микротом, фиксирана във формалин или алкохол, и се пълни в желатин. Фиксиране на течности, съдържащи живак дихлорид не се препоръчва, тъй като наличието на живак разгражда качеството на рязане (повреден лопатка).
Преди да се пристъпи към подготовката на материала за намаляване на замръзване микротом, трябва да се провери дали въглеродния диоксид в резервоара и ако тя пристига в таблицата на замръзване. За да направите това, отворете бутилка клапан с въглероден диоксид и завъртете ключа, който регулира потока на газ.
Рязане на материала, който се определя се поставя в контейнер с течаща вода и се промива няколко часа (обикновено поставени на една нощ). Следваща, нарязани парче дебелина 4.6 mm и се поставят в чаша дестилирана вода.
Осигуряване на малки микротомни тип нож С нож бар винтове в слотовете, ъгълът на наклон е разположен приблизително 45 ° С и се изтегля в крайно положение отзад. след Готови парче се отстранява от вода материал, поставен върху навлажнена повърхност на замразяване камера или лигавицата на навлажнена филтърна хартия и е ориентиран в желаната позиция. След това кратко отваряне и затваряне на кран доставяне на въглероден диоксид продукция замразяване на материала. За да се ускори замразяване камера с лекарството е покрита със специално дебелостенна стъклена в микротом комплекта. Ако не е наличен, ние можем да се настанят лабораторна стъклена чаша с подходящи размери. Едновременно с замразяването на обекта се охлажда до получаване на нож, хранене въглероден диоксид през тръбата, предназначени за тази цел.
Freeze край (признат от втвърдяване и избелване лекарство), монтиран микрометрични скала за желаната дебелина парче и чрез поставяне на нож върху обекта, въртенето на дръжката повдига таблицата захранващото с парче плат на нивото на острието на ножа. Тогава движението на ножа от самата дръжка започне рязане материал. Когато всеки олово ръка, за колкото една маса с наркотици автоматично се повдига до предварително определена височина. Изрезката се отстранява с нож пръст или четка и се поставя в чаша дестилирана вода, където веднага се изправи. Ако съкращения трябва да спести малко време, след изправяне във водата, те трябва да са в 10-12% разтвор на формалин.
Желатинови блокове са нарязани по същия начин за охлаждане само на по-дълъг и по-добре primorazhivanie възниква, ако nakapyvat на масата не е водата, и желатин разтвор за импрегниране обект. качество Cut също е подобрено, ако след първото замразяване единица да се размрази и след това се замразява отново. Съберете филийки трябва да бъдат студена вода или алкохол 30 °, където те лесно се изправи. Ако е необходимо, секциите за съхранение се прехвърлят в 10% разтвор на формалин.
Получават се използва замразяване микротомни секции бяха третирани главно свободно-. Въпреки това, ако е необходимо, те могат да бъдат предварително залепени върху предметно стъкло. За тази цел те се поставят в 30% алкохол, след това се прехвърля в стъклен слайд, протеин смазват с глицерол, се изправи и се притиска с гладка филтърна хартия, навлажнена с 30% алкохол. Секциите бяха прехвърлени в смес от 50 мл 50% алкохол и 7.5 мл формалин (1 мин), промива се обилно с дестилирана вода и се оцветяват.
Получаване на качествени парчета пресни, не-фиксирана материал на стандартна замразяване микротом трудно, особено ако по-нататъшна обработка не позволява фиксиране (например, хистохимично откриване на ензими).
Най-новите модели на местни и чуждестранни замразяване микротом имат специални приспособления за охлаждане на острието. Ако микротом стария дизайн, е възможно да се охлади на острието, за адаптиране към него lotochek със сух лед.
При рязане нефиксирани замразени блокове охлажда нож участъци, които не са отстранени и могат да бъдат прехвърлени директно към четка студен микроскопско предметно стъкло, на което те се придържат и сух на лепила без инструменти.
Както при попълване на специална среда, докато рязане на замръзване микротом, едновременно получаване на участъци от две части. За тази цел да се сравнят се изрязва парчета с различна форма, имат редица на масата, замразени и нарязани не е една и съща форма на съкращения го прави лесно да се прави разлика между тях. Последващата обработка се извършва едновременно, и след боядисване на сравняваните секции пуснати на един плъзгащ се получава и комбиниран препарат.
Въпреки това, най-добрите парчета пресни замразени тъкани са в специален хладилен агрегат - криостат.
Основни техники за работа с Криостатните. Преди вземане на материал за получаване на замразени срези в криостат, да бъдат поставени в камера микротом нож, четка, скалпел, дисекция игла и означават очила включват криостат охлаждане единица и да се изчака, докато достигне температурата на работната камера режим (-12 -15 °). Материалът след това се поставя на микротом удар blokoderzhatel, предварително намокрена с водната повърхност, ориентирани в позиция и замразяване (това е възможно да се използва сух лед, въглероден диоксид, петролев етер, хлороетил).
Ако материалът трябва да се предприемат спешно и няма време да чака, докато Криостат влиза в работен режим, blokoderzhatel с primorozhennym обект трябва да увийте Студената фолио или пуснати в охладена бутилка с тегло за предотвратяване на замръзване на влага и се поставя в хладилник за дълбоко замразяване (при условие, че температурата не е по-висока от - 8-10 ° С). Основното изискване - не дават на устройството да се размрази. Можете да съхранявате замразени блокове в рамките на няколко дни. Blokoderzhatel прехвърляне на обекта в охладителна камера, то се избутва микротом. След това с помощта на вече охлажда скалпела в камерата прикрепен към парче от желаната форма, се фиксира към микротом ножа и да започне рязане.
Ако степента на охлаждане на обекта се качват правилно (за материал на различни плътности изисква неравни температурни условия) и антикоагулант добре регулирана устройство, секциите се вписват добре на ножа. Чрез завъртане секции трябва да бъдат разпръснати върху ножа, която, веднага след като съкращенията ножа в блока, натиснете леко четката за ножа изрежете началото и запази ножа от горе до долу, като рязане блок. Pure стъкло обезмаслено стайна температура се въвежда в камерата и да внимателно да режа. Поради температурната разлика от отрязани ножове и се придържа към слайда. Стъкло, резени се сушат при стайна температура или фиксирани в различни течности в зависимост от метода на допълнително обработване. При рязане в криостат плаващи предмети е възможно да се получат лекарства, комбинирани на шест и дори осем парчета. В този случай, свързване и замръзване, те са толкова близо, че границата е трудно да се различи дори микроскоп.
Имайте предвид, че за да получите добри съкращения парче трябва да се охлаждат до определена състояние. Ако разреза се разпада, на peremorozhen обект и трябва да изчакате, докато размразяване, няма да получите правилното твърдост. Ако раната е смачкана, обектът не е достатъчно и трябва да бъде охладена до замразяване леко.

Видео: биохимия, биология олимпиада