Дифтерия - микробиология с техниката на микробиологични изследвания

Първо дифтерия бацил Corynebacterium diphtheriae) е описана от Е. Klebs през 1883 г., и F. Leffler - 1884
Морфология и багрилни свойства. Бактериите се различават изразен полиморфизъм. Обикновено те имат дължина от 3-4 микрона и 0,3-0,5 микрона дебелина (фиг. 83 и 84).

Фиг. 84. НатриВка на дифтерия филм. Покритие на метиленово синьо (процес един етап).
Фиг. 83. дифтериен прът култура боядисване на от Neisseria.

Фиг. 85. Колонии на дифтерия бацили на telluritovoy
на околната среда.
и - тип колония gravis- б - тип mitis колонии.

Най-добрата почва за отглеждането на дифтерия бактерии е сгънат кон или говежди серум. На тази среда, колониите дифтерия бацили могат да бъдат открити чрез 8.10.14 часа. Колониите кръгла форма, изпъкнала, малко повишени в центъра, с диаметър 1 мм. Повърхността на колонията е гладка или леко зърнеста, цвят крем. По периферията на колонията са по-прозрачни, отколкото в центъра. Културата расте като не се слеят един с друг колонии, което му придава леко тромав форма (шагрен).
Видове дифтерия бактерии. Въз основа на културни и биохимични свойства на трите вида пръчки дифтерия: гравис, mitis, ШегтесНиз. С вида на свързана патогени разлики в клиничната картина на заболяването. Счита се, че тип дифтерия гравис пръчки се появят по-тежки случаи, токсични. Те образуват по telluritovoy среда (агар с кръв и калиев телурит) относително голям serovatochernye или черни плоски, необработени колонии с радиална ischerchennostyo и назъбен ръб (фиг. 85) за бульон се получава гранулиран утайка и филм се разлага нишесте и гликоген, хемолиза не е причинено , Пръчици тип mitis наблюдава в случаите, когато общите токсични реакции са леки, въпреки че филмите на сливиците може да бъде доста голям. Те образуват в телур-агар гладка изпъкнала малки блестящи колонии
черно с гладка ръб, равномерно разбърква бульон, нишесте и гликоген не се разграждат, gemolitichny. ШегтесНиз тип заема междинно положение между гравис и mitis. Въведете ШегтесНиз бактерии растат слабо и се образува малък плосък черен колония с прозрачен граница на ръба. В сряда Tyndall (цистин-телурит - серум среда) колония дифтерия бацили са заобиколени от хало на тъмно кафяво. В момента, обаче, тя установи, че клиничното протичане на заболяването често зависи от бацил тип дифтерия. Всички видове дифтерия бацил разграждат от глюкоза, малтоза, галактоза, за да образуват киселина, не обгазяване. Лактоза, захароза, манитол, и те не се разлагат.
Дифте-роиди и lozhnodifteriynye бактерии. Озаглавена "дифте-роиди" условно Обединените коли, дифтерия морфологично подобни, но не с токсични свойства. Те се намират върху кожата и лигавиците на здрави хора. Тази група включва Corynebacterium ксероза, Corynebacterium акне и др.
В устата на лигавицата, носа, назофаринкса настъпва lozhnodifteriynaya коли - Corynebacterium Hoffmani.
Специални трудности при разграничаването им от дифтерия бацили опитни техник микробиолог не се усеща. Например, пръчка Hoffmann-кратък и по-дебел, не полиморфизъм разположени по двойки или ограда, не зърно volutin. Corynebacterium ксероза за разлика от дифтерия бацил има няколко зърна volutin. Други дифте-роиди размер по-малък дифтерия бацил, не разполагат с полиморфизма, са подредени една до друга под ъгъл или ограда, не разполага зърна volutin или само по едно зърно в единия полюс на клетката.
В случай на съмнение, че е необходимо да се прибегне до изучаване на биохимичната активност на изолирани култури и токсичност.
Земни среда. 1. телурова на кръвно-агар. Към 100 мл разтопен и се охлажда до 50 ° 2% пептон месо-агар (рН 7,6) се добавя 5-10% дефибринирана човешка или животинска кръв и 1 мл 2% разтвор на калиев телурит (KgTe04). Средата се размесва и се излива в чашата. В тази среда, намалена дифтерия бактерия калиев телурит на метален телур.
По-телурит кръвен агар coccal бактерии група растат бавно. Aureus колонии от края на 2 дни стават големи сив или черен с кафяво оцветяване. Coli колониите Hoffmann до края на първия ден на растеж - гладка, мазен черен с център и сиво на периферията, на втория ден цялата повърхност на колонията става черен.

