Лабораторна диагностика на туберкулоза - фтизиатрия

9.4. Лабораторна диагностика на туберкулоза
Най-характерни промени в кръвни тестове. Основните причини за промени в кръвта при пациенти с туберкулоза са интоксикация и хипоксия.
При пациенти с начални форми на туберкулоза в кръвта съдържа нормално количество червени кръвни клетки и хемоглобин. С увеличаване на патологични промени в обмена на белодробната тъкан газ е нарушена, в резултат на туберкулозни пациенти може да се развие хиперхромна анемия (увеличаване на хемоглобина намалява броя на червените кръвни клетки). В остър измършавяване на пациента може да бъде наблюдавано явление хипохромна анемия, който се характеризира с намаляване на броя на червените кръвни клетки и хемоглобин. Бялата кръв по-често могат да се променят. В началните фази на инфилтрация, обостряне на фокусна, хронична, разпространява и пещера процес, в случаен пневмония може да се наблюдава левкоцитоза в диапазона от 12 000-15 000. За всички други форми на туберкулоза, ако няма съпътстващо заболяване на белите кръвни клетки е рядко по-високо от нормалното. Повече типичен неутрофилен ляв смяна, която се наблюдава при началните форми и изостряне на туберкулоза. Показват да забие нож и дори млади неутрофилите. Тя може да се увеличи броят на еозинофилите в някои пациенти по време на антибиотична терапия, както и свързаните с алергични заболявания.
Тежките форми на туберкулоза се извършва с Eosinopenia и лимфопения. Лимфопения характеристика на сирене форми bronhoadenitov, случаен пневмония, милиарна туберкулоза. За малки и нови форми на туберкулоза обикновено се наблюдава лимфоцитоза.
Повишени скорост на утаяване на еритроцитите в зависимост от процеса на туберкулоза, туберкулозен менингит, само ако гризе бъде в нормални граници.

Откриване на микобактерии.

Откриване на микобактерии е от ключово значение не само за диагностика на туберкулоза, че е изключително важно при прогнозирането на хода на процеса, избор на рационални схеми на лечение и точна оценка на неговата ефективност.
Основните методи на лабораторна диагностика на туберкулоза са класически микробиологични методи: bakterioskopiya- култури или posev- биологична проба за чувствителност към туберкулозна инфекция на лабораторни животни.
Събиране на материал за изследване. Спазването на събирането, съхранението и транспортирането на диагностичен материал е много важно, защото това се отразява не само на надеждността на резултатите, но и епидемиологичен безопасността на другите.
Материал за изследване за наличие на М. туберкулоза се събира в стерилни контейнери (стъклени буркани) с плътно капачка на винт. Използването на запечатани контейнери има двойна цел: предотвратяване на изтичане на съдържанието и замърсяване на околната среда на пациента е изключително устойчива на изолация физическо въздействие mikobakteriyami- запазена в контейнера на материала от вегетативно разпространено в околната среда на кисели бактерии.
За проучвания могат да бъдат използвани различни патологични материал: храчки, аспират, съдържанието на бронхите и други материали, получени от изследване бронхоскопски, промивки бронхите и стомаха, ексудати, гной, секрети рани, цереброспинална течност, кръв, урина, хирургически материал, промиване с обекти , органите на експериментални животни, и така нататък.
При пациенти с белодробни форми на целевия процес на изследване е често слюнка. Слюнка колекция - един много важен етап от диагностична процедура, от свободно от които до голяма степен зависи от резултата от изследването. Във връзка с това, е желателно, че събирането на храчки произведен в отделен (кашлица), добре вентилирано помещение. За да се изучи събира част от сутринта. Ако пациентът избира малко слюнка, тя трябва да бъде събрана по време на деня, както и събраните материали е задължително се съхранява в хладилник. Ако едно проучване е направено на фона на лечение, до 2 дни преди да получи храчки на туберкулозата се отменя.
Според препоръките, разработени от Международния съюз за борба с туберкулозата, събиране храчка трябва да се извърши в присъствието на и с прякото участие на медицински персонал. В този случай, лицата, отговорни за събирането на храчки, трябва да се ръководят от следните правила.

Видео: Medinar "детството туберкулоза проблеми днес"

1. Обяснете на пациента причините за изследването и необходимостта да плащам съдържанието на дълбоко дихателните пътища, а не да събира в слюнката на контейнера или на назофаринкса слуз. Също така трябва да предупреди пациента, че той трябва първо да почисти зъбите и устната кухина изплакване преварена вода, което позволява механично отстраняване на по-голямата част на микрофлората в вегетиращи устната кухина.
2. Представите при храчки медицински специалист трябва да отворите стерилен контейнер, махнете капака и да го дам на пациента само долната част на контейнера.
3. Зад пациентът трябва да го насърчава да държи съда възможно най-близо до устните си и веднага го плюе, тъй като храчка отхрачването.
4. След завършване на храчки медицински специалист трябва да оценят неговото количество и качество част съд с достатъчен обем слюнка (най-малко 3 - 5 мл) съдържащ запечатани или гнойни бучки без слюнка внимателно запечатани с капачка на винт, етикетирани и се поставя в специална кутия за транспортиране на лаборатория.

