Идентификация на туморните маркери в кръвта и други биологични течности - Обща онкология

С много малко изключения, пациентите, имунната система е толерантен към тези съединения, които са обсъдени по-долу. Следователно, те действат като антигени само когато се прилага при експериментални животни за получаване на антитела за диагностични и имунологични реакции. Ясно е, че всеки антигенно активно вещество в организма изпълнява определени функции (хормонално, ензимно, транспорт и т.н., в някои случаи неизвестни), но тяхното разглеждане е извън обхвата на тази секция.
В началото на клиничните имунодиагностика в онкологията трябва да обмисли възможността за започване GI Abelian и колеги. (1963) в серума на мишки с трансплантирани хепатом протеин, синтезиран в големи количества по време на ембриогенезата и при възрастни открива само в следови количества. Една година по-късно, Yu S. Tatarinov установено наличието на същия протеин в кръвта на пациенти с първичен рак на черния дроб, първо да покаже клиничната значимост на изпитването. През 1965 г., стр злато и S. Feedman установено, че в туморната тъкан от пациенти с рак на дебелото черво, е гликопротеин, които те наричат ​​карциноембрионен характеристика на ембрионалното черва и синтезирано в минута епителни възрастни количества червата. Подобен антиген присъства в екстракти от ембрионален черва и тумори на тази локализация при хора, е разкрито като VY Rogalski (1964). Тези открития, предвидени в основата на нова посока в онкологията, такива вещества се наричат ​​онкофетален антигени. Към днешна дата, тази серия от съединения, открити в туморите дори най-малко 10 embriospetsificheskih антигени [ембрионални антигени в рак, 1980]. В основата на тяхното приложение за имунодиагностика на тумори се намира в присъствието на злокачествени клетки, кръв, асцит, урина, повишени концентрации характерни за определен етап на ембрионалното развитие.
Сред други съединения, циркулиращи в кръвообръщението на пациенти с ракови заболявания, и използвани за имунодиагностика, хормони могат да бъдат споменати: хипофизата, човешки хорион гонадотропин, плацентен лактоген, пролактин, инсулин, паратироиден хормон и калцитонин. В този случай ние не говорим за туморите на ендокринните органи, диагностика се основава на факта, че туморите често са присъщи на така наречената извънматочна синтеза на хормони, които се намират в същото време в кръвта или урината на пациенти в много по-големи концентрации, отколкото при здравите индивиди. В серума на пациенти също може да присъства в повишени концентрации на протеини като феритин, казеин, и т.н., и се синтезира от нормалните клетки. От тези съединения имат най-голяма практическа стойност а-фетопротеин (AFP), рак на ембрионен антиген (СЕА), и човешки хорионгонадотропин (ЧХГ) в трофобластна глобулин.
а-фетопротеин - а-глобулин с относителна молекулна маса от около 70 000 - се синтезира в епитела на жълтъчната торбичка и фетални хепатоцити. концентрацията му в ембрионален серум и околоплодна течност достига 3 гр / л до 12-14 седмици. феталното развитие, намаляване на времето на раждане до 50 мг / л от серум. При здрави индивиди, с изключение на бременни жени, неговото съдържание не надвишава 5-25 г / л на серум. Леко повишение на това ниво при възрастни показва, обикновено на регенераторните процеси в черния дроб, или вирусен хепатит, придружаваща tsirroz- обикновено се появява в 10-20% от пациентите. При деца 1 година от живота в почти всяка болест има увеличение в кръвта АФП. Сред други не-туморни заболявания характер придружено от повишаване на кръвното АФП, трябва да се нарича вроден ataksiyuteleangiektaziyu и тирозинемия.
Изразена и трайно повишаване на концентрацията на АФП в кръвта на възрастни е най-често при хепатоцелуларен карцином и ембрионален тестисите и яйчниците тератокарцином, много по-малко - с метастатични лезии на черния дроб. нивата на АФП в пациенти с фон хепатоцелуларен карцином може да надвишава няколко стотици и дори хиляди пъти, обикновено варира между 40 г / л до 3 мг / л. В зависимост от чувствителността на метода за определяне на размера на AFP-положителни ракови заболявания на черния дроб при възрастни е 45-80%, а сред деца - 60-95%. Почти 100% от АФП присъства в концентрация над 1 мг / л при деца с хепатобластом зародишна линия.
