Стафилококите - микробиология с техниката на микробиологични изследвания

Частна лекарска микробиология
Патогенните коки
От патогенни коки, причинявайки различни в тяхната клинична проява на заболяване при хора, включват: 1), Staphylococcus, 2) стрептококи, 3) пневмококи, 4) менингококи и 5) гонококи.
Багрилни въз основа на (оцветяване) може да бъде разделена на две подгрупи: Грам-положителни коки (стафилококи, стрептококи и пневмококи), грам-отрицателни коковидна (менингококи и гонококи).
Характерна черта на всички патогенни коки е способността да предизвика гнойни възпалителни процеси, защо те също така се наричат ​​гноен (гноен) коки.
Най-драстично и трайно гнойни свойства се изразяват в стафилококи.
стафилокок
Морфология и багрилни свойства. Stafilokokki- Staphylococcus (първи изолиран през 1880 от Pasteur YG) имат формата на редовни топки със среден диаметър от 0.8-0.9 микрона. В намазка от чиста култура на Staphylococcus са разположени под формата на купчини и клъстери, наподобяващ грозд (фиг. 60). В гнойта и други патологични материал често можете да намерите единствен коки, двойки и дори къси вериги. Те са добре боядисани основни анилинови бои, грам-положителни, спори, капсули не формират, все още.
Културни и биохимични свойства. Стафилококите се развива добре на общи хранителни среди в присъствието и в отсъствието на свободен кислород. температура оптимума на 37 ° на.

Фиг. 60. стафилококус ауреус (а) и Streptococcus (б) в чиста култура.

Фиг. 61. колонии на стафилококи върху обикновена агар. SW. 20.

Фиг. 62. Засяването убождане в желатин.