Ако пациентът не произвежда храчки, или само се задават спорадично и широко разпространено, но в деня преди и рано сутринта в деня на събиране на слюнка на пациента трябва да се обърне отхрачващо или прилага дразнещо аерозолна инхалация. Последно провокира засилване на бронхите секреция, кашлица и храчки производство.
За аерозолна инхалация аерозолни инхалатори са преносими тип AI-1. Както инхалиране смес препоръчва 15% разтвор на натриев хлорид в 1% разтвор на натриев бикарбонат (150 грама натриев хлорид и 10 г NaHCO 3 в 1 л дестилирана вода).
В случай на вдишване дразнещо по някаква причина не можете да получите храчки, а след това използвайте промивките на бронхите или стомаха. Последният метод се използва главно в малки деца, които имат лоша кашлица храчки и често го погълнат.
Събиране на вода за измиване, произведени бронхите Отоларинголог. Стомашни промивки бяха взети на празен стомах с помощта на сонда дебелина, след което позволява на пациента да пие или влизащи през сондата 100 - 150 мл натриев бикарбонат (сода) за неутрализиране на киселинните стомашното съдържание. Стомашна промивка трябва да бъде разследван незабавно, за да се избегне увреждане на патогена на стомашни ензими.
Повече ценен материал за изследвания в отсъствието на храчки са аспирати от трахеята и бронхите, бронхоалвеоларен лаваж течност, както и материали и биопсия наблюдение katetero- четка получени от бронхоскопия изследвания.
Фекални култура за микобактерии трябва да се извършва, когато има данни за чревна туберкулоза. В МВТ че частично поглъщат храчки Mycobacterium туберкулоза може да се появи в изпражненията и незасегнати черва. В туберкулоза на червата в изпражненията често се срещат слуз, кръв или дори гной примес. За да се изследва като няколко бучки изпражнения със слуз или гной, разбърква се с 5% изотоничен разтвор на натриев хлорид и се филтрува. Полученият филтрат се смесва с равно количество етанол и се центрофугира. В бъдеще, от тортата направи цитонамазка, която се оцветява от Ziehl-Nielsen. В момента, чревна туберкулоза се случи само в редки случаи, и затова почти не изучаването на изпражнения на БК направи.
Откриване на микобактерии в CSF показва туберкулозен менингит. Все пак трябва да се забравя, че метод намазка микроскопия не може да идентифицира микобактерии в едва 10 - 15% от пациентите с туберкулоза менингит.
За изследвания с цереброспинална течност тръба поставен във вертикално положение в продължение на 8 - 10 часа на хладно място. Ако се образува фибрин филм, той адсорбира формиране елементи и микобактерии. Фибринът филм се поставя върху предметно стъкло и оцветяване с приготвената лекарството Ziehl - Neelsen. Ако филмът не пада, препарат, се получава от центрофугирането.
За откриване на микобактерии в плеврален ексудат в punctates и освобождаване от получаването на фистула се получава по същия начин, както в слюнката.
Ексудати от плевралната кухина, освобождава рани пункция и аспирати от затворен скитащи абсцес, гнойни лезии, асцитна течност и други материали, трябва да се вземат от пациента с всички правила на асептична поставят в стерилен контейнер и транспортирани до лабораторията.
Специално методичен подход изисква изучаването на менструалната кръв. Наличието на този материал в големи количества протеолитично, фибринолитични ензими и други материали, изисква незабавна доставка до лабораторията и внимателно обработката, тъй като менструалния кръвта е много благоприятна среда за микробна флора.
Специално внимание е необходимо да се събират урината. За изследвания с използване на висока доза обикновено сутрин урина, получена след внимателно тоалетна половите органи антисептични разтвори (слаб разтвор на калиев перманганат, риванол и т.н.). Урината се центрофугира, утайката се използва за микроскопия -5 и се третира с 3% разтвор на сярна киселина, но не и с основа. Колекция от дневния урина за бактериологично изследване maloratsionalen. Установено е, че по време на съхранение в продължение на повече от 1 час за събиране на урина след като броят на микробните клетки неспецифични микрофлора увеличава няколко пъти. Ензимите на живота на тази флора могат да възпрепятстват растежа на микобактерии.
Складиране, съхранение и транспортиране на диагностичен материал. На разположение на ТБ функционират специализирани лаборатории за производство на бактериологични изследвания.
В болниците стерилни контейнери с слюнка или други патологични снимки доставяни директно до лабораторията. Събиране на материали от амбулаторни извършва, както е описано по-горе, под прякото наблюдение на медицински сестри.
Ако болницата не е проведено изследване за идентифициране на диагностичен материал киселина бацили събира трябва да централно доставени в лабораторията. Обикновено такава доставка се прави веднъж или два пъти седмично. Следователно продуктът трябва да бъде натрупан в продължение на няколко дни. За тази цел на използване НИРС или специални транспортни кутии за до 10 - 20 контейнери, които се съхраняват в хладилника.
По време на транспортирането на материала трябва да бъдат защитени от пряка слънчева светлина и топлина. Ако транспортиране и съхранение да отнеме не повече от 48 часа, материалът може да бъде изпратен без консервант. През лятото, и в райони с топъл климат съхранение се изисква, ако транспортирането отнема повече от 24 часа за тези цели могат да се използват 2 до 3% разтвор на борна киселина в съотношение 1: 1, или глицерол. Като консервант също така е възможно да се използва 10% разтвор на тринатриев фосфат и 0.1 0.05% разтвор на хлорхексидин bigluconate в съотношение 1: 1 в тези случаи материал култури, произведени без допълнителна обработка. Растеж на микобактерии може да се получи дори след съхранение храчка с консервант при температура 30 "С в продължение на 10-12 дни.
