Vibrio холерният - микробиология с техниката на микробиологични изследвания

Vibrio (Vibrio холерният asiaticae), открит R. Koch през 1883 г., е причинител на тежки остри заразни заболявания - холера, която се характеризира с лезии на стомашно-чревния тракт със симптоми на интоксикация и локализацията на патогена в тънките черва.

Фиг. 81. Vibrio холерният.
1 - чист kulture- 2 - тампон isprazhneniy- 3 - втечняване на желатина.

Морфология и багрилни свойства. Vibrio холерният отдава изразен полиморфизъм. Оцветените препарати, има форма на извита дължина пръчка от 1.5 до 3 микрона и ширина от 0,2 до 0,4 микрона. Степента на кривина е съвсем различна: в допълнение към леко извита форма, под формата на запетая там образува полукръг. На изкуствени медии и в тялото на болен хора Vibrio може да бъде под формата на прави пръти, влакна, дълги спирали коки. Спорите и капсулите не образуват, е много мобилни monotrih (фиг. 81), всички лесно оцветени с анилинови бои, Грам.
Културни и биохимични свойства. Vibrio холерният неизискващ на хранителни среди, добро и бързо се размножава върху твърда и течна среда алкална реакция (рН 7,6-82), строг аероб, оптимален растеж 37 °. На говеждо-екстракт агар алкална чрез
10-12 часа инкубиране в инкубатор образува кръг, малки (диаметър 1-2 mm) колонии с гладка повърхност, steklovidnoprozrachnye при преминаваща светлина. Последователност колониите мазна, при ниско увеличение на микроскопа те са хомогенни, светло-жълт цвят. По-късно (след 18 часа престояване в термостат) те стават мътен. На Васто агар TCBS (вж. Стр 287) Vibrio холерният колонии са големи, жълти, на фона на гъста синьо-зелена среда. Когато стои на жълто стане зелен. Арънсън колония върху среда ярко червен цвят с бледо розово или безцветно джантата и Монсури среда след 24 часа растеж формира прозрачен или полупрозрачен колония сиво черно с мътност по краищата. По-късно (след 48 часа) колония увеличаване на размера (3-4 mm) и да стане мазен, с черен център и добре изрязания ръб. На алкална пептонова вода вече след 6-8 часа на растеж изглежда тънка, мек филм, както се вижда в стената на тръбата в малкия си наклон. Натрупването на V. холерният е бърз, така пептонна вода като среда за подбор се използва широко в ранната диагностика на холера. Vibrio холерният да дисоциира, преминаване от S-образна форма в R-формата. R-форма Vibrio холерният пептонова вода до образуване на твърда, понякога набръчкана сух филм. Vibrio холерният е много активен биохимично. Ферментирало за получаване на киселинен газ без глюкоза, левулоза, галактоза, захароза, малтоза, маноза, нишесте и оставяйки непроменена лактоза, арабиноза, дулцитол. На желатин пробождане на растеж засяване появява като бяла линия, и след това се определя разреждане му с повърхността както на балона (вж. Фиг. 81). Образува индол, амоняк и сероводород, възстановява нитрат до нитрит.
Холерата вибрион. Околният характер (вода, почва), хора (в устата и червата) и животните са намерени Vibrio, морфологично и биологично подобни на Vibrio холерният. Това холера вибрион нямам патогенност, но те може да е трудно да се бактериологична диагностика на холера. Повечето от холера вибрион холерата на разлика hemolyzing овчи еритроцити и не се разграждат нишесте. Диференциране функция е възможността да ферментира Vibrio холерният маноза, захароза, оставяйки без промяна арабиноза. За точни подразделения на Vibrio холерният от холера трябва да се използва с аглутинация специфични серуми и осигуряваща впечатления с холера бактериофаг (на избран лизира култура).
Антигенни структура и серологични типове. Vibrio холерният има две антиген: соматични О-антиген термостабилна и термолабилни флагеларно Н антиген. Vibrio холерният различава от холера вибрион само О-антиген. Следователно, трябва да се прави разлика използването на О-аглутинатен серуми, че аглутинира само Vibrio холерният. Японски автори Vibrio холерният разделена на три серотипове: I (тип Inaba), II (тип Ogawa) и III (тип Gikoshima). През 1962 г. по препоръка на Световната здравна организация (СЗО) за Vibrio холерният и Vibrio назначен El Tor. Името на този вибрион е получил от карантинната станция на Ел Тор в Африка, където за първи път е изолиран през 1905 г. от пациент с клиничната форма на холера и описан през 1906 г. Р. Gotshlihom.
Vibrio El Tor различава от класическата V. холерният че hemolyzing еритроцити овце и кози в течна среда (Greig проба) причинява хемаглутинация на пилешки червени кръвни клетки, устойчиви на антибиотик полимиксинът. Въпреки това, има такова нещо като вибрион Ел Тор, който е подобен на не класическата Vibrio Хемолизирани еритроцитите. Прилики и разлики между В. холерният са обобщени в таблица. 19.
Resistance. Стабилност на Vibrio холерният малък: нагряване при 56 ° те се съхраняват не повече от един час. Чрез действието на дезинфектанти са много чувствителни: 3% разтвор на карболовата киселина ги убие в рамките на 3-5 минути, разтвор на живачен хлорид 1: 1000 - след 10 минути. Vibrio холерният особено чувствителни към киселини: солна киселина и сярна киселина, дори при разреждане 1: 100 000 ги убие за няколко секунди.

