Breath микроби - микробиология с техниката на микробиологични изследвания

Видео: 01. Андрей Shestakov. Микрофлора на човешката ...

Микробния живот, подобно на всички живи същества, е свързана с непрестанни разходи на енергия, и по тази причина да се запази физиологичен баланс трябва постоянно обновяване на своите резерви. Последното се извършва с микроорганизми от процеса на дишане.
За разлика от висши растения и животни процес дишане в микроби, въпреки микроскопичен размер, характеризираща се със своята сложност и разнообразие, която се основава на действието на различни ензими. По вид на дишането организми са разделени в три групи:

1. задължи аеробика, разработване само със свободен достъп на кислород. Процесът на дишането се извършва включваща молекулярен кислород във въздуха (например, Vibrio холерният).
2. задължи анаероби, които могат да живеят само в отсъствието на атмосферен кислород (например, тетанус бацил).
3. факултативни анаероби, която включва по-голямата част от инфлуенца mikroorganizmov- те могат да съществуват в отсъствие на кислород във въздуха и с малко достъп до нея.

Пастьор първо е било установено, че някои микроорганизми могат да се развиват в отсъствие на кислород, за да се получи необходимата енергия в разпадането на сложни органични вещества хранителен субстрат. Процеси дълбоки разцепване органични съединения съдържа азот, който се основава обикновено анаеробно дишане нарича ферментация. Процесът на аеробни и анаеробни дишане извършва биологични катализатори (ензими), които са в състояние да активират при дишане по време на окислителни реакции. В аеробни и анаеробни дишането в първата фаза на метода е маркиран активиране на ензими от групата на водород, дехидрогенази, които се водород от субстрат (хранителна среда) и го прехвърлят от една органична молекула да drugoy- от един към друг акцептор (лат. Acceptor- наблюдение). И тъй като структурата на водородния атом на електрон орбита, има един, процеса на отнемане на водород от субстрата е окисляване. В последната фаза при аеробни дишане аеробни дехидрогеназа предаване лишена от субстрат водород директно атмосферен кислород, което е краен акцептор. Това могат да образуват водороден пероксид, който действа като окислител на органични съединения. Ензимът каталаза е достъпна за всички аеробни микроорганизми, се разлага на водороден пероксид във вода и кислород, и ензима пероксидаза активира кислород пероксид.
Анаеробните дехидрогенази не могат да дадат атмосферен кислород, водород, и се прехвърля към друг акцептор (ензими други вещества появяват в процеса на ферментация).
Както при аеробни и анаеробни на дишането се случи, окисляване и възстановяване на някои други вещества.
Резюме на окисление се състои в загубата на електрони окисляващи вещества, и се появява в намаляването на придържане намаляване електрони вещество.
По този начин, дишане действа микроорганизми са серия от последователни окислително-редукционни процеси, които водят до освобождаването на енергия, необходима за живота си.
Най-добрите продукти за окисление на аеробни микроорганизми са захари, алкохоли и органични киселини. Комплекс азотни съединения се използват за дишане последния. Анаеробни микроорганизми се използват като субстрат окисляващи съединения и минерални вещества, органични.

Анаеробно дишане е по-малко ефективно от аеробна, както се вижда от следния пример. В процеса на аеробно разграждане на една молекула от гроздова захар освободени 674 калории на топлина. (SbN120b + 602 = 6N20 + 6S02 + 674 калории) и анаеробна разлагане в същата молекула - само 27 калории (C6Hi206 = 2C2H50H + 2C02 + 27 калории).
Забележка. Вид на дишането организми е отразено в характера на растежа си по изкуствен медии. Например, бацил нарастък, като облигатен аероб, в епруветка или колба с хранителен бульон нараства само повърхностно във филм, оставяйки среда прозрачен, анаеробни бацили - само Pridonya и бактерии ентерично коремен група (факултативни анаероби) расте еднакво във всички бульон слоеве, което води дифузно.
техники за отглеждане анаероби. За култивирането на анаеробни бактерии, в допълнение към съответния културална среда, трябва да се създадат свободни от кислород условия на околната среда. Методи за култивиране на анаеробни бактерии има много. Съгласно принципите на базата на тези методи могат да бъдат разделени на химични, физични и биологични.
Химични методи. Има два метода за култивиране на анаеробни бактерии. Първият метод се състои в това, че инокулираните анаеробни тръбите или чашите се поставят в затворено пространство (например, ексикатор) и дават някои кислороден абсорбер - натриев Hyposulfite и алкална пирогалол разтвор. В 1 г пирогалол вземат 10 мл 10% разтвор на това количество NaOH- вещество, способно да се свързва с кислород в обем от около 200 мл въздух.
Най-простият методите на анаеробиоза използващи тази смес, както следва:

1. Памук тампон запушалка с засяването на културата на култура, и се намалява малко по-дълбоко овлажнен с разтвор (0.5 1 мл). достъп на въздух се спира чрез запечатване с гумена запушалка или капачка гума.