Налице е генетично предразположение към експресията на AFP синтез. По този начин, жителите на тези райони на Африка и Азия, където основна скорост рак на черния дроб-висока от тази в Европа, 90% от случаите са AFP-положителен. Често се увеличава концентрацията на АФП определя в серум на здрави лица "ендемични" на диапазоните на болестни [Purves L. и сътр., 1973].
Обикновено ясна връзка между концентрацията на АФП в кръвта на пациенти с хепатоцелуларен карцином, размера на тумора, хистология и етап на заболяването там. Малко по-често маркер се синтезира във високи концентрации умерено диференциран хепатомни клетки.
Повишена концентрация на АФП в кръвта може да е 2-10 месеца. предхожда клиничните симптоми на рак на черния дроб L. Leblane и сътр. (1973) се наблюдава повишение в 6 от AFP 9864 сенегалска без обърната оплаквания. Впоследствие, пълно клинично изследване те е бил диагностициран хепатоцелуларен карцином. Въпреки това, в 3 случая, задайте същата диагноза, въпреки че нивото АФП в кръвта е нормално. В проучване на 343,999 китайски [Координиращата ..., 1974] диагностика на първичен рак на черния дроб е направена на базата на повишени концентрации в кръвта на АФП 147 лица, без каквито и да било други признаци на тумор protsessa- по-късно, само на 18 от случаите са били неверни положителни. Съобщените "предклинични" имунодиагностика хепатоцелуларен карцином в 5 от 200 пациенти се наблюдава цироза [Lehmann F., 1975]. По този начин, AFP подходящ за ранно откриване на първичен рак на черния дроб.
Тератокарцином тестиси и яйчници се характеризира с високо съдържание на АФП в кръвта на повече от 90% от случаите. В тези случаи концентрацията на АФП е почти винаги по-голямо от 1 мг / л серум, и при възрастни с количество открива в не повече от 40% от случаите, в други по-долу. Тумори на половите жлези, произход не от елементи на жълтъчната торбичка, въпреки че зародишна линия (семином дисгерминоми, хориокарцином, зрял тератома), никога не са придружени от продуктите AFP [Abelian GI, Ансел Elgort DA 1978], което е в на базата на диференциалната диагноза на тези тумори тератокарцином. Въпреки това, в случаите AFP-позитивни трябва да се има предвид възможността за смесена структура на тумора, като присъствието на семином клетки на жълтъчната торбичка.
Когато тумори на други места увеличаване на АФП в кръвта е изключително рядко и по този начин неговата концентрация, като правило, не надвишава 25-500 мг / л в серума. Същият брой присъства обикновено в серума на пациенти с чернодробни метастази на тумори и други обекти предимно - стомашно-чревния тракт. Следователно, устойчиви ниво AFP-висока от 1 мг / л на кръвен серум обикновено показва или НСС или на тератокарцином половите жлези.
След радикал хирургия или химиотерапевтично лечение успешно AFP-произвеждащи тумори концентрация на маркер в кръвта в продължение на няколко дни се редуцира до нормални стойности. (Времето на полуживот на 5 дни AFP). Последващото увеличение на AFP показва рецидив или метастази на тумор. Често се случва преди началото на клиничните симптоми и може да служи като основа за повторно оперативно или друга обработка. По този начин, АФП може да бъде прогностичен туморен маркер. Все пак трябва да се има предвид, че в някои случаи изчезването на АФП от кръвта на пациентите, лекувани с хепатоцелуларен карцином не е доказателство за ефикасността на лечението. Това се обяснява с факта, че AFP се синтезира от хепатоцити не произтича и извършено в една от областите на диференциация. Ако цитостатично лечение ще бъде чувствителен само към този клонинг, това ще доведе до фалшиво-отрицателни диагноза.
Тъй като концентрацията на АФП в пациенти с хепатоцелуларен рак и тератокарцином половите жлези в повечето случаи е достатъчно високо, всички от широко достъпни методи имуно подходящи за имунодиагностични цели. Освен това, диагностичната специфичност, използвайки методи, с лоша чувствителност (1 - 3 мг / л) е значително по-висока, отколкото при използване, например, силно чувствителен радиоимуноанализ, комбиниращите 1000 пъти по-ниски концентрации на антиген в разтвор. Това е разбираемо като се има предвид по-горе данни за незначителни преходно повишаване на нивото му в кръвния серум на различни не-неопластични заболявания.
Карциноембрионен антиген - гликопротеин с относително молекулно тегло приблизително 200 000, синтезирано в множество чревни ентероцити 3 - 6 месеца на плода. Той намери в околоплодната течност, кръв и мекониум. Възрастен съдържание СЕА в серума е много ниска (по-малко от 2,5 - 5, г / л). При хронични пушачи, тези цифри са по-високи.
CEA специфичност за диференциалната диагноза на по-ниска от AFPs. С най-голям редовността (до 90% от случаите), то се увеличава в кръвта на пациенти с рак на дебелото черво (а често и напусна отдел) и панкреаса. Съгласно генерализирана REA данни също се открива в 25 - 40% от пациентите с рак на белия дроб, около 40% от пациентите с саркоми, 15% от пациентите с меланом, 20 - 30% от пациентите с тумори на яйчниците, 30 - 50% от пациентите с медуларен рак на щитовидната жлеза и рак на пикочния мехур, в 20 % от пациентите с рак на шийката на матката и 20% -30 -rakom гърдата, най-малко при пациенти с тумори на други места. Като правило, силно диференцирани рак произвеждат CEA активно. нивата на СЕА също са повишени в серуми от 50 - 70% от пациентите с язвен колит и терминал илеит (болест на Крон), панкреатит, алкохолна цироза, 15% от пациентите с доброкачествени полипи на дебелото черво. За инфекции на пикочния мехур в урината на СЕА се определя от повече от 50% от пациентите.
Има генетично предразположение към интензивен синтез на CEA. Сред членовете на "vysokorakovyh" семейства, особено в близки роднини на пациенти със злокачествени тумори на белия дроб, гърдата, дебелото черво, често има повишена концентрация на CEA [Guirgis Н. и др., 1978]. Интересното е, че CEA също могат да бъдат повишени при пациенти с рак на съпрузите, което показва, че ролята на фактори на околната среда в експресията на синтеза на този маркер. Причините за това се крият неспецифични CEA могат да използват различни изследователски групи от не-стандартни серуми за много подобни, но не идентични епитопи. VY Rogalski (1975) смята, че CEA - нормални продукт slizeprodutsiruyuschih клетки и повишаване на тумори - но резултат от повишена секреция. Възможно е, че електрониката са продукт на размножаващите стволови клетки. Във всеки случай, в експерименти върху животни с посттравматичен интензивно ентероцитна пролиферация се наблюдава същото увеличение в линия, както и в тумори на дебелото черво [К. М. Pozharissky, Okulov VB 1976].
Съдържание на CEA в серума на пациенти с ракови заболявания обикновено не надвишава 40-70 г / л. Метастази и да е причина, произвеждащи тумори също синтезират този гликопротеин. Съотношението на нивата на СЕА в кръвта с етап на процеса и размера на тумора. Ако рак на дебелото черво локализиран в лигавицата, СЕА се увеличава в 20% от пациентите, на тумора по време на покълването в повишена субмукозно слой има 50% от пациентите, и в присъствието на чернодробни метастази - 100% от пациентите. Една подобна връзка е показано при пациенти с рак на гърдата. Това прави малко използване на СЕА за ранно откриване на тумори при масов скрининг на лица с повишен риск. Има, обаче, съобщава, че повишеното ниво на CEA беше единственият знак на червата тумори, 2 - 6 месеца. предходната клиничните прояви на заболяването.