Отделните колонии върху повърхността на агара са заоблени среден размер колела, изпъкнали, влажни, непрозрачни, хомогенни и фина зърнеста структура (вж. Фиг. 01). Цветът на колонии зависи от пигмент, който генерира стафилококи и може да бъде злато (Staphylococcus Aureus), лимон-жълт (Staphylococcus citreus) и бели (Staphylococcus Албус). Когато се поставя върху впоследствие полегатия агар, образувани в изобилие растеж на Staphylococcus, пигментирана.
Пигменти ауреус са lipochromes, неразтворими във вода и се оцветява само с културата, но културалната среда. образуване пигмент е интензивен когато микроорганизмите се отглеждат в присъствието на кислород при стайна температура в светлината.
Когато засети в желатинова пробождане на 2-3 дни растеж на повърхността на средата е забележим площ изтъняване. Както втечняване култура пада на дъното като памук пелети (фиг. 62).
Бульон стафилококи произвежда изобилен растеж. След 24 часа престой в инкубатора бульон става мътен и се образува утайка на дъното на тръбата.
Staphylococci бързо подквасено мляко, което му киселинна реакция.
Ферментирало (без газ), лактоза, глюкоза, малтоза, манитол. Способността да се разцепи манитол обикновено характеризира патогенни щамове Staphylococcus.
Патогенните стафилококи върху плочи с кръвен агар за да образуват колонии, заобиколени от зона на хемолиза и коагулиран плазма цитратна кръв.
Resistance. Стафилококус ауреус е един от много резистентни бактерии. Температура 80 ° го убива в мокро състояние в продължение на 10 минути. Температурата е 70 ° стафилококи сведени до 1 час. Карболово киселина (35% разтвор) ги убие в рамките на 15 до 30 минути. Стафилокок на гной продължава дълго време.
Токсини, ензими стафилококи им патогенност за животни. Патогенните стафилококи произвежда редица токсини и ензими. Стафилококов gemolihin разтваря еритроцити. Това термолабилен токсин (свива при 55 °), и се отнася до екзотоксини чрез имунизиране на животни, те могат да получат антитоксин. Филтратът култури Staphylococcus също некротизиращи и летален ефект. Сега това се докаже, че nekrotoksin хемолизинова и смъртоносен токсин са неразделна част от стафилококов екзотоксин. Тези токсини са неделими една от друга, и откриване на един от тях доказва избрания ауреус патогенност. Някои от хемолитични щамове Staphylococcus ауреус произведе ентеротоксин, което причинява феномена на остър гастроентерит. Културата филтрати от Staphylococcus е често срещан Leukocidin - отрова, която разрушава белите кръвни клетки. Тъй ензими патогенни стафилококи изолира: 1) plazmokoagul и Z Y - съсирване плазма, 2) fibrinolysin - разтваряне на фибринови съсиреци, 3) хиалуронидаза - разтваряне на хиалуронова киселина, вещество залепване заедно елементите от съединителна тъкан, 4) антипеницилиназни - инактивиране пеницилин и 5) lecithinase - форми мътност зона около колонии върху агар вителиновата физиологичен разтвор (Chistovich среда).
От най-податливи на Staphylococcus зайци и по-малка степен морски свинчета и мишки лабораторни животни. При зайци, когато се прилага интрадермално култура изглежда изразени некроза, подкожно - разработване абсцеси и инфекция на високо вирулентните щамове стафилокок води до сепсис и смърт на животните. За стафилококова ентеротоксинното най-чувствителният сукалчета котенца и млади мишки.
Класификация на стафилококи. Старият класирането на стафилококови емисии на пигмент (злато, бяло и лимонено жълто) не позволява на правото да се определи тяхната патогенност. Ето защо, в момента се счита за най правилното класиране на стафилококова предложен от Грос. Според тази класификация, всички стафилококи са разделени в три групи: инфлуенца, ниско патогенен и непатогенен.
Първа група - патогенни стафилококи:
а) върху плаки с 5% плочи с кръвен агар за образуване на чист зона gemoliza-
б) в заек интардермалния предизвика явления изразени некроза, понякога със смъртен изход zhivotnogo-
в) plazmokoagulazu произвежда ензима, което води плазмената коагулация за 2 Часове
ж) разпределени главно от пациенти със сепсис или остър гноен инфекция.
Втората група - ниско патогенни стафилококи:
а) на агарови плаки кръвни образуват зона на лека непълна gemoliza-
б) в интрадермална заек да предизвика зачервяване на мястото на инжектиране, понякога проникне, често без признаци nekroza-
в) когато посев в цитратна плазма причина съсирване в продължение на 6 часа и pozzhe-
с) разпределени по повърхността на кожата, когато фоликула с мукозна катар на горните дихателни пътища, повърхностни рани, но не и тяхната дълбочина.
Третата група - непатогенен стафилококи:
а) на агарови плаки кръвни хемолиза не obnaruzhivaetsya-
б) в интрадермална заек феномена на некроза и инфилтрация на не са маркирани, а в някои случаи, има зачервяване кожните
с) взаимодействие плазмен коагулационен otritsatelnaya-
д) непрекъснато се намери на здрава кожа, лигавицата на гърлото, носа, и във въздуха.
Патогенезата и заболяване при хората. Стафилококите са много чести микроби. Те се намират във въздуха, водата и почвата, мъж - почти постоянно върху кожата и лигавиците. Това обяснява факта, че стафилококус ауреус е най-честата причина за всякакви гнойни. Увреждане на кожата и лигавиците или намаляване устойчивостта им отваря "порта" на инфекция стафилокок.
Най-често се отразява на кожата. Стафилококите са агенти, причиняващи свежда - гнойни възпаления на космените фоликули. Ако тя се свежда придобие множествена характер, болест, наречена фурункулоза. Когато няколко циреи се сливат, за да образуват широка гноен инфилтрация, има бактеремия.
Staphylococci намерени в абсцеси (абсцес) в гнойни рани, лигавицата катар, септицемия и septicopyemia (сепсис с образуване на гной огнища във вътрешните органи). Enterotoxic щамове на стафилококус ауреус могат да причинят хранително отравяне. Последно в резултат на консумация на замърсени с стафилококи мляко и други млечни продукти, сладкиши с крем и така нататък. Д., тъй като тези продукти ауреус е оптимални условия за тяхното размножаване. Най-патогенни стафилококи мляко може да получи или от крави с мастит, или от ръцете на milkers страдащи от пиодермия.