Таблица 19
Диференциални диагностични признаци на Vibrio холерният

Патогенност при животни и образуване токсин.
само при хора ин виво холера. Домашни любимци имат специфичен имунитет към холера. Мечников е в състояние да заразят сукалчета зайци, смазочни зърната кърмещи жени култура на Vibrio холерният. При животни, симптоми на чревни лезии, наподобяващи холера ентерит при хора. DK Zabolotny експериментално предизвикани холера заболяване в лалугери, vskarmlivaya тяхната култура на Vibrio холерният.
В патогенезата на заболяването играят голяма роля ендотоксин и продукти Vibrio живот. Ендотоксин се състои от два компонента:
а) топлинно лабилни glyutsidolipoidnogo причиняват зачервяване червата и б) термостабилна фосфолипид, защото хипотермия (понижаване на телесната температура). чревни съдържанието и фекалиите филтратите са токсични фактори, сред които двата най-важни са: 1) инхибиране на натриев реабсорбция от чревния канал в krov- 2) кадаверин - увеличаване на чревната капилярната пропускливост на токсични вещества Vibrio холерният.
Патогенеза и холера клиника. Източниците на инфекция в холера могат да бъдат: а) хората, заразени с холера, Vibrio холерният които секретират изпражненията до края на периода на инкубиране в продромалния период yavleniy- б) пациенти с различни форми в holery-) rekonvalestsenty- ж) vibriocarrier здрави. Холерата Заразяването става през устата при консумация на заразено храна, вода или чрез контакт с болен човек, който е в изпражненията и повръщано излъчва големи количества Vibrio холерният. В този случай, Vibrio холерният е вписано в устата със замърсени ръце до леглото и в контакт с различни предмети, съдържащи подбрани пациенти (битови предмети, замърсени бельо и така нататък. Г.). Киселинните съдържание на стомаха е пречка за по-нататъшното насърчаване на V. холерният в храносмилателния тракт. Въпреки това, в случаи на намалена стомашна киселинност, ahilii, с изобилие присъствие на Vibrio напитка или храна в буците те могат да преминат през тях фатално за киселинна бариера на стомаха и в дванадесетопръстника, и след това в тънките черва. В червата, Vibrio холерният са алкална среда и изобилие от храна
протеин разбивка, което им позволява да се размножават бързо.
В същото време има разпадане на микробни клетки с освобождаването на ендотоксин, което некротизиращ чревния епител. Via лимфните и кръвоносните съдове повредени чревната лигавица ендотоксин и отпадъци от V. холерният влизат в кръвта и причиняват цялата симптом холера - диария, повръщане, смущения на вода и сол обмен, тежки условия с сърдечно-съдовата и нервната система, обща токсичност. Инкубационният период на холера в краткосрочен 1-2 до 5 дни. Заболяването обикновено се появява внезапно. Следните форми на холера отличават клиничното протичане на заболяването:

1. ентерит Vibrio (Vibrio диария или диария). Това е лека форма на холера. Диария и повръщане в тази форма на заболяването може да бъде еднократна, но дехидратация не се наблюдава почти. Състоянието на пациента е задоволително. Продължителност на заболяването обикновено се ограничава до 1-2 дни;
2. Vibrio гастроентерит. Тази форма на холера със средна тежест. Гастроентерит обикновено започва внезапно с появата на форма на диария, която се превръща по-често до 15-20 пъти на ден. Председател на пациента, с плаващ в него фрагменти от некротичен епител прилича Congee. След това се присъединява към диария и повръщане. В резултат на това тялото на пациента рязко дехидратира се появи конвулсии отделните мускулни групи, дрезгав глас става, температурата на тялото намалява. Лошото здраве на пациентите. Те се оплакват от неразположение, тежка слабост, сухота в устата и жажда;
3. леден холера. Това е най-тежката форма на холера. Клинични ефекти са същите като тези на гастроентерит, но толкова по-изразен. Fluid загуба може да достигне 8-10% от теглото на пациента. Кожата е дехидратирано, студен на пипане, тя губи тургора и ще се откаже. Сърдечната активност рязко атенюиран поради увеличаване вискозитета на кръвта, има силна задух, цианоза (цианоза), анурия (липса на урина), телесната температура се намалява до 35-34 °. Смъртността е най-висока при тази форма на болестта.

Има преходно algidnye тежките форми на холера, които в отсъствие на диария и повръщане в резултат на рязане са фатални интоксикация (сух холера).

Патогенеза, клинична и микробиологична диагностика на холера, определен в съответствие с инструкциите и ръководствата на клиничната и лабораторна диагностика, лечение и профилактика на холера.                                

Имунитет. Преместен холера оставя достатъчно доказателство immunitet- рецидивиращо заболяване са редки. В организма се възстанови от откриването bactericidin, аглутинини, pretsipitiny и bacteriotropin.
Микробиологична диагноза. Материал за лабораторно тестване за холера са изпражнения и повръщано, обекти, заразени с секрети на пациенти, гнил материал, вода, храна и така нататък. Г. холера принадлежи към група от особено опасни инфекции, така че ограда материал и транспортирането им до лабораторията си бактериологично изследване изискват специални предпазни мерки. Роден материал (фекалии и повръщаното) събрани в отделен кораб, промива се старателно преварена вода от възможно остатъчен разтвор дезинфекция. На дъното на съда се поставя по-малък съд или стерилен лист пергаментова хартия, целофан, и т.н. Използване стерилен метал, картон или дървена разпределение лъжици в обем 10-20 мл се прехвърля в стерилна широко гърло буркан, плътно затворена стъкло или корк, който се намира под пергаментова хартия. А запушалка на буркан изравни двуслоен voschanoy или пергаментова хартия. При липсата на широки буркани устата екскрети проби могат да се поставят в стерилни епруветки. В този случай, материалът за прехвърляне е стерилна стъклена тръба с диаметър 0.6-0.8 cm и дължина 6-8 см. Тръби сцепление форцепс, лъжичка изолация и се поставя в тръба, която е затворена водоустойчив щепсел.

Фиг. 82. Специална линия за събиране на материал на холера.

За вземане материал при пациенти с тежък гастроентерит, е възможно да се използва каучук катетър, единият край на която се въвежда в ректума, а другият се спуска в кутията или флакона. Течните движения на червата са изготвени в съда свободен или под лек натиск върху коремната стена. Вземете материал за научни изследвания може също ректално стъклени тръби, ректални тампони и специален цикъл. Панти изработени от алуминиева тел с диаметър 2-3 mm и дължина 40-50 см, сгъване два пъти (фиг. 82). Стерилен контур се навлажнява със стерилен физиологичен разтвор и се прилага в ректума 8-10 см. Взети материал се инокулира върху хранителна среда, или се поставят в консервант течност. След използването на цикъла дезинфекцирани чрез кипене.
При определяне на аутопсия диагностика сегменти взети от горната, средната и долната част на тънките черва приблизително 10 см дължина. Сегментите се нарязват между двете лигатури, наложени на двата края на секцията на червата взети. Жлъчния мехур се отстранява след лигиране на канала като цяло. Вземат проби трупове на органи се поставят поотделно в стерилни стъклени запушалки буркани с коркови тапи или горната и изравни двоен слой от импрегнирана хартия.
За материали, които са изпратени в лабораторията за анализ, не забравяйте да прикачите документ, който определя собствено, бащино, фамилно име и възраст на пациента, мястото и времето на вземане на материала и името му, неговата цел, а диагностицирането на вероятна зараза, и така нататък. D. Ако е необходимо, прехвърляне на материала в отдалечени лабораторни буркани се поставят в метален контейнер (Bix, кофи, саксии) стърготини отместване, хартия или памук и се поставят в дървена кутия, която е свързана, запечатани с восък. На капака на кутията с мастило или боя вземане на надписа: "Горе. Внимание "и в тази форма се изпраща на лабораторията по куриер.
За да се идентифицират vibriocarrier rekonvalestsentam и здрави лица, които влизат в контакт с източници на инфекция или инфекциозни материали, получава слабително (25-30 г магнезиев сулфат) за събиране на течни екскрементите от горната част на червата. Проби от изпражнения се поставят в 1 ° / на пептон вода.