CEA е доказала като надежден маркер за проследяване на ефективността на лечението. Вече няколко дни след пълно отстраняване на тумор антиген на съдържанието на кръвта се нормализират. Подобен резултат се получава чрез успешно химиотерапия или лъчетерапия, в тези случаи, съответствието се наблюдава в 70-90% от случаите. Ако CEA присъства в урината на пациенти с рак на пикочния мехур, бронхиални секрети на пациенти с рак на белия дроб или изпражненията на пациенти с рак на дебелото черво след пълна резекция на тумора CEA в тях не е определена. Палиативно лечение не е придружено от намаляване на концентрацията на СЕА кръв. Освен това, ако след операция се намали това се случи, той се счита за лош прогностичен белег.
Нов подем на съдържанието на СЕА показва туморен рецидив или развитие на метастази, и 60 - 70% от случаите в рамките на 5 - 12 месеца. преди появата на клиничните симптоми. Външен лекар, вземайки предвид такова покачване като абсолютна индикация за повторно диагностика на работа (втора операция поглед). За да навременно диагностициране на развитието на този процес, определяне на CEA произвеждат най-малко 1 път в 2 месеца., А след това, в повечето случаи на рецидив на тумора ще бъде използваема.
Определени може да има прогностична стойност на ниво CEA преди лечението, тъй като туморите на пациенти хистогенеза продължителност на живота след диагноза в случаите, обикновено по-кратък с по-висока концентрация на CEA в кръвта. Същата зависимост е характеристика на пациенти с разпространени форми на рак. Трябва да се отбележи, че е информационен стойност на резултатите се увеличава значително в динамичния наблюдение на нивата на CEA.
Опитите да се използват антитела срещу СЕА като носител на радионуклиди тумори сканиране на дебелото черво и техните метастази. При определени условия, да изключи неспецифично разпределение и фиксиране на белязани антитела, резултатите са много задоволителни.
Хорион гонадотропин, известен от 1927 г., благодарение на работа Aschheim и Tsondeka, започва да се използва като туморен маркер след отваряне антигенни свойства и развитие на високо чувствителни методи за определяне [Vaitukaitis J. и сътр., 1972] .HG е гликопротеин с относителна молекулна маса около 60 000 и се състои от алфа- и (3-tsepi- през последните локализирано специфичен имунохимикали детерминанта. при здрави жени, чХГ се синтезира като се започне от 6-ия ден от бременността, и неговата концентрация в урината достига максимум на 60-ти dnyu- след 18 седмици. количество Xr се намалява.
Основната онкологичното заболяване, в които има високо ниво на ЧХГ в кръвта, е метастатичен horionepitelioma на която се определя в 100% от случаите, докато, както и в случай на бременност, съществува корелация между съдържанието на HCG в урината и кръвта на пациенти. Ако дневната екскреция на ЧХГ в урината надвишава 100 000 ME *, прогнозата е често неблагоприятно. Наблюдава се ясно негативна корелация между количество екскретира ЧХГ и оцеляването на пациенти, които могат да бъдат отражение на пряка корелация между теглото на тумора (включително метастази) и концентрацията на ЧХГ в кръвта.

* В зависимост от степента на пречистване ME 1 съответства на 50-200 нг.

Ефективното лечение е придружено от изчезването на ЧХГ и урината от кръвта след 6-12 седмици. Ако през следващите 3 - 4 седмици. ново увеличение не се случи, това може да се разглежда като показател за стабилна ремисия, както и липсата на възстановяване в рамките на 3 месеца. 95% от гаранциите пълно излекуване.
Други патология се характеризира с наличието на ЧХГ в урината и кръвта на пациенти са неоплазми на тестисите. В зависимост от хистологично структурата на чХГ на тумори открива чрез радиоимуноанализ в 15-55% от пациентите, най-често в ембрионален карцином. Като правило, колкото по-голям тумор, толкова по-голямо ниво на ЧХГ в кръвта. Изчезването на HCG след третиране показва последния радикал, и повторно растежа - рецидив на заболяването. В други тумори хистогенеза ЧХГ определя в 5 - 30% от пациентите [Braunstein G., 1979], и съдържанието в кръвния серум на по-малко от 10 г / л. Въпреки това, промените в концентрацията на този маркер в процеса на лечение и проследяване на пациенти с netrofoblasticheskimi тумори може да бъде много полезно.
