Бактерии коклюш и paraklyusha - микробиология с техниката на микробиологични изследвания

Един от най-честите инфекции в детска възраст е магарешка кашлица. агент причинител на заболяването е намерено 1906 Бордо и Генгоу в слюнката на пациенти с коклюш и нарича Bordetella коклюш (фиг. 75).
Морфология и багрилни свойства. Кратки пръти със заоблени краища имат дължина от 0,5 до 2 микрона и дебелина 0.2-0.5 микрона. Все пак, не образуват спори, gramotritsatelny- някои щамове произвеждат капсула.
Културни и биохимични свойства. Най-добрият растеж се наблюдава при температура от 35-37 ° - факултативно анаероб. Първото поколение изисква наличието на кръв в средата. Коклюш бактерии за отглеждане се прилага глицерин-картофено кръвен агар, предложен от Bordet и Генгоу, млечна кръвен агар и казеин агар-въглен (АМС).

Фиг. 75. пръчици коклюш. Намажете от култура.

1. Сряда Bordet-Джан. За получаването на глицерин - агар картофена кръв 100 г ситно нарязани картофи с 200 мл 4% воден разтвор на глицерол с се вари в автоклав, оставя се да се утаи и течността се декантира от утайката. 50 мл от този течен 1 се прибавя 150 мл физиологичен разтвор и 5 г натрошен и промиват агар-агар се разтваря, се излива в епруветки и се стерилизира. Преди употреба, разтворен агар се охлажда до 45 ° С и към него се прибавя равен част от дефибринирана заек или човешка кръв, затопля се до 40-45 °. Кръвен агар се оставя да се охлади в наклонена позиция и се излива в чашата.
2. Мляко-кръвен агар. За получаването на млечна кръвен агар препоръчва стопи 5% воден разтвор на агар, съдържащ 1% NaCl и се смесват в равни количества с затопля обезмаслено мляко, след това в рамките на 40 минути на готвене в автоклав при 0.5 атм (по това време, съсирването на млякото). Горещата смес се филтрува през слой от памук марля и се излива равномерно в бутилки и повторно се стерилизира в автоклав в продължение на 20 минути при 0.5 атм. След ostuzhennoy до 45-50 ° мляко агар пренапрежение 20% дефибринирана кръв овце. За да се подтисне външен микрофлора среда за добавяне на пеницилин в количество от 5 единици на чаша (20 мл среда).
3. Казеин въглен агар (АМС) се получава както следва. За 1 литър дестилирана вода се вземат 20 мл хидролизата на казеина (получен чрез триптично смилане), 5 грама натриев хлорид, 0.002 г калциев хлорид, 0.4 г натриев карбонат, 0.002 г магнезиев хлорид, 0,25 г фосфорна дикалиева сол, 1 г разтворим нишесте и 20 г агар-агар. Средата се нагрява, като конвенционален агар, регулира рН 7,2, минерална и се стерилизира в автоклав при 0.5 атмосфери в продължение на 30 минути. Преди употреба в разтопено и ostuzhennoy среда се прибавя 0,2% активен въглен и 3% дрожден екстракт.

Колониите коклюш стърчи малко, отгледани, перлен хемолиза с зона (фиг. 76). С растежа на по-нататъшно култивиране става по-груба и буйни. Коклюш бактерии не ферментират захари не формират индол, не възстановяване на нитритите.
Resistance. Bordetella коклюш ниска стабилност, бързо убити чрез кипене и действието на дезинфектанти. Към студен коли коклюш по-малко чувствителни.
Патогенност при животни и образуване токсин. Коклюш коли патогенни за бели мишки, зайци и морски свинчета. Експериментални животни, когато се прилагат към тях големи дози на живот, така и мъртви култури умират под влиянието на ендотоксин освободен по време на разрушаването на микробни клетки. За изследването на пертусис токсин пръчки използват зайци албиноси. Когато се прилага интрадермално им микроби култура след 18-24 часа на мястото на инжектиране, образуван кръвоизлив на с последващо некроза на кожата.
През последните години той успя да се токсична екзотоксин тип вещество, което, когато се прилага при бели мишки, което води до натрупване на противоотрова.
Източникът на инфекция са предимно при деца катарален стадий на заболяването, диспергиращи бактериите в капчиците на слуз от кашлица. Заболяването се предава по въздуха капчици. Atrium е лигавицата на горните дихателни пътища. Микробите са локализирани в лигавицата на дихателните пътища и в белите дробове, но в процеса на заболяването се дължи на действието на токсини, участващи цялото тяло.
Инкубационният период е 3-11 дни.
Заболяването може да се раздели на три периода: 1) катарален период се характеризира с леко повишаване на температурата, главоболие, кашлица и nasmorkom- продължителност на периода от 5 до 11 дни-2) конвулсивно период - в този период на пациент, страдащ дете от болезнена кашлица атаки. По време на атаката, лицето му става подпухнало, цианоза, очите vypyachivayutsya- брой конвулсивно кашлица по-тежки случаи може да достигне до 30 sutki- 3) razresheniya- период се различава от предходния период, че кашлица са все по-рядко, и пациентите понасят по-добре, най-накрая, просто спрете.
Патогенезата на коклюш е действието на ендотоксини коклюшни пръчки на вагални нервни влакна, на която възбуждане се предават на дихателния център. Различни усложнения, които могат да се появят в магарешка кашлица, някои учени признават в резултат на инфекциозно алергия.
Много подобен на магарешка кашлица клинична картина на заболяването е parakoklyushnaya коли (Bordetella parapertussis). Децата, които са имали коклюш могат да се развиват parakoklyushem.
Според морфологични, багрилни, културни и антигенни свойства parakoklyushnaya пръчка, подобна на коклюш. Той се различава само в характера на растежа на някои хранителни среди и способността да ферментира урея (раздел. 11).
Таблица 11
Основните отличителни черти на коклюшни бактерии и parakoklyusha