Vibrio холерният е човешкото тяло доста бързо умира, така че ако това е невъзможно да се изследва материал в следващите 3 часа, след като я, трябва да използвате консерванта течността.
Съставът и методът на получаване консерванти. 1,1% пептон алкална вода. Тази среда се получава от изходен разтвор с дестилирана разреждане пептонова вода го 10 пъти.
За основния разтвор се смесват в хаван пептон 100 грам сух пептон, 50 гр сол и 25 г натриев карбонат. Тази смес се разтваря с кипене в 1 л дестилирана вода след това се прибавя 1 г калиев нитрат. Разтворът се филтрува през филтърна хартия, дозира във флакони от 100 мл и се стерилизира в автоклав при 120 ° в продължение на 20 минути.
Пептонова вода се излива в епруветки (10 мл) и флаконите (50 мл) и се стерилизира чрез довеждане на рН до 8.2-8.4 горе.

1. Алкална пептонова вода с калиев tellurate. Приготвя работно разреждане на калиев телурит 1: 1000. се прибавя 1% пептон алкална вода след автоклавиране работно разреждане на калиев телурит до крайна концентрация от 1: 100 000. Средата се получава преди употреба, или не по-рано от 24 до 48 часа.

калиев телурит произведени под формата на сух прах или 2% разтвор във флакони. Телурит серия трябва да се проверява за отсъствие на инхибиторен действието на Vibrio холерният.

1. Алкална tauroholatovaya telluritovaya пептон среда (течна среда Монсури). В 1 литър дестилирана вода се разтварят с загряване: 10 грама триптиказа, натриев хлорид - 10 г, таурохолат - 5 г, милионграма natriya- карбонат се довежда до рН 9.2, излива се в ампули или контейнери с широко гърло и капачка на винт, автоклавира при 1.5 атм в продължение на 15 минути и се добавя калиев телурит до крайна концентрация от 1: 100,000.
2. Консервант Venkatramena - Ramakrishnan. Подгответе основен разтвор. В 80 мл гореща дестилирана вода се разтварят 12.4 грама борна киселина и 14,9 грама калиев хлорид, охлажда се и се довежда до 1 литър. От основния работен разтвор се приготвя както следва: 250 мл от изходния разтвор се смесва с 133 мл 0,8% разтвор на натриев хидроксид, разбърква се коригира до 1 литър с дестилирана вода и се прибавя 20 г суши морска сол. Течен рН се коригира до 9.2, филтрува се през хартиен филтър, разпределен в 10 мл широки буркани устата с накрайници тапи и се стерилизира в автоклав 15 минути при 120 °.