В условията на Далечния Север диагностичен материал по време на непрекъсната транспортна бъдат изложени на значителни температурни колебания. Следва да се има предвид, че прехвърлянето на материала е разрешен в замразено състояние, без консерванти. Тя поддържа жизнеспособността на микобактерии в 8-15 дни, но в никакъв случай не трябва да се допуска повтаря размразяване и замразяване на материала, което да помогне за намаляване на жизнеспособността на микобактерии.
Микроскопско изследване. Той е един от най-големите и най-често срещаните методи. Предимства лежат в своята простота, ниска цена и скорост на получаване на резултати. Въпреки това, методът е ограничен. Препаратът може да открие индивид микобактерии в 1 мл ако материалът съдържа не по-малко от 10 000-100 000 бактериални клетки (Границата на метода).
Най-често срещаният метод на оцветяване за откриване киселина бацили е метод Ziehl - Nielsen. Слюнка на слайдовете се оцветяват с карболфуксин фуксин, с едновременно излагане на топлина намазка обезцветява в 3% разтвор на солна киселина алкохол (в резултат на промяна на цвета на киселина-бързо структури) и dokrashivayut метиленово синьо. Само микобактерии, които са изразили киселина и алкохол, здраво държи боята и са оцветени в червено. Mycobacteria се намират в продукта под формата на тънки, прави или леко извити ярко червени пръчки.
Микроскопия на оцветени препарати произвежда светлинен микроскоп с обектив масло потапяне X90 X10 и окуляр (увеличение X900).
В момента се използва метода на цвят флуоресцентни багрила. Сравнителни изследвания са показали значително по-високо съдържание метод информация луминесценция, която, според различни автори, варира 9-19%.
В случаите, когато на патологичен материал не могат да открият микобактерии от микроскопия произвеждат бактериологично изследване. Методът за култура - посадъчен материал за хранителни среди. Предимството на висока чувствителност. Достатъчно 20-100 микобактерии в 1 мл материал. Недостатъкът е в дългосрочния растеж на колониите: 1 - 3 месеца.
Използването на два метода в комбинация може по-точно да се определи количествено степента на бактериална изолация.
Материал посяват върху хранителна среда и изолиране микобактерии култура в чиста форма, за да го разграничи от киселинно-сапрофитите. бактериологичен метод предимство пред bacterioscopic се крие във факта, че наличието на патологичен материал в жизнеспособни микобактерии може да се диагностицира бацили. Недостатък на този метод е най-бавен растеж на микобактерии.
Пробният материал се поставят върху специална среда след предварителната обработка. Най-често се използва среда яйцето (Petranyani, Lowenstein, Gehlberg), които съдържат бои, инхибиране на растежа на други бактерии. В някои случаи, култури, използвани за течни среди култура, и е също произведени върху стъкло Microculture на.
Предварителна обработка на патологичен материал се редуцира до унищожаване на съпътстващи флора. Засяване промивна вода на стомаха, бронхите, и е направен от утайката на урината или центрофугирането. В същото време урината, ако тя не е мръсна, не може да се справи. Промивките са необходими за неутрализиране на стомашните 10-15% разтвор на натриев хидрогенкарбонат, тъй като под въздействието на стомашния сок след 6 часа намалена способност да живеят микобактерии. Също така не се изисква специална обработка.
Съществуват няколко метода за предварителна обработка на плеврален ексудат и слюнка. Например, ние описваме методи за Mazur и Петров. В стерилна епруветка изсипва 3 - 4 мл 2% разтвор на сярна киселина, се поставя част от патологичното материал. Тръбата се завихря в продължение на 3 минути, след което стерилен платина линия инокулират върху яйце среда (метод Mazur).
метод Петров се състои в това, че материалът е изпълнен с 4% разтвор на натриев хидроксид и се поставят в термостат за 1 час, след това получената хомогенна смес се неутрализира с 4% разтвор на солна киселина. Околна среда тест контрол лакмус. Утайката беше неутрален течност инокулира в среда епруветка за яйце.
Яйце среда се поставя в термостат при 37 ° С Първите колонии на микобактерии се появяват при 18 -30 дни, а понякога и след 3 месеца.
Бактериологични и микроскопско изследване трябва да се извърши в комбинация. Ако микобактерии на намазка са открити и когато засети наблюдава растежа им, това означава, че пациентът отделя малко количество Mycobacterium туберкулоза. В случаите, когато микобактериите се откриват с микроскопия и култура резултати са отрицателни, а след това е индикация, че пациентът идентифицира AFB намалява жизнеспособността или умъртвени Mycobacterium туберкулоза.
Биологичният метод на заразяване на животните сега се използва само в научно-изследователски институти.
Инокулиране на патологичното животински материал, произведен в ингвиналната област в доза от 2 - 3 мл.
Понастоящем започна да използва молекулно-биологични метод на ДНК хибридизация, или по друг начин, полимеразна верижна реакция (PCR). Първо, ДНК се освобождава микобактерии, след това се идентифицира и клонира. Методът е много чувствителна (МВТ достатъчно 1), но се използва без едновременно оценяване на клинично заболяване
тя трябва да бъде внимателно. Той не прави разлика между мъртъв БЦЖ МОТ щам и може да идентифицира случайни капан микроби. Това е - един обещаващ метод, но ролята му все още не е напълно дефиниран.