Имунитет. Вродения имунитет на стафилококи при хора не съществува. Въпреки това, човек има значителна устойчивост на този микроорганизъм, което се обяснява с защитната роля на кожата и наличието на антитела в кръвта.
Изглежда, че тук може да бъде придобит имунитет, както е видно от покачването на титър на антителата при пациенти и такива, които оздравяват. Въпреки това, този имунитет е нестабилна. Освен това, следва да се отбележи, че много хора, които са страдали ожулвания, има повишена чувствителност към Staphylococcus.
Устойчивост на Staphylococcus може да бъде отслабен поради различни причини, - диабет, травма, инвалидизиращи заболявания и др ...
Микробиологична диагноза. Едно проучване на гной. Най-често материал за микробиологично изследване гной. За тази цел, в отворените лезии след предварително пречистване на раната стерилна памучен тампон вземат изпълнението на по-дълбоките части на раната. При затворени проучвания (цирей, абсцес) с една и съща цел, след дезинфекция на кожата пункция прави огнище гноясване стерилна спринцовка. От получената гнойта направи петна, оцветени в синьо и грам и mikroskopiruyut.
От позицията коки и багрилни свойства са трудни за диференциране стафилококи и стрептококи, следователно продължават към бактериологично изследване, т. Е. за посев гной върху плаки с прост кръвен агар плака, на агара вителиновата-сол (cm ". Санитарен микробиология" точка стр. 454) и за обогатяване на околната среда (захар бульон). Инокулираните плочи, обръщат с главата надолу, и бульон се поставя в термостат при 37 ° в продължение на 1-2 дни.
На плочи с кръвен агар за да образуват колонии хемолиза зона, чийто диаметър е често няколко пъти диаметъра на колонията. Тези прозрачни безцветни хемолиза зони се образуват поради разтварянето на еритроцити индуцирани hemotoxin ауреус. Вителиновата на агар-агар физиологичен разтвор инфлуенца стафилококус ауреус растат до образуване на пигмент и мътност зона - под формата на дъга хало около колонията. С една от колониите се получава формулировка Грам оцветени и mikroskopiruyut. Откриване на грам-положителни коки в подготовката подредени в грозд, дава правото да издава предварителен положителен. След това остатъкът се субкултивират колония върху агарови наклонени за чиста култура. Необходимо е да се диференцират инфлуенца от непатогенен Staphylococcus Aureus, т. Е. За изследване на растежа на кръвен агар, вителиновата сол агар, сеят в плазмата нитрат и определяне генотоксичност животно.
Тест за плазмен коагулация. GV Константин Vygodchikov препоръчва следния метод за реакция плазмен коагулация. В заек взета 10 мл кръв от сърцето се поставя в епруветка с 1 мл 5% разтвор на натриев цитрат. Кръвта се центрофугира и плазмата пълнене. Плазмата получен преди експеримента се разрежда с физиологичен разтвор 1: 4 и се разпределят в стерилни епруветки в 0.5 мл. Staphylococcus колония се инокулира в епруветки с плазма линия нитрат заек, се поставя в термостат при 37 ° С и плазмата коагулация се проверява на всеки 2-3 часа. Патогенните стафилококи коагулира плазма за 2-10 часа, често в рамките на 4 часа.
Тест за генотоксичност. Генотоксичност стафилококови култури изпитват определят на зайци и ентеротоксин - котенца-издънки. От обиколки ауреус наклон получава микробен суспензия във физиологичен разтвор и се регулира чрез оптично изчисление със стандартна 2 милиарда. Микробните органи в 1 мл суспензия. От страна или задната част на заек дреболии коса А и се прилагат на животно, интрадермално 0,2 мл микробна суспензия. При положителна реакция да инфилтрира в мястото на инжектиране се образува, и след това некрозата.
За откриване на летален токсин прилага на заек интравенозно филтрат бульон култура на Staphylococcus изчисли 0,75 мл на 1 кг телесно тегло. животно, смъртта настъпва в рамките на 15 минути.
За да се определи ентеротоксин котенца 1,5-2 месечна възраст (тегло 400 г) сукане заразен източник култура на млечни продукти или Staphylococcus. Симптомите на отравяне (диария, понякога повръщане) се срещат в продължение на 30-60 минути. Наблюдение води 4 до 6 часа, и ако през това време котенца няма да реакция, биологичната проба се счита за отрицателно.
Кръв анализ. Ако подозрение на сепсис в пациент от кубитална вена стерилно при използване на спринцовка 10 мл кръв се вземат и се инокулират в 100-200 мл захар бульон. Сеитба постави за обогатяване за 24-48 часа в инкубатор. В положителен случай средата става мътен и намазки разкрива грам-положителни коки с характерна форма и разположение. Бульон изработка презасяване в агарни плочки кръвта и по-нататъшни изследвания са както е описано по-горе. Хранителната среда се инкубира 10 дни, на всеки 2 дни посяване върху 5% кръвен агар.
Проучване на други материали. В изследването на материали, замърсени с голямо количество чужди микроби (изпражнения, храчки), се препоръчва да се използва агар с 7.5% натриев хлорид, към който се прибавя 10% топло обезмаслено мляко (сряда Петрович). На такъв агар нарастващата външна микрофлора се потиска значително.
Класифициране на фаги. При използване на набор от модел фаг въвеждане стафилококови фаги, състоящи се от 21 фаг, разделени в четири групи. Всяка проба фаги могат да се размножават само в съответния щам на Staphylococcus. Стафилококите фаги е от особено значение в самостоятелно
санитарно-бактериологично изследване на храни за установяване на източника на инфекция и създаването на епидемиологични връзки.
Специфична терапия и химиотерапия. Стафилококов ваксина се използва широко за лечение на повтарящи се и хронични инфекции, като ожулвания. За предотвратяване на тези заболявания прилага токсоид.
При лечение на стафилококови инфекции успешно използвани като химиотерапевтични лекарства сулфа серия (norsulfazol, sulfodimezin и др.), Антибиотици (пеницилин при високи дози, еритромицин, Оксацилин и т.н.), стафилококов бактериофаги (с кожни лезии). При тежки стафилококов сепсис препоръчва antistaphylococcal хиперимунен плазма и гама глобулин, получена от донори, имунизирани с токсоид.

Видео: микробиологично изследване