Имунитет. Минали медицински листа трайни антимикробна устойчивост. В серума на пациенти и оздравяващи открили аглутинини и допълни фиксиране на антитела.
Микробиологична диагноза. Материал за лабораторно изследване е храчки, често - слуз от носа, гърлото и ларинкса, получена от "кашлица плочи." Изолацията култура донякъде се затруднява от факта, че в гърлото на болни деца, има много сапрофитни микроби, които възпрепятстват отглеждането на коклюш пръчки. Следователно, по-изгодно да се тестове материал от дъното на специален назофарингеален тампон (памучен тампон дълбочина). В допълнение, кашлица пациент може да отсъства за дълго време, по време на снимане материал.

Вземете материал не трябва да се докосва външния ръб на тръбата, както и мукозните език, бузите и кожата към външни микрофлора не получи на тампона.

Фиг. 76. Колонии коклюш бацил в среда, AMC.
Метод ограда материал с тампони значително увеличава процента на инокулацията на коклюш коли.
Взети от материал от пациент "кашлица плочи" или тампон инокулират върху специална хранителна среда: глицерин-картофен агар Бордо, млечен кръвен агар или казеин въглен агар (АМС).
За да се подтисне външен растеж микрофлора, предотвратяване възпроизвеждащи пръчки или коклюш parakoklyusha да агар прибавя в продължение на 0.5 часа преди инокулация пеницилин (15-25 единици на 12 мл среда) и средата се разпределя равномерно върху повърхността. С цел да се осигури достатъчно влага, необходима за възпроизвеждането и коклюш parakoklyushnyh пръчки, поставени в пещ отворен съд с вода. На Bordet-Генгоу среда на 2-5-ия ден на бактериите коклюш и parakoklyusha образуват типичен малък, изпъкнал, ясно дефиниран, лъскава, наподобяващи живачен капчици колонии (фиг. 76). Млечни, казеин и кръвно-агар колония въглища голям, почти бял цвят, с перлен блясък.
От колонии с признаците характерни за бактерии или коклюш parakoklyusha подготвят намазки, оцветени с оцветяване по Грам и mikroskopiruyut. В присъствието на препарати от малки, грам-отрицателни пръти яйцевидна получаване микроскопско аглутинация с пертусис серуми.
Аглутиниращите серум разреден с физиологичен разтвор 1: 100 и плъзгача прилага една капка разреден серум и една капка от физиологичен разтвор да се контролира. Един цикъл се отстранява, единична колония от агара и се емулгира в малко количество физиологичен разтвор. Две до три капки от тази суспензия се смесват с отделни пипети аглутиниращи серум и физиологичен разтвор. Ако положителен резултат на реакцията на аглутинация веднага очевидно, в редки случаи за 5- 10 минути. Спадът на физиологичен разтвор аглутинация и не флуид остава еднакво мътност. Parakoklyushnaya пръчка също аглутини коклюш серумно разреждане в малък, тъй като коклюшни бактерии и parakoklyusha споделят общи антигени.
За диференциация и parakoklyushnoy коклюшни бактерии от колониите на плаките, за да презасяване агар наклонени на същата хранителна среда, която се използва за изолиране на причинителят на патологичното материал. Посев поставя в термостат при 37 ° в продължение на един ден. Чиста култура расте parakoklyushnoy коли в рамките на 24 часа, и коклюш само след 48 часа. Налице е също така промяна на хранителна среда по време на растежа на цвят parakoklyushnoy пръчки. Казеин-агар въглен оцветени дифузно в burovatokorichnevy цвят и агар Бордо и млечни кръвен агар потъмняване значително. хранителна среда цвят не се променя, когато растежа на коклюш коли. Коклюш коли на конвенционален агар не се увеличава, растеж parakoklyushnoy пръчки придружени от дифузно оцветяване среда кафяво. За окончателното идентифициране parakoklyushnoy пръчки дават уреаза проба. Епруветката се разклаща и се поставят в пещ за 30 минути. Parakoklyushnye бактерия производство на уреаза, карбамид се разцепва за образуване на амоняк, който променя цвета на средата на малина-червен цвят.
Серологично диагностика на коклюш се основава на твърдението на аглутинация и свързване на комплемента. Тъй магарешка кашлица развие алергично състояние, е възможно да се диагностицира тест алергия постави че 24 часа след интрадермално инжектиране на 0.1 мл пертусис антиген.
Специфична профилактика. Активна имунизация, използвайки ваксини показват своята несъмнено ефективност.
В момента практиката, въведена смесена коклюш и дифтерия ваксина и коклюш-дифтерия-тетанус. Тези лекарства са смес, състояща се от коклюш бактерии убити тимерозал, концентрира се и се пречиства дифтериен и тетаничен токсоид втората ваксина (DTP).
За да се предотврати деца, при контакт с пациента може да се прилага 1.5-3 мл хуманен гамаглобулин.
Препоръчва се за лечение на антибиотици - стрептомицин, тетрациклин, окситетрациклин и др.