Определяне на лекарствена резистентност в Mycobacterium.

В момента разработи и внедри в практиката клиники методи за определяне на чувствителността спрямо лекарства (устойчивост) на микобактерии туберколостатичния лекарства. Разграничаване основната лекарствена резистентност при пациенти, които не са лекувани с анти-туберкулоза лекарства и вторична, razvivayuschuyasya време на лечението. първична честота стабилност от 20 -80%.
Най-често срещаният метод на серийни разреждания на абсолютните концентрации туберколостатичния лекарства върху хранителна среда.
Лекарствена резистентност на Mycobacterium туберкулоза се определя директни и индиректни методи.
Директният метод се състои в засаждане на третирания материал (слюнка, бронхиална промивна вода, гной), съдържащ Mycobacterium туберкулоза, върху твърда Lowenstein-Jensen среда или Gehlberg съдържащи лекарства. Този метод може да се прилага, когато материал микобактерии са открити в значително количество (1 - 5 от микробни клетки в областта на оглед).
Индиректен метод се свежда до факта, че, от една страна, културата в чиста форма, и след това да се определи лекарствена резистентност семена. Следователно, резултатите от научните изследвания в прекия метод, използван за получаване - след 15 - 20 дни в непряка - 3 - 4 седмици. или 2 - 3 месеца.
Хранителни среди за определяне Loewenstein -Iensena лекарствена резистентност се приготвят с добавяне на туберколостатичния лекарства с различни концентрации, т.е. Методът на серийно разреждане. Също така, за да се избегнат странични покълване флора, пеницилин 10ED прибавя към 1 мл среда.
По този начин концентрацията на лекарството туберкулостатична при която се наблюдава дори растеж на Mycobacterium туберкулоза и концентрацията, при която не настъпва растеж микобактерии.
Лекарствена резистентност микобактерии могат да бъдат моно - на едно лекарство, множествена - смес от изониазид и рифампицин polyresistant - две или повече лекарства, различни от изониазид и рифампицин, напречно - към лекарства с подобна химична структура.
Понастоящем въведена генетични методи за определяне на лекарствена резистентност чрез метода PCR.

Видео: Оценка на риска от предаване на туберкулоза и план за развитие за контрол на инфекциите

В практиката на диагностични и лечебни съоръжения също са въведени, за да се определи степента на инактивиране на изониазид. Степента на инактивиране на изониазид се определя чрез изследване на урината. 3 дни преди изследването, пациентите да отмени назначението на всички лекарства, различни от изониазид, той продължава да се прилага в обичайната доза. Тогава на сутринта той е даден тест доза (0.6 г), INH.
В силни инактивато с урината се разпределя 10% от средното - 14, и слаба 40% от изониазид.

Видео: Химиотерапия TB: постижения, проблеми и перспективи