В заключение на анализа на практическата стойност на имунологични туморни маркери, трябва да се подчертае, че само динамика или поне повтори, за да се определи нивото им на пациенти клиницист осигурява значителни допълнителни възможности в диагностиката се увеличава с едновременно определяне на две или повече маркери.
Материалът показва, че този подход към имунодиагностика тумори подробно разработена и вече прилагат на практика основните рак институции в нашата страна и в чужбина. Резултатите, получени от различните институции доста сходни, което им позволява да се правят обобщения и правят заключения. Това значително ще улесни въвеждането на лабораторна практика моноклонални антитела търговски, тъй като те са, като продукт на потомци на мобилен производител, абсолютно "моноспецифичен".
Що се отнася до другите два подхода,
което ще бъде обсъдено по-долу, е да се направи сериозно обобщение е преждевременно, като получените в различни лаборатории резултатите, се различават значително един от друг, и често противоречиви. Така че те са представени в общ план. *

* За повече подробности вж. Имунодиагностика на рак, 1979- имунодиагностика и имунотерапия на злокачествени тумори, 1979, както и под "Лабораторни диагностични методи" и "Влияние на вътрешната среда на появата и развитието на тумори."

Откриване на имунния отговор на тумор-асоциирани антигени.
Той вече е бил посочи, че все още не са получили ясни доказателства за съществуването на специфични туморни антигени. Въпреки това, проучването на имунната система при пациенти може да се открие в него някои преструктуриране, който може да бъде показателно за антигенни разлики между нормални клетки от злокачествен. Тъй като имунологичен отговор се развива в много малък брой антигени, може да се очаква, че това се случва в ранните етапи на растежа на тумора. От друга страна, трябва да се има предвид, че антитуморна реакция на организма не може да бъде показана на фона на намаляване на имунореактивност от пациентите, което е особено често се наблюдава в напреднал стадий на неопластично заболяване.
Откриване на противотуморен имунитет за диагностични цели, основани на проучването на реакциите на клетъчен и хуморален имунитет. Сред първите са най-чести: до интрадермални тест-сол екстракти от тумори, специфични цитотоксични лимфоцити към туморните клетки, инхибиране на миграцията на левкоцитите от туморни антигени, лимфоцитна пролиферация чрез действието на туморни антигени, в електрофоретичната мобилност на макрофаги, инхибиране на левкоцитната адхезия. хуморален антитуморен имунитет се изучава използване на реакции, които позволяват да се определи антителата срещу туморни клетки и така наречените блокиращи антитела, имунни комплекси и нива на различни класове имуноглобулини.
Интрадермални тестове за туморни антигени са най-лесно да се изпълни. Те са положителни при пациенти с колоректален рак, рак на гърдата, меланом, остра левкемия. По-специално в последния патологията са били в състояние да се проследи зависимостта на интензивността на имунитет от стадия на заболяването. Смята се, че пробата може да се използва за предвиждане на: тежка кожна реакция на тумор-асоцииран антиген, толкова по-трудно на имунната система, по-добре прогнозата. Възможна имунен отговор към туморните антигени на "предклинични" етап включва практическата стойност на интрадермални тестове за скрининг на хора с повишен риск. Въпреки това, въвеждането на още по-туморни клетъчни без екстракти за здрави хора не може да се счита за абсолютно безопасна манипулация, така че пробата не е широко разпространен. За да направите това, можете да използвате екстракти от ембрионални тъкани, както и такива изследвания вече е в ход.
пациенти Проучване лимфоцитни цитотоксични свойства към туморни клетки се основава на произведения I. Hellstrom et AL. (1971), първи демонстрира това явление. Най-специфичен тест за оценка на противотуморен имунитет, но поради значителната сложност на голямо практическо значение не присъства и по-често се използва във фундаменталните научни изследвания.
