Обработка и оцветяване на костна декалцификация, оцветяване - на базата на хистология

Обработка и оцветяване на костната тъкан

Костни физични свойства е уникален сред тъканите на тялото. Неговото присъствие в междуклетъчното вещество на калциеви соли придава твърдост тъкан, значително усложнява получаването на хистологични препарати, обаче лечението на костна тъкан има свои собствени характеристики. Има два основни методи за хистологични препарати: 1) подготовка на парчета след специална предварителна обработка на обекта, същността на която е да разтваряне и отстраняване на костни неорганични соли (декалцификация) - 2) получаване на тънки костни плаки (тънки секции) на парчета нефиксирана компактен кост чрез смилане Най-новото.

декалцификация

Преди да се пристъпи към декалцификация, костта като всяка тъкан, трябва да се подлага на определяне. Избор на заключване зависи от целта и естеството на изследването. По този начин, препарати за преглед и идентифициране на фибриларни компонентите на костния се използват чист формалин (15-20% разтвор), а за цитологични изследвания предпочитане сложни скоби, също съдържащи формалин, защото намалява степента на подуване на влакнести структури по време на последваща обработка тъкан (например , Shtive фиксатор: живак дихлорид наситен воден разтвор - 76 мл, формалин - 20 мл ледена оцетна киселина - 4 мл).
За определяне на мозайката да бъдат изрязани малки парчета кост (0,5-1 см), тъй като в резултат на ключалката с висока плътност прониква тъкан бавно. определяне на времето зависи от дебелината на детайла (не по-малко от 48 часа).
В края на обекта фиксиране старателно се промива в течаща вода или алкохол (например, след сложни фиксатори, съдържащи живак дихлорид), както и в следващите киселини обработка могат да образуват трудно разтворими утайки. След това, за да се проведе формулировка обезмасляване чрез серия от нарастващите концентрации на алкохоли (50, 70 и 96%) и след това се регулира до концентрация на вода чрез алкохолите връзката надолу.
Декалцифициране се постига чрез третиране на кости, с използване декалцифициран течност имащи свойства на разтваряне на неорганични соли, без да вредят на структурните елементи на костите.
Когато декалцификация трябва да се придържат към следните основни правила:

1. прилага голямо количество течност декалцифициран и да го замените всеки ден (количеството течност трябва да надвишава обема на обекта най-малко 50-70 пъти);
2. dekaltsiniruemy обект поставен в горния слой течност да се гарантира, че намаляването на дъното разтворими соли (висящи части на нишка или чаша сито);
3. провеждане декалцификация за пълно премахване на минерални соли (но не perederzhivat материал в течности, тъй като това води до подуване и влошаване на фибрил структури оцветяване).

Декалцифициране се счита за завършена, когато обектът става мека и лесно да се реже с нож, и без криза. Производството на процеса могат да бъдат проверени от степента на потапяне в обекта на дисекционен игла. Студено запалване лекарството и да го натиснете, не се препоръчва, тъй като това ще увреди деликатните костни структури.
Декалцифициране във воден разтвор на азотна киселина (5-7.5%) е най-разпространеният метод. За да се получи работен разтвор се излива в мерителен купа 5-7.5 мл концентрирана реагент клас азотна киселина (плътност 1,40) и се разрежда до 100 мл с дестилирана вода (разтвор може да бъде получен за бъдещо използване в големи количества чрез изчисляване на общото търсене). Нанесете по-ниска и по-висока концентрация на разтвора не се препоръчва за декалцификация на костите, тъй като първата да доведе до подуване, а вторият - щетите клетъчни структури. По-високи концентрации (10%) се използват само за декалцификация на зъбите.
Изливане на желаното количество течност в подходящ стъклен съд, той е окачен на готови парче кост декалцификация. Разтворът се заменя всеки ден до пълното премахване на варовика. време декалцификация зависи от свойствата на обекта (стойност плътност) и концентрация на азотна киселина. Средната продължителност на декалцификация малки парчета кортикална кост 10-12 дни.
След завършване на отстраняване на котления камък да се елиминира подуване влакнести структури лекарство суспендира в продължение на 24 часа в 5% разтвор на натриев сулфат или литий (в отсъствието на такива соли кост трябва да се постави в алкохол 96%) и едва след това внимателно се промива за 1-2sut в течаща вода ,
Може да се съкрати получи декалциниран кост, поставяне на парче дребен директно в 5% разтвор на трихлороцетна киселина, съдържаща 10-20% формалдехид. Тази смес едновременно улавя и декалцифициран. Малко парче средна плътност може decalcify в продължение на 3-5 дни. След декалцификация промива в алкохол (в никакъв случай не във водата!).
Има и редица други начини за премахване на варовика, но всички те са базирани на същия принцип, да изискват спазването на общите правила, посочени по-горе.
След декалцификация на костната тъкан могат да бъдат нарязани на замръзване микротом и се излива в целоидин или целоидин-парафин по обичайния начин. Попълнете восъкът не се препоръчва, тъй като това е лошо прониква калцият се отнема кост.
В момента местната индустрия започва да произвежда специален тип шейна микротом което позволява да се намали костта без предварително премахване на варовика, при което се получава раздели 20-50 микрона дебели.

оцветяване

Най-често срещаният метод за оцветяване секции декалциниран кост - в SHmorlja (tioninpikrinovaya киселина). Работни разтвори: А - наситен разтвор на thionine в 50% алкохол, В- 1% воден разтвор на фенол Б - наситен разтвор на пикринова киселина.
Преди употреба, изпразнената 1 част разтвор с 10 части разтвор В в секциите на вода се прехвърля за 10 минути към получената смес, и след това се изплакват с дестилирана вода и се поставя в 30-60 с наситен разтвор на пикринова киселина. След това секциите се промиват отново в дестилирана вода и се диференцират в 70 ° етанол, за да се получи тъмно червен цвят. След това те се прехвърлят към 96 ° алкохол, който продължава диференциация (под контрола на микроскоп), докато общия контекст на разреза няма да се korichnevyy4 (или блато) цвят и костни клетки и техните процеси - в червено. след това оцветени секции са извършени при 96% и абсолютен алкохол, карболфуксин-толуен, толуен и вградени в балсам.
Ако дялът се оцветява слабо поради продължително декалцификация в азотна киселина, първо трябва да се постави амонячна вода, а след това и се промива с дестилирана вода и след това се оцветява в продължение на 2-3 часа в 0.5%.