Етапи на микробиологична изследвания. Етап I. а) микроскопско изследване. От доставят в лабораторията материал (изпражнения, повръщане) подготвя няколко инсулти, суши на въздух и се фиксира с фиксатор течност (етилов алкохол смес Никифоров). фиксиране на топлина не се препоръчва. Част от намазки оцветени с воден фуксин, друг - Грам. Оцветените препарати под микроскоп заедно с типични форми на Vibrio холерният под формата на тънки и извити пръчки могат да се срещнат coccoid и спирални форми пръчици, подобни на чревни микроби коремен група. Резултатът от микроскопско изследване има само индикативна стойност.
б) бактериологично изследване. В изпражненията, повръщане смесват добре и се първичната култура на един от течна среда и на твърда среда хранителни вещества. Като течни носители обогатяване препоръчани 1% пептон алкална вода, 1% пептон вода с калиев телурит и течна среда Монсури. Околна среда телурит е инхибиторен дори при ниски дози може да забави сеитбата развъждане холера. Като твърди носители на хранителни вещества се използват паралелно алкална агар и един от селективна среда (агар, TCBS, сряда Арънсън, Монсури среда). От пациенти с тежка холера и от трупове в средата за съхранение достатъчно 0,1-0,2 мл сеят изпражнения, с леки форми на заболяването, както и 0,5-1 мл нормален - 2-3 грама на изпражненията.
Културите се инкубират в инкубатор при 37 ° алкална пептонова вода за 6-8 часа в пептонова вода с калиев телурит 12-24 часа на алкален агар в продължение на 10-12 часа и 12-24 часа за селективна среда.
Бактериологични изследвания продължават през следващите 6 етапа.
Етап II. 1. Преглед на културите на 1-ви среда натрупване, изучават модела на растеж на него.
С нарастването на Vibrio холерният в течната среда в рамките на три часа след посяване наблюдава лека опалесценция и след 6 часа е възможно да се наблюдава появата на тънък мек филм, както се вижда на стената на тръбата в малкия си наклон. В по-късни периоди (8-12 часа), образувани вижда ясно синкав филм (при разпределяне холерният класически тип) или мръсно бял филм (за разпределение холерният биологичен El Tor). При разработването на огнище епидемия холера, и в резултат на антибиотично лечение на пациентите могат да получат груби варианти на Vibrio холерният (R-форма), образувайки върху повърхността на течната среда груби, тежка или сух, набръчкана филма.

1. Тъй като филм на повърхността на ва среда за съхранение на един подготви намазки, оцветени и mikroskopiruyut. При откриване на микроби, подобни на Vibrio холерният, определяне на тяхната подвижност в съставите и висяща капка или натрошен чрез поставяне на инжекция в 0,3% полутечен агар дълбочина 2-2,5 cm.
2. Когато достатъчен брой вибриони получаване обездвижване взаимодействие с О-серум фаза контрастира светло или тъмно поле.
3. Презасяване получаване на първия носител на 2-ра чрез прехвърляне на приблизително 0,1-0,5 мл от повърхностния слой на средата в епруветка с 5.10 мл. една и съща среда.

6. Уверете засяване на агар-агар на филм на повърхността. Засяване на плочи, да направи линия с диаметър от 5-6 мм, позовавайки се на това само повърхността на течния слой.
Етап III. 1. Научете растежа на втората среда натрупване и да направи посявка с нея на среда агар-агар. От средство за съхранение на 2-ро произведе същото проучване, което по

1. стъпка се извършва от първото средство за съхранение.
2. Зрителите чаша с култури от нативния материал и колонии са избрани, подозрителен срещу холера.
3. Избрани колонии се изследват върху носител на лактоза захароза.
4. Материалните други характеристики колонии, типични за холера използва за бързо идентифициране на изолирани микроби.

Предварително определяне на Vibrio холерният се провежда въз основа на морфологията на микробни клетки, колония морфология и приблизително реакция аглутинация върху стъкло с холера О-серум, разреден 1: 100 и тип-специфични серуми при разреждане 1:50.
Ако има специфични за Vibrio холерният признаци дават предварителен отговор на положителен резултат от изследването.
Етап IV. 1. продължи проучването на колониите. Тъй култури, направени от лактоза захароза носител, избран култури, които разцепват захароза nonfermenting без газ и лактоза (средно зачервяване в колоната без образуване на газ) за окончателно идентификация.
Окончателното идентифициране на Vibrio холерният се провежда въз основа на морфологията и багрилни свойства на микробна клетка, културни свойства, биохимична активност, agglyutinabelnosti специфичен и тип-специфични антисеруми и чувствителността на диагностичните фаги.

1. Генериране на визуализация чаши с посев от първа пептонна вода, подбор и изучаване на колонии подозрителни към V. холерният (вж. Фаза III, параграф 2).
2. Отчитане на ускорени идентификационните резултати, държани в стъпка III.