1. метод на Бюхнер. Културални шишенца бяха поставени в специална епруветка Бюхнерова (фиг. 40) или в епруветка с стеснение (картофи), където пред-налива 1 г пирогалол, след това се излива пипета стена 10 мл 10% разтвор на NaOH и флаконът се затваря с гумена запушалка.
2. Културелна микроби в медиите в блюдо на Geydenrsyha - ястия са специално проектирани сушилня. Плаките се поставят върху метална стойка или в стъклена чаша. Пирогалол излива алкален разтвор предварително се излива през фуния, след затваряне на капака запечатани с глина или вградени в парафин.
   
   Фиг. 40. Тръбна Бюхнерова за отглеждане на анаероби.
   При втория метод се добавя културална среда вещества, влизащи в редуктори са кислород. Такива вещества включват пирогроздена киселина, цистеин, глюкоза, глицин и други. В този случай, възможно развитието на анаероби достъп молекулен кислород от въздуха.
   Физични методи.
   
   Фиг. 41. анаеробно.

Видео: Бактерии 1959

1. Отстраняването на въздуха от културална среда преди посяване в кипяща водна баня в продължение на 15 минути, последвано от бързо охлаждане до 45-50 ° С. За да не се позволи на въздуха да влезе отново в сряда, епруветката се запечатва или на повърхността на средата е изпълнен със стерилна парафиново масло.
2. Получаване на изолирани колонии в дълбоките слоеве на средата по метод Vignal. посев машини от метод Vignal е както следва: 3-4 тръба на разтопен агар изработка засяване на изпитвания материал с постепенното му разреждане. Все още не се втвърдява агар след инокулация от всяка епруветка печалба в Пастьор пипети, които след това се запечатват само с изваден край (не държи при уплътняване на материала да се избегне пръски противоположния край захваща). Тръбата се охлажда бързо и се прехвърля в термостат. 2-3 дни с успешен източник размножителния материал може да се наблюдават отделни колонии.

За да се изолира от колониите в предназначения за място в разрез файла с тръба, след което тръбата е лесно да се счупи. В този момент съдържанието излива в стерилна петриева Geidenreich - Петри колония вземе линия или изтеглящи изготвен в тънка пипета и се прехвърля в хранителна среда или в агар инжекция колона захар.

1. Отстраняването на въздуха (и следователно кислород) в средата механично. За да направите това, използвайте специални устройства - анаеробно (Фигура 41.). Анаеробните в най-простата си форма е правоъгълна или цилиндрична метална кутия, затварящ се капак на гуменото уплътнение на. Цилиндърът е снабден с метален кран, присъединила се към помпата. Епруветките и чашата се поставя вътре с култури, въздухът изпомпва помпа. За култивирането на строги анаероби достатъчно намаляване на налягането до 1 мм.

Биологични методи. От биологични методи най-често се използва заразяване животни и метод Fortner.
При заразяване на животните, използвани материал се прилага към животното в смес със специфичен антисерум. Този метод може да се използва по два начина:

1. За изолиране на микроорганизми от сместа. Ако микроб, съответстваща серум, той умира. Други микроби също не съответстват на даден серум екстрахира от животното.
2. За определяне на токсините. В присъствието на токсин животното тестов материал получен в смес с антитоксично серум оцелява. Контрол животно умре. Такава диагноза е широко използван в биологичната проба на токсина.

метод Fortner. Този метод носи лабораторното оборудване към природните условия на развитие на анаеробни микроорганизми. Fortner прилага метод симбиоза аеробни микроорганизми, способни на силно поглъщане на кислород във въздуха, С анаероби инокулират върху кръвен агар в чаша Geidenreich (Bact prodigiosum.) - Петри. Чашата се разделя на две части нарязани ленти от агар за предотвратяване на растеж по време на непрекъснато разбъркване култури. От една половин чаша посяват анализира за анаероби материала от друга - очевидно известен облигатен аеробни (Bact prodigiosum Sas Subtilis и т.н ....).
За изолиране на вътрешното пространство на чашата от външния ръб на атмосферата е изпълнен с восък или запечатани с пластелин. метод Fortner може да се получи добър растеж повърхност на анаероби.
На хранителна среда за отглеждане на анаероби. Буйон Kitta - Tarotstsi. Епруветката, съдържаща месо-пептон бульон, добавя парчета варени и се промива с вряща вода за сито на черния дроб (3.5 грама на епруветка) или мляно месо, изсипва вазелин масло, и се стерилизира при 115 ° в продължение на 30 минути.
Кръвен агар с глюкоза (Tseysslera). Слабо алкална агар, съдържащ 3.2% агар и 2% глюкоза, излива се в голяма епруветка (дължина 25 cm и 2.5 см в диаметър), около 60 мл и се стерилизира всеки 30 минути при 110 ° С и като такива запази. Преди употреба, агар разтопен във водна баня, охлажда се до 45 °, към всяка епруветка се прибавя 12-15 мл стерилна дефибринирана кръв, смесват се и се излива в 3-4 Geidenreich петриеви панички. Завършил чаши преди сеитба поддържа в продължение на 2 дни при стайна температура.
Агар Veyona тръби. За отваряне огнище бульон се добавя 2% агар и 0.5% глюкоза. Коригирана рН 7,4, се излива в тясната тръба (диаметър 0,3-0,5 см, дължина 20 см). Колона агар трябва да бъде не по-висока от 2/3 от дължината на тръбите и се стерилизира чрез фракционна 3 дни при 40 минути tekucheparovom апарат.