Увеличаването на употреба има подтискане реакция миграция на левкоцити в присъствието на туморен антиген, който не е информационен само автоложни, но също така и в хомоложна система, т.е.. E. се наблюдава в присъствието на тумор хистогенеза екстракти, получени от различни пациенти. В някои случаи е възможно да се докаже, общият характер на антигени в тумори от различни хистогенеза. Реакция успешно се използва при пациенти с рак на гърдата, стомаха и червата, меланом, лимфом и левкемия. Най-близкото корелация се наблюдава между резултатите от реакцията и прогнозата. Специфика и информативна стойност на метода може да се подобри в паралел с определянето на автоложна и донор серуми.
Трябва да споменем левкоцитна адхезия тест на базата на различните възможности на интактни и чувствителни лимфоцити прикрепят към вътрешната повърхност на специфичните лабораторни пластини или тръби в присъствието на автоложна или алогенна (стандартни) туморни екстракти. Има съобщения, че този метод е доста информативен, при спазване на редица методологически подходи. По-специално, пациенти с предоперативна реактивност корелира с продължителността на живота.
В наскоро привлече вниманието метод за определяне на електрофоретичната подвижност в присъствието на макрофаги туморни екстракти [Pritchard J. и сътр., 1973]. Методът има висока специфичност, и води до 60 - 80% корелира с туморна етап. Въпреки това, редица недостатъци не позволява да се приложи метода в общата практика.
Има отделни наблюдения на корелации титър хуморални анти-туморни антитела и блокиращи антитела с клиничното състояние на пациента. По-голяма практическа важност е определянето на хуморални антитела с антигена, свързан с Епщайн - Бар вирус при пациенти с лимфом на Бъркит и назофарингеален карцином. Тигърът на такива антитела, почти 100% от пациентите, които се използват за диференциална диагноза, а в някои случаи да се контролира клиничното състояние на пациента.
Стойност имунодиагностични реакции антитуморен имунитет се ограничава с това, че реакцията на организма към туморни антигени е различна и зависи от много фактори. Една обща въртящ момент възпрепятства широкото приемане на този подход на практика е липсата на високо пречистени туморни антигени, така че използването на многокомпонентни екстракти въвежда допълнителна сложност при тълкуването на резултатите. Ето защо, само на динамичния контрол на състоянието на противотуморен имунитет в сравними условия, ще помогне на лекарите да се занимават с медицински проблеми.
Терминът "неспецифични" имунитет индекси за диагностика на тумори. Теорията на имунния надзор Burnett предполага, че тумори възникват на фона на намалена реактивност на имунната система. Въпреки факта, че тази теория е до голяма степен ревизиран, тъй като много от неговите разпоредби не се поддържат от експериментални и клинични наблюдения, в много случаи, при пациенти с тумори, които не могат да идентифицират намаление имунокомпетентност.

Един от най-разпространените методи е да интрадермален тест динитрохлорбензол (DNCB). Сенсибилизиращи и разрешаване на инжекции на лекарството се определя от способността на тялото да реагира реакция забавен тип свръхчувствителност към антигена, към които организмът не е изпълнено преди. Отговорът на този тимус-зависими и характеризира състоянието на клетъчния имунитет. Пробата е прост процес и в началото на 70-те години стана често използван. Установено е, да се намали пациенти реактивност DNBH с тумори на почти всички места. При пациенти с неоперабилен рак на белия дроб и рак на маточната шийка проби показва влошаване на резултатите, в зависимост от тежестта на прогнозата. Има доказателства за промяна на чувствителност към DNCB и постоперативна туморен рецидив на тези места, както и съответствието с етап на процеса. Въпреки това, широк вариабилност на резултатите намалява диагностичната стойност на пробата. Освен това последващо приложение на лекарството се извършва вече чувствителни тяло, което не позволява прилагането на пробата в хода на заболяването.
Способността на имунни лимфоцити да отговори на митогени ефект от растителен произход (например, фитохемаглутинин) в бластна форми реакционни трансформация е показателно за тяхната функционална жизнеспособност. При пациенти с тумори на реакцията се намалява, обаче, обобщени данни, надеждно определени само в напреднал стадий на заболяването. Значима корелация между степента на инхибиране на реакцията на бластна трансформация на лимфоцити и прогнозата не е намерен.
Относително надежден показател за имунния статус е броят на циркулиращите Т- и В-лимфоцити. Тяхното определяне на онкологично практика т.н.