Етап В. 1. Отчитане на окончателното определяне на култура, изолирана от нативния засяване материал. при
Vibrio холерният с типични свойства предизвика медиите да свистене с маноза и образуване захароза киселина без газ не се разлага арабиноза. Въглехидрати функция ферментация не са специфични само за V. холерният и оценено в комбинация с други диагностични характеристики, предимно с серологичен.
Протеолитични свойства на изолирани култури се записват на 2-3 и ден. Vibrio холерният причинява втечняване на желатина е характерно фуния с форма на въздушни мехурчета в горната част (вж. Фиг. 81). Въпреки това, има холера вибрион, които дават една и съща картина се втечни желатин.
Определяне на антигенни свойства. Антигенните свойства на избрания култура се определя, както е описано по-горе, на плъзгача в разгънато или в тест за аглутинация тръби един. Всички холера О-слепен серум (суха предварително разтворен в 1 мл дестилирана вода) се разрежда с физиологичен разтвор от 1: 50 до титър. Към 0,5 мл от всеки от получените разреждания на серум се прибавя 0,5 мл суспензия проучване микробна култура, съдържаща 1 млрд. Микробните органи в 1 мл холера стандарт мътност или 500 млн. SCI стандарт бактериална № 5. По този начин, количеството на серумните разреждания двойки. Последно развъждане трябва да съответства на титъра на серума е посочено на етикета. Аглутинацията, както обикновено, придружено от контрола на антиген и серум контрол. След смесването чрез разклащане епруветките се поставят върху стативи последните 2 часа в термостат при 37 °. След този период бяха произведени предварителните резултати инвентаризация. Крайният резултат за регистрация извършва след 20 часа инкубация тръби при стайна температура. Оценка на резултатите се извършва по обичайните методи.
За определяне на серотип на Vibrio холерният получаване аглутинация реакция на стъкло със стандартни серуми Inaba и Ogawa, разреден 1: 50 с контролен антиген в спада на физиологичен разтвор. При положителна реакция аглутинация индикативна дават подробно взаимодейства със същия серум, разреден до титър.
Диференциацията между вибриони класически тип и El Tor вибриони извършва въз основа на лизирани култури диагностичен бактериофаги С и El Tor II- чувствителност на микробната култура polimiksinu- аглутинация на пиле eritrotsitov- хемолиза овце eritrotsitov- реакция Voges-Proskauera- geksaminovogo тест.
Тестове с холера бактериофаги. За да се определи биотип В. холерният холера използва бактериофаги С и El Tor II, произведен от медицинската индустрия в течна форма, в ампули.
За определяне на реакцията с помощта на блюдо на Петри, изпълнен с 1,5-2% хранителен агар рН 7,4-8,0. След предварително сушене на културална среда дъното на чашата е разделен на сектори на броя на 10-кратни разреждания на фаг (от твърдо в работа) на флаконите на етикета. Епруветката, съдържаща 3 мл 6,0% агар Hottinger, разтопи и се охлажда до температура от 46 °, се прибавя 0,1-0,2 мл 3-4 часа бульон култури от изследваните щамове Vibrio, култура се смесва добре и се излива върху повърхността на агара в чашата Петри. След втвърдяване на агара слой на плочи се суши в продължение на 30 минути при стайна температура и след това в секторите на централната линия се прилага с диаметър от 2-3 мм разреждания на капки на чаша фаги С, от друга - фаг El Tor II. За сушене капчици фаг чаша се държи при стайна температура в продължение на 15-20 минути, след това обърната надолу и се поставя в термостат при 37 °. Прочетете по 12-16 часа, в случай на спешност - в 4-6 часа.
Бактериофаг Тъй като единствено активно срещу класическа вариант холера, El Tor бактериофаг II действа само в El Tor изпълнение на.
Чувствителност към полимиксин. Чувствителността на микробиални култури полимиксин определя чрез посяване изследва микробна култура на плочи от хранителен агар рН 7,6, съдържащ полимиксин М или V, в размер на 50 единици на 1 мл от антибиотик среда.
Резултатите отчитат растежа на културите след инкубиране при 37 ° С в продължение на 18 часа. Холерният El Tor polimiksinovoy растат по средата, класическата Vibrio холерният върху него не расте.

Хемаглутинационната пилешки червени кръвни клетки. На предметно стъкло се поставя капка от физиологичен разтвор и се стрива в него линия 18 часа агар култура от Vibrio изследвани до гъста суспензия след това се прибавя капка суспензия 2,5% кокоши еритроцити, промива се два пъти с физиологичен разтвор. Суспензията от еритроцити и Vibrio смесена светлина люлеене стъкло. Реакцията е придружена от две контроли - 2.5% суспензията от еритроцити в разбъркан капка физиологичен разтвор (контрола еритроцити) и суспензия от вибриони за изпитване на спад на физиологичен разтвор (контрола) антиген.
Ако резултатът от реакция (отрицателна контрола) на еритроцитите аглутинация на настъпва в рамките на минути.
Vibrio холерният биологичен El Tor лепя пилешки червените кръвни клетки, класическата Vibrio холерният не водят до тяхното аглутинация.
Овце еритроцитите хемолиза (Greig сонда). Към 1 мл от нощна култура на изпитваните вибриони отглеждат върху Hottinger бульон или Martin, се прибавя 1 мл от 1% стерилна суспензия взети овчи еритроцити. Смес на културата и еритроцити внимателно се разбърква и се поставя в 2 часа в термостат при 37 ° С и след това се инкубират до следващия ден в хладилник. След това се вземат под внимание резултатите от реакцията. Разтваряне еритроцити (кръв лак) в отсъствието на хемолиза контрол тръба (суспензия от еритроцити в стерилна хранителна среда) се обозначава като положителна реакция.
хемолиза знак не е специфично само за V. холерният, тъй като много не-холера вибрион имат способността да причини хемолиза.
Voges-Proskauer реакция. Реакцията е възможността за образуване на микробен atsetilmetilkarbinol култура. За неговото откриване изследва култура се инокулира в глюкоза-Clark фосфат бульон (0.5 г пептон, 0.5 грама глюкоза и 0,5 г калиев фосфат се разтварят в 100 мл дестилирана вода). След 1-3 дни инкубиране посев в термостат при 37 ° до 1 мл култура по проучване се добавя 0,6 мл 2-нафтол (6% разтвор в абсолютен
алкохол) и 0,2 мл от 4%. разтвор на калиев хидроксид. Епруветките се разклащат и поставят в 1 часа в термостат.
Ако положителен резултат на реакционната характеристика на Vibrio El Tor настъпва или розов рубин червен цвят на средата, което се дължи на atsetilmetilkarbinola на образуване.
Geksaminovy ​​тест. От дневно агар култура на тест Vibrio Извършване посев в 1 мл бульон или Hottinger Martin рН 7,6. Засяване се инкубира в термостат при 37 ° в продължение на 24 часа, след което контур (диаметър 0.3 mm) на микробен суспензия се прехвърля в 1 мл глюкоза-geksaminovoy среда. Инокулираната среда се поставя в термостат при 37 °. Резултатите дават възможност за 6-24 часа. Холерният El Tor за 6-8 часа среда променят цвета си от зелен на жълт. Класически Vibrio холерният през това време не се променя цвета на околната среда, но цвета на околната среда може да се променя по-късна дата.
Първите три изпитвания (диагностичен лизират чрез бактериофаги, чувствителност към полимиксин и способността на културите да аглутинира кокоши червени кръвни клетки) са основните, а останалата част - от филиала.
Така окончателното определяне на изолираните микробиални култури се подозира, Vibrio холерният, на базата на набор от атрибути, NE: rechislennyh в таблица. 19.
метод обездвижване на Vibrio холера под влиянието на конкретен О-серум и типичен на холера бактериофаги. Метод и обездвижване повлияни от микроаглутиниране Vibrio холера О-специфичен серум и стандартни холера бактериофаги позволява диагноза за няколко минути при концентрация не по-малко възбудител 4,3H10 клетки в 1 мл тестов материал.
Реакцията на имобилизация е специфичен и позволява на първия отговор сигнал в 15-20 минути от началото на изследването.
Специфична превенция и терапия. Специфична превенция холера се постига чрез имунизация на моновалентен фенол убит V. холерният. Vibrio специфичен бактериофаг и антибиотици (тетрациклин, окситетрациклин, хлортетрациклин) използвани за лечение на успешно.

На хранителна среда за отглеждане на V. холерният.

1. Алкална агар. Към 1-литров конвенционален месо peptoppogo агар се прибавя 30 мл 10% разтвор на натриев карбонат, варени в продължение на 45 минути, реакцията се проверява (рН 7,8-8,0), разпределя във флакони и епруветки и се стерилизира в автоклав 20 минути при 120 °. Срок на годност 3 месеца в хладно място.
2. Васто-агар TCBS. Суха среда за диагностициране на холера (рН 8,6). За един литър дестилирана вода се вземат 89 грам от сухия среда се загрява до кипене (до пълно разтваряне). Сряда, не стерилизация, се излива в чашата. Свързани организми в тази среда, като правило, не растат, с изключение на някои видове Proteus, образувайки колония от тъмно жълт цвят.
3. Сряда Арънсън. месо-пептон агар 3% варят в продължение на 4-5 часа Koch апарат. Към 100 мл гореща среда се прибавя 6,5 мл 100% безводен хидроген карбонат разтвор на сода и се стерилизира в продължение на 10-15 минути при температура от 100 °, след което 100 мл гореща среда се прибавя 5 мл 20% разтвор на захароза и 5 мл 20% разтвор на декстрин един, предварително стерилизира в автоклав или чрез филтруване, 0.4 мл наситен алкохолен разтвор на основния фуксин и 2 мл прясно приготвен 10% разтвор на натриев сулфит, предварително стерилизирани чрез кипене. Готовият среда се охлажда до температура от 45-50 °, излива се в чаши.
4. Сряда Mont сура (алкална tauroholatovaya telluritovaya желатин среда). В 1 литър дестилирана вода в кипяща водна баня, първоначално се разтваря 10 г натриев хлорид и 15 г агар-агар, и след това, като се разбърква често триптиказа - 10 г натриев таурохолат - 5 г натриев карбонат - 30 г желатин и Difco - 1 гр регулира до рН 8.5, излива се в 20 мл колба с стъклени запушалки земята и се стерилизира при 1.5 атм. 15 miiut. Средата се съхранява на хладно място.

Преди да се разлива в чашките на калиев телурит се добавя при концентрация от 1: 200 000. Плочите с носителя могат да се използват в продължение на 5 дни. Proteus колонии върху тази среда имат са наблюдавани сивкав център и краищата на облака.

1. Лактоза-захароза (poliuglevodnaya) среда. В един литър дестилирана вода се разтварят с подгряване: пептон - 0,5 г натриев хлорид - 0,5 грам-1 г лактоза, захароза - 0,1 гр, агар - се прибавя 1 мл 4 индикатор Andred инсталиране рН - 7,4, дозира във флакони висока колона и се стерилизира в автоклав при 112 ° в продължение на 20 минути. Подготвената среда след стерилизация, Ръсел косят като среда и посяване го произвежда от обичайния метод.

Холера и холера, като Vibrio, разделяне на захароза добив зачервяване в колоната без образуването на газ. Дизентерия и коремен тиф-Паратиф бактерии не променят цвета на околната среда. Е. Coli форми с киселина газ в колоната, и частта наклон на средата.

1. Глюкозо-geksaminovy ​​бульон. Кристална хексамин (хексамин) в количество от 1 грам се прибавя към 100 мл хранителен бульон, рН 7,1. В друг бутилка с 100 мл от същата хранителна среда се прибавя 1 г глюкоза. Както 1% разтвор се стерилизира чрез филтриране през бактериален свещи и се съхранява при температура от 10 °. Преди определяне на реакцията 100 мл стерилен разтвор на глюкоза вземат 50 мл и 50 мл от разтвор на хексамин. за

100 мл глюкоза-geksaminovogo бульон се прибавят 0,1 мл 1,6% алкохолен разтвор на бромтимолово синьо индикатор среда трябва да има трева-зелен цвят.

1. Кодама сряда. В 100 мл вода се разтваря 1 г пептон, 0,5 г разтворимо нишесте, регулира рН 7,4, се разпределят в стерилни флакони с 5 мл и се стерилизира чрез фракционна при 100 ° в продължение на 3 дни, за 20 минути.