1. сряда Clauberg. 100 мл 3% хранителен агар (или 7,5 грама сух хранителен агар в 100 мл дестилирана вода) се стопява, се добавят 3 мл от 2% разтвор на калиев телурит 10 мл глицерол и 50 мл смес от лак кръв. Бързо всичко се смесва и се изсипва в чашата. Medium е ясно, цвета на червено вино.

Лак кръв получава както следва: към 34 мл дестилирана вода (стерилна), добавя се 16 мл дефибринирана кръв говежди или сушени кръв или човешка разрежда инструкция съответно.
Получаване на смес от глицерол: за 40 мл говежди дефибринирана кръв или човешка кръв или разредена сух добавят 20 мл стерилен глицерол химически чиста. Сместа се препоръчва да престои в хладилник в продължение на 3-6 седмици. В тази среда, дифтерия бацил, регенериране телур сол расте под формата на кръгли непрозрачни колонии с черен или тъмно сиво център. Lozhnodifteriynye непрозрачни пръчки образуват малки колонии от сив с кафяв център. Дифте-роиди растат под формата на изпъкнали блестящи сиви колонии с черен център.

1. Цистин-телурит-серум среда Tyndall (Модифицирана съгласно инструкциите). Към 100 се добавят мл 2% от разтопен и се охлажда до 60 ° хранителен агар последователно: 1), 1% разтвор на цистин в разтвора 0,1 N H2S04 (или НС1) - 12 мл-цистин е необходимо да се разтваря в сярна или солна киселина, загрява на водна баня при температура от 80-85 °, 2) 0.1N. NaOH-разтвор 12 мл и 3) разтвор 2% калиев телурит 1.8 мл, 4), 2,5% разтвор на натриев Hyposulfite 1.8 мл, 5) нормален конски или говежди серум - 20 мл. Средата се разбърква и се излива в стерилни петриеви слой 4-5 мл.
2. Суха индикатор hinozolnaya сряда извършат B (съгласно инструкциите). Към 100 мл студена вода се прибавя 8,7 грама сух прах hipozolnoy среда, добре смесени и се нагрява на слаб огън до пълното разтопяване на агара. Средата се вари в продължение на 2-3 минути, като не се допуска агар стик, за да се образува krupnopuzyrchatoy бързо уреждане на пяна.

Към охладената до 50 ° среда прибавя 5 мл (за предпочитане 10-15 мл) на стерилен кръв, разбърква се и се излива в чашата.
След втвърдяване на средата леко се суши в сушилня и да го "могат да бъдат използвани в рамките на 3-4 дни, при температура между 4 и 10. Варени среда има син цвят. Колонии дифтерия бацили растат в 24-48 часа, а индикаторът се намаляват и околната среда се превръща в лилаво на мястото на растеж дифтерия бацили. Колониите дифтерия бацили се оцветяват в синьо.
Resistance. Температура 60 ° дифтерия бацил убива в рамките на 10 минути. На директна слънчева светлина и околната светлина стик дифтерия чувствителни.
Чрез сушене е относително стабилна. 5% разтвор на карболовата киселина убива за 1 минута.
Дифтерия токсин и патогенността при животните.
Разпределя екзотоксин дифтерия бацил, чиято токсичност може да бъде толкова голямо, че 0.002 мл подкожно морско свинче причинява смъртта на животното, след 3-5 дни. Дифтериен токсин е нестабилна: той се разрушава чрез нагряване до 60 ° С и рязко атенюиран чрез действието на светлина и атмосферен кислород. Под влияние на едновременното действие на формалин (0.3-0.4%) и температура от 40 ° по време на едно месеца може да се получи - токсоид. Токсоид се използва за активна имунизация срещу дифтерия и хора в производството на терапевтичен серуми.
За разлика от токсини токсоид достатъчно бюра: под влияние на действието на светлината върху дългосрочното съхранение и своя антигенен власт не се променя.
Най-добрата среда за екзотоксин е огнище бульон (вж. Стр 67). Силата на токсина се определя от най-ниската летална доза - .. Дим, т.е., най-малко количество токсин, който убива подкожно морски свинчета с тегло 250 г при температура 4-та или 5-ия ден. Животните не могат да получат заболяване, подобно на човешкия дифтерия. Въпреки това, в някои животни, по-специално в морски свинчета, след заразяване на развитието на редица силно характерни патологични изменения. В резултат на подкожна инжекция от дифтерит култури или животно умре на дифтериен токсин в следващите дни. При аутопсия на мястото на инжектиране се случва серозен или serosanguineous инфилтрат. Надбъбречните жлези са уголемени и хиперемичната рязко. В плевралната кухина, перикарда и перитонеалната кухина се наблюдава натрупване на серозен течност.
Когато интрадермално приложение на дифтерия токсин или култура има специфични местни некротични лезии на кожата.
Патогенеза и клинични дифтерия. Източникът на инфекцията в дифтерия е болен човек, който след разпределение - слуз, гной, слюнка храчки бактерии разсейва в околната пространство, околната среда и обекти. Най-често инфекцията се проявява чрез kapelnoaerogennym. Опасност е и оздравяващи пациенти и здрави bacillicarriers. дифтерит
пръчки могат да се съхраняват за дълго време в гърлото на хора, които са имали дифтерия. Bacteriocarrier в дифтерия, че е от голямо епидемиологично значение: тя прави имунната система и в същото време допринася за разпространението на инфекцията.
Дифтерия се предава чрез кашляне, кихане и говорене от бактерии превозвачи, както и косвено - чрез различни елементи, които са били в употреба на болния (бельо, спално бельо, играчки, книги, чинии). Храносмилателната маршрут на инфекция (чрез крем мляко и лед), феномен рядко.
Патогенезата на дифтерия решаващо интоксикация дифтерия екзотоксин. Diphtheria се проявява под формата на първични лезии на лигавицата на сливици, палатинът завеси, носа, гърлото и носа, където процесът може да се разпространи по-дълбоко в респираторния тракт, които засягат ларинкса и бронхите. Понякога има и дифтерия на очите, рани повърхности, ухото и влагалището. На мястото на въвеждане на микроби появи сиво филм, заварени да tkanyu- когато отстраняването им видима повърхност кървене.
Възпроизвеждането дифтерия пръчки се среща само в момента на изпълнението, и в кръвта, те обикновено не се продават. На мястото на размножаването на бактериите произвеждат дифтерия екзотоксин, която е напоена, дава обща интоксикация на организма.
Инкубационният период за дифтерия 2-7 дни. Заболяването започва с повишаване на температурата, болки в гърлото при преглъщане и неразположение. Токсин влияе на сърдечния мускул (малки и ускорен пулс, приглушени тонове). Кръвното налягане се понижава поради разрушаването на надбъбречните жлези. В бъдеще, в тежки случаи на дифтерия появява цианоза, студени крайници, а смъртта настъпва от остра сърдечна недостатъчност.
Diphtheria на ларинкса, или истински крупа, характеризиращ се чрез сухо лай кашлица, стесняване на лумена на ларинкса, аноксия, завършва със смърт. Токсични усложнения с дифтериен са мекото небце парализа на крайниците и различни myshts- особено опасни сърдечна мускулна парализа.
Заедно с тежки изпълнени белите дробове, нетипични форми на дифтерия, които се провеждат под прикритието на различни
възпаление на сливиците. Такива случаи са трудни за откриване и затова много опасни в епидемиологични условия.
Имунитет. Имунитетът на дифтерия антитоксичният. Тя се основава на наличието на серумни антитела - антитокини. Кърмените бебета обикновено не се разболяват с дифтерия, поради съществуващата си пасивен имунитет, който те получават от майката през плацентата, и отчасти с мляко. Впоследствие антитоксини натрупват в резултат на активна имунизация и природен контакт с нативния дифтерия бацил.

Микробиологична диагноза. В дифтерия, следните видове лабораторни изследвания: bacterioscopic, бактериологични, експериментално. Материалът за изследването са инфектирани секрети на лигавиците, филми, и епидемиолози за търсене - мляко, сладолед, промивки от различни обекти Обърнете стерилен тампон материал, състоящ се от парче памук, навита върху края на дървена пръчка или метален прът (играчки и др.). При наличието на ясно очертани дифтериен филми трябва да търка засегнатата област с тампон, напоен да получите определено количество ексудат. Материал, взет от носа в една и съща тампона, но някои минимален брой рана вълна върху него. С цел да се улови на материала, е необходимо да се премине първото тампона носоглътката. При вземането на материала от
Noca необходимо да се направи в тоалетната ноздрите (измиване с физиологичен разтвор или алкохол) и не се допира до кожата на носа.
Взети материал се поставя в епруветки и веднага изпратени в лабораторията. Ако доставката отнема повече от 3-4 часа, като се използват тампони навлