Санитарно-бактериологично изследване на водата - микробиология с техниката на микробиологични изследвания

Санитарно-бактериологично изследване на вода, напитки, мляко и други хранителни продукти
Оцеляване на патогенни микроорганизми в различни обекти на околната среда (въздух, вода, почва хранителни продукти, и така нататък. Г.) може да улесни в някои случаи несъответствие с необходимите хигиенни мерки заразяват хората причиняват инфекциозни заболявания (коремен тиф, дизентерия, холера, хранително отравяне и др.).
За да се предотврати възможността от заразяване с патогени на различни обекти на околната среда от страна на съветското правителство издаде поредица от закони, които предвиждат необходимите санитарни мерки за поддържането на водните източници, почва, въздух и храна.
В нашата страна, всяка година се увеличава мрежата от санитарните станции и химически и бактериологични лаборатории, които са предназначени за наблюдение на качеството на водата, храната, санитарното състояние на въздуха, почвата и така нататък. Г.
Лабораторията извършва ежедневно химически и бактериологични мониторинг на всички водоизточници (вода, кладенци, реки) и храна. Редовно извършва наблюдение на въздух осеменяване патогени.

ВОДА

Питейна вода трябва да отговаря на следните бактериологични критерии: 1) съдържа не повече от 1 мл 100 mikrobov- 2) в 300 мл вода трябва да отсъства чревния palochka- 3) не трябва да бъде открит патогенни микроби.
Вземане на проби. За анализ на производството на вода бактериологични лаборатория трябва да има доставка на стерилни съдове (бутилки 500, 250 и 100 мл). Внимателно измийте бутилки, затворени с памук увити в марля свещи, покриваща хартия
капачки и вързани с канап и след това се стерилизира в автоклав при 120 ° в продължение на 30 минути. втората тапа увити пакет свързана с стерилизира бутилката. Вземане на хлорирана вода в бутилката преди стерилизация направи 2 мл 1,5% разтвор на Hyposulfite (sernovatistokislogo натрий). Чешмяна вода се смесва за проучване на 500 мл. Crane водопроводни изстрел пламъка на горелка или памучен тампон, навлажнен с алкохол, след това се отваря и в рамките на 10-15 минути се понижава вода. Това трябва да се направи, защото водата може да стагнира в тръбата, а след това резултатите от проучването ще бъдат неточни. Дайте воля на бутилка, тапата е отстранен, заедно с капачка хартия и се задържа в ръка, така че да не се замърси. Напълнете бутилката с вода, за да не намокрите щепсела. Затваряне над огъня, вратовръзка и да направи надпис: от вземане на проби, адрес, дата и час на заснемане, с цел проучване и името на човека, който е взел пробата, или да се сложи на броя и на придружаващия документ срещу номерата даде описание. Бутилка с вода трябва да се разследва възможно най-бързо се доставят в лабораторията (считано от датата на встъпване в момента на доставката на пробата в лабораторията трябва да е не повече от 2-3 часа). През лятото се препоръчва водата бутилка за налагане на каучук торба с лед, а през зимата - за затопляне с топла вода. Доставени в лабораторията на водата не се регистрира от сериен номер и веднага направи на културата. Когато водата се приема за разследването на кладенци, отворени резервоари, басейни и др. Г. вода, взета от определена дълбочина. За тази употреба на проби - устройства, които представляват метална рамка, която е инсталирана вътре в стерилна колба със запушалка, върху който е поставен на въжето. Sampler се понижава във водата на желаната дълбочина на изтегляне на въжето отвори тапата, и за пълнене на бутилки и корк въже понижава автоматично се затваря. При изваждане на кораба от метална рамка с памучен тампон се заменя.
Вода всеки ден в проучване: а) към общата бактериално замърсяване (бактерии) и б), за да фекални замърсявания (колиформа титър). Изследване на инфлуенца група (патогени коремен тиф, холера, дизентерия) е направен от епидемични показания.

ИЗСЛЕДВАНЕ НА ВОДА НА СЪЩИЯ бактериално замърсяване

Техника определяне на броя на микробите във водата след това. Стерилен 1 мл пипета получаване изследва вода и се прилага към блюдо на Петри Geidenreich. Излива се разтопи и ostuzhennym до 45 ° месо-пептон агар се смесва добре и се оставя да се втвърди агар и се поставя в термостат при 37 ° надолу в продължение на 24 часа. Вода с богати микрофлора преди разрежда със стерилна вода до 10, 100 пъти, и така нататък. D.

Фиг. 120. Камерата Volfyugelya за колония броене.
Фиг. 121. Камерата Lafara за преброяване на колониите.

За сметка на колониите. Изброяване на колониите, произведени под лупа след 24 часа престой в кувьоз. В случай на тежки растеж на - 50 колонии - профила проведени в камерата или Volfyugelya Lafara. Купа на сеитба Volfyugelya поставени под стъклото на камерата (фиг. 120) и брои броя на колониите в няколко квадратчета, например, в десет (ако колонии са малко и големи, вярваме в голям kvadratah- ако колонии са много и те растат много, вярвам в малки квадратчета) , Общо колония броенето се извършва както следва: 10 квадрати на брои броя на колониите, разделен на броя на квадрати, т.е., при 10, за да се получи средния брой колонии на квадратен ... Например, ако общият брой на колониите до 10 квадратчета е 100, средният брой на колониите на квадратен е 100: .. 10, т.е. 10.Esche лесно вкарва колонии Lafara камера. (Фиг. 121). Това елиминира стъклена пластина е разделена на сектори и сегменти, където диаметъра на кръга е равен на диаметъра на чашата, т.е.. Д. Към 10 cm. Soschityvanie произведени колонии върху сектори плоча, прикрепени към чашата, така че нейния център съвпада с центъра на чашата. Плочата е разделена на 6 сектори, както и броя на колониите от бактерии се преброяват в същия сектор, се умножава за целия чашата до 6. Ако много колонии, след което се отчита колонии в малки триъгълници, равни на 1 cm 2, и чрез изчисляване на площта на чашата, съответно размножават.

ИЗСЛЕДВАНЕ НА ВОДА коли CAPTION

Вода изследване на Е.коли титър може да се: а) ферментационен метод, и б) посяване на мембранни филтри.
Методи за санитарно-бактериологично изследване на водата се определя от своята категория. Централизирано водоснабдяване, артезиански кладенци са били тествани в съответствие с ГОСТ 5216-50. За да се изследва откритите водоеми вода, отпадъчните води ГОСТ не условие обаче, в зависимост от условията на качеството на водата и могат да се използват два метода за ферментация три етапа, както и метода на мембранен филтър.

метод ферментация

За да се проучи този метод, се използват следните хранителни среди.
Bulira среда (опция). За да се прибавят обичайни месо-пептон 0.25% манитол и се разтваря е монтиран рН 6,8-7,0, варени в продължение на 10-15 минути, се добавя наситен воден разтвор neytralrota да изчисти череша-червен цвят, се филтрува и се пълни в колби и тръби с поплавъци (мл нормална среда концентрация), се стерилизира в автоклав при 120 ° в продължение на 15 минути.

Ейкман среда (опция). първичен Концентрираният разтвор се получава чрез смесване на 100 мл дестилирана вода, 10 г пептон, 2,5 г глюкоза, 5 грам натриев хлорид, загрява се и се филтрува (глюкоза, добавени след варене и филтруване), регулира рН 7,4-7,6, излива се в колба от 10 мл и 1 мл ампули и се стерилизира фракционни 3 последователни дни до 30 минути дневно. За. Храни среда се разрежда до 1 част на концентрирания разтвор се прибавя 9 части дестилирана вода.
Rozolovaya диференциална среда (DAM). За 1 литър месо-пептон агар с рН 1.5% (водород йонна концентрация) 7.4-7.6 50 мл течност или жлъчна от същия изчисление сух жлъчката, 10 г лактоза, 1 г глюкоза, 2 мл от 1% алкохолен разтвор на индикатора бромтимолово синьо и 2 мл 5% разтвор на алкохол rozolovoy киселина. Получената среда се разбърка и проверени за способността за буфериране, както следва: 1-2 капки приготвената среда се поставят в стъклен съд Geidenreich - бял порцелан чиния или плоча. Като среда се охлажда, повърхността се прилага капка 10% разтвор на солна киселина и следваща (така че да не се смесва) капка от 20% разтвор на натриев хидроксид или натриев карбонат. Правилно варени среда трябва да има индикатор - бромтимолово синьо кафяво-червен цвят, а не показател - светлорозово, и трябва бързо да промените цвета на жълто от киселини и основи от slabomalinovy. Ако реакцията протича бавно (рН неправилно инсталирани месо-пептон агар) необходими за бързи промени в цвета за добавяне към средата с 10% разтвор на солна киселина, - ако средата е силно магента, и 10% алкален разтвор, ако сиво-жълт сряда. След това е необходимо да се проверява рН отново.
Получената среда се разпределя в бактериологична серологични или тесни тръбички до 1/4 от височината им и се стерилизира под налягане 0,5 атм. 10 минути следва. Средата се поставя в автоклав, предварително загрята до изпаряване. В края на парата на стерилизация се понижава, и веднага се отвори капака на автоклава. Когато пара се освобождава, средата се отстранява и изправено положение (не позволява повърхност деформация на средата) се оставя да се охлади. След това сложете във фурна в продължение на 2 дни, за да проверите за стерилност и сушене тапи. Преди да използвате средата предварително разтопи и се оставя да се охлади с малък остър повърхност.
Забележка. RDA може да се приготви и без индикатора бромтимолово синьо.
Сряда Krajewski. Към 1 мл течен жлъчката, 10 г пептон, и сместа се вари 30 минути, филтрува се, добавя се 10 г лактоза, регулира рН 7,8-8,2, 8 мл воден разтвор на 1% разтвор на тинтява виолетово се излива в епруветки с поплаваците и се стерилизира при 120 ° в продължение на 15 минути. Ярко виолетово се прибавя към средата като антисептик Krajewski, инхибира грам-положителни флора и жлъчна прилагат като защитен фактор в Ешерихия коли.
Фиг. 122. Колба с Bulira среда, в която е потопен обърнат епруветка за събиране на газ.

Сряда Кеслер - Svenartona. Към 1 мл дестилирана вода се прибавя 10 г пептон, и 50 мл жлъчни говежди, сместа се кипи при разбъркване в продължение на 20-30 минути на водна баня и се филтрува през памук. След това се разтваря в 2,5 г лактоза и обемът се довежда до 1 литър с вода. Коригирана рН 7,4-7,6 и се прибавя към 1 литър от 2 мл 1% воден разтвор на тинтява виолетово а. Поставят се 5 мл епруветки и се стерилизира в автоклав при 120 ° в продължение на 15 минути или фракционна.
Избор на обем вода за посев при определяне на титъра на Е.коли зависи от източника на вода и предвидената степен на микробно замърсяване.
Първият ден. Чешмяна вода. Чешмяна вода се смесва за проучване на 500 мл. Подготовка за посяване две бутилки 10 и 100-120 мл епруветки с основна среда Ейкман (или Bulira) с поплавъци (122 Фиг.) Стерилна петриева Geidenreich - Петри пипета 10 и 1 мл пипета или цилиндри Мур 50-100 мл , На бутилки и флакони постави броя на разследван вода и дата засаждане.
Open бутилка изследва вода над огъня и да направи посев: 1 мл заредени върху петриево блюдо Geydenreha- (за определяне на микробни номера), отваряне на капака на чашата 15 се излива в 45 мл разтопен ° месо-пептон agara- бърка чрез завъртане на чашата на циркуляр таблицата движения дават агар да се втвърди и се обърнете чашата с главата надолу. 10 мл пипета или цилиндър инокулира в 10 мл вода в алкална среда тръби Ейкман (или Bulira) и 50-100 мл пипета или цилиндър инокулира в 2 Ейкман бутилки със средата (или Bulira) с 100 мл вода Размерът да се определи титър. Култури на Е.коли титър поставя в термостат за 24 часа при 43 °, по микробен брой - при 37 °.

При температура от 43 ° коли топлокръвно ще се размножават, докато сапрофитни флора е убит или растеж се инхибира.
Е вода. Е вода взети за изследване в количество 200-300 мл за блюдо и се инокулира в количество от 0,1 мл за определяне микробни номера.
За да се определи дали титър инокулира 10- 100- 1 и 0.1 мл вода, последните две обеми - в епруветки с разредена среда Ейкман.
Река вода. Речна вода се използва в количество от 100 мл. Разрежданията за култури, направени от 1: 10 до 1: 100 000 разреждане с вода се извършва както следва: 1 мл тест течност се поставят в епруветка с 9 мл стерилна чешмяна вода, разбърква се добре и се промива няколко пъти пипета. Готови вода разреждане 1: 10. От вземе 1 мл от този разреждане и се прехвърля към следващата тръба. Готови вода разреждане 1: .. 100, и т.н. Най-общо инокулира бактериална колонизация най-малко две чаши две разреждания, в зависимост от предназначението замърсяване (например, 1: 10 и 1: 100 или 1: 100 и 1: 1000).
На коли титър инокулира 10- 1- 0.001 0.0001 0.00001 мл. Култури в чаши поставя при температура термостат на 37 °, и бутилки и епруветки - 43 °.
Отпадни води. Отпадъчните води се използва в количество от 100 мл. Посети върху общия бактериална колонизация най-малко две чаши разреждане 1: 1000 и 1: 10, 000. По този Coli титър култури, от 1 мл и завършва с разреждане от 1: 100 000 и 1: 1 000 000. засяването се извършва в среда Kessler ,
На втория ден. Чаши с култури за общо замърсяване е от инкубатор и брои общият брой на колониите.

Бутилки и туби с засяване на Coli титър извадени от фурната и сърфиране. Ръстът на работна книга марки (мътност - газ). При липса на растеж, когато покритие чешмяна вода прекратен анализ и предоставяне на еднозначен отговор: ако титър над 333. замърсени (река, канализация) вода при липса на растеж се оставя за друг ден.
От бутилки и туби с присъствието на мътност и газ или мътност направи субкултури на среда оцветени Ендо Левин.
На третия ден. Зрителите чаши с цветни среди, отбелязани в работната книга за растежа, естеството на колониите. Колиформи колонии са гладки (червени на Ендо среда и сини в околната среда Levin) с метален оттенък. Тези предполагаеми колонии правят петна и цвят грам. В присъствието на Грам-отрицателни пръти такива не-спори колонии са субкултивирани върху втората ферментационен титър (в епруветка с разреден Ейкман среда и поплавък) и се поставят в термостат при 43 °.
Otvivayut прозрачни безцветни колонии върху агарови наклонени за последваща идентификация ивици Series.
Четвъртият ден. Оставя се за засаждане в секунда ферментационен титър. В присъствието на мътност и газ добив краен положителен отговор в отсъствието на газ - отрицателна. Анализът завършва. Списанието отбелязва, коли-титър или ако индекс на маса. 29, 30, 31.

Чешмяна вода Общо количество 300 мл (2 обема 100 мл и 10 обема мл 10)

Легенда: знак < обозначает меньше, знак > обозначает больше.
Таблица 30
Водата от добре общия обем на 111.1 мл (10 обема 100- 1 и 0.1 мл)

Oboznacheniya- + за растеж на Е. palochki- - липсата на растеж на Е. коли.

речните води
Определяне на титъра и Coli-Coli-индекс на засяване 10- 1- 0.1 и 0.01 мл

Забележки към таблици 29, 30, 31.

1. В втора проба, получена образуване ферментация газ и мътност в един екран (бутилка) - 100 мл и 3 епруветки от по 10 мл. Търсим таблица. 29 едно вертикално и хоризонтално 3. На пресичане намери коли титър 56 и индекс коли 18.
2. Когато посев 100, 10, 1, 0.1 мл ферментация получени в съдове 100 и се инокулират с 0,1 мл. Таблица. 30 намерите две вертикали на символа + хоризонтално отговор 92 и 11.

Прозрачни колонии, идентифицирани от пъстър ред като Е. paracoli или Е. фекалии Alcaligenes, отбелязани в дневника като Е.коли.
От 1959 г., включена метод двуфазна за определяне на индекса на вода и kolititra коли.
Засяване вода двуфазна ферментационен метод, използващ rozolovoy среда (ГОСТ 5216-50 на 1959 YG).
Първи етап. Водата се посяват, както е описано по-горе, в glyukozopeptonnuyu среда (SBS) в същите количества (чешмяна вода - две 100 мл бутилки и 10 епруветки от по 10 мл, добре - 100- 10- 1- 0.1 мл, и така нататък. ) ..
Вторият етап. След 7-12 часа, стоящи в термостат на всички инокулирани съдове, независимо от присъствието на характеристиките на растеж (мътност, образуване на газ) прави повторно засяване на DAM среда, както следва: материалът на средата за съхранение (SBS), като една линия и се прехвърля в епруветка с DAM, леко стрива в кондензиране течност, се удар в колоната, не води до долната част на тръбата, а премахването на пантите прекарват бар на скосената повърхност на агара. Тези субкултури поставят в термостат при 37 ° в продължение на 24 часа, и първичната култура на GG1S оставя в термостат при температура 42-43 ° до следващия ден.
Бележки. 1. Ако презасяване след 7-42 часа от развитието на бактерии по ПДП не е, и в средата след 24 часа от GPS ще метеоризъм или мъгла, отново прави презасяване на RDA медии и се култивират в продължение на 10-12 часа.

1. Ако се изисква спешна реакция при липса на задължението часовник в лабораторията, презасяване с GPS за ПДП може да се направи не по-късно от 24 часа. Ако презасяване прави 16-18 часа по-късно, основната реколта на GPS отново термостат не е зададен.

Третият етап. Отчитане на култури върху околната среда ПДП. Признаци колиформи откриване.
Е.коли. Резултатът от изследването се счита за положително, ако има GPS метеоризъм и мътност или само облачност. На появява скосена растеж повърхност DAM под формата на изолирани колонии от жълт или жълто удар на пожълтели среда, DAM колона става жълт с прекъсвания, и кондензиране течност се разпенва. За да се потвърди присъствието на Е.коли, като намазка и Грам-оцветяване.
Parakishechnye пръчици. На сиви колонии или сив бар, цвета на средата за отглеждане скосената повърхност скосена част не променя или да доведе до образуването на алкални растящи бактерии появява магента оттенък. Колоната RDA сред жълтият цвят се счупи, пяната в кондензацията на течност в намазки Грам-отрицателни бактерии.

Методи за засяване вода на мембранни филтри

проучване посев вода на мембранни филтри, използвани в повечето бактериологични лаборатории в последните години. В сравнение с ферментационен метод има следните предимства:

1. намалява анализ за до 24 часа;
2. Това спестява на околната среда и времето;
3. То дава възможност за откриване на много малки количества микроби във водата;
4. Тя дава възможност за директно и достатъчно точна сметка за броя на колонии;
5. Тя ви позволява да изберете всеки микроб в чиста култура.

Филтрите са извадени от опаковки, сърфиране. страна на мат е белязано с молив - точка. Не дефекти (пукнатини, счупвания) филтри не трябва да има. Филтрите се поставят в емайла или пот порцелан, която се излива в топла дестилирана вода, оставя се да престои в продължение на 20-30 минути, тя се излива и се напълва с дестилирана вода отново. Cosi 3 пъти. Филтри, приготвени по този начин се варят в дестилирана вода в продължение на 1 минута, след което се източва водата, заменя с прясна вода и след това се кипи в продължение на 15-20 минути. Това се прави с цел да се премахне химикали, които се съдържат във филтрите, и да се избегне усукване. След като течността изстине, започнете засаждането. Използва се за апарат за филтриране на вода Seitz (вж. Фиг. 32) или специален апарат Rublevskaya водопроводни.
До края на филтъра за филтриране на вода се отстранява с стерилни пинсети и пуснати на среда Ендо нагоре въздух матова повърхност. На Geidenreich петриева паничка се поставят 4-5 филтри. На дъното на чашата срещу всеки филтър анализ сложи стая. Е разположен в термостат при температура 37 °. На следващия ден, с лупа филтри за гледане. Липса на микробен растеж като цяло, или Е.коли върху филтрите е в основата на отрицателен отговор, който е даден 24 часа по-късно.
Ако има растеж на Е. коли, по-нататъшния анализ се извършва както следва.
Изброяват се колониите, характерни за тях, коли (фиг. 123 на вложка).

Фиг. 123. растеж на колониите на Е.коли на мембранен филтър.

ИЗСЛЕДВАНЕ НА ВОДА микроби на коремен тиф и дизентерия

Проучване Вода за откриване на патогени на коремен тиф и дизентерия, носени от епидемиологични показания или по специална заявка.
За идентифициране на патогени на коремен тиф и дизентерия следните методи се използват във вода:

1. сигнал (реакция повиши фагов титър);
2. ускорено (immunolyuminestsentny);
3. класически, свързано с освобождаването на патогена в чиста култура.

Количеството на патогенни микроби е незначителна, да ги разделят чрез конвенционални лабораторни техники е много трудно във водата, обаче редица методи, използвани за тяхното концентрира в малък обем вода. Това може да се постигне по различни начини:

1. Физични методи: а) чрез центрофугиране, б) чрез изпаряване във вакуум със силна десиканти (H2S04 и т.н.), в) филтруване през мембранни филтри ..
2. Метод химикал (концентрацията на микроорганизми, използващи различни коагуланти).
3. Утаяване с помощта на специфични антисеруми аглутинация.
4. Концентрация от метод флотация (на базата на способността на някои въглехидрати - ксилен, бензен адсорбира микроорганизмите на повърхността).
5. Методът за преместване на положителен хемотаксиса на бактерии (метод Berezova).

На практика най-широко използвания метод отлагане коагуланти (Метод Мюлер и др.) И метода филтруване. И в двата случая, се препоръчва да се вземат много вода - 5-6 литра.
метод на Мюлер. Към 3 литра тест вода се прибавят 12 мл стерилен 10% разтвор на сода и 5 мл стерилен желязо сескихлорид. Оставя се да престои 1 час. Получете люспи се утаят на дъното, носещ микробите. Внимателно се аспирира чиста вода и утайката се излива в tsentrifuzhki, центрофугира се при 2000 оборота в минута в продължение на 5-10 минути. Излива бистра течност, и пелетата се засяват на серия от цветни чаши (по-добре да отнеме няколко цветни среди 2-3 чаши), за тази утайка се прилага към околната среда
и добре триене на материала с помощта на шпатула, движейки се от една чаша на чашата. В последния чашата на възхода на единични колонии. Растат при 37 °. От съмнителни колонии се изолира и идентифицира чиста култура от бактерии схема за коремен тиф и дизентерия.
метод филтриране. Се пропуска през филтрите не мл течност по-малко от 500 тест (но по-добре 5-6 л) - чрез всеки филтър 25-50 мл и може да бъде повече, ако водата се филтрира добре. Половината от филтри, поставени в обогатяване среда (холева бульон Mueller среда selenitovy бульон). Засяването среда обогатяване на чаша със средно или Ploskireva Левин произвеждат 18-20 часа. Останалите филтрите се поставят върху плочки с средносрочен Blair Уилсън (vismutagar) и с няколко филтъра се отмиване с физиологичен разтвор и промийте разпръсна шпатула чаши със средна или Ploskireva Левин. Плаките се поставят в термостат при 37 ° в продължение на един ден. Съмнителни колонии от плочи изолирани и идентифицирани в съответствие със схемата за коремен тиф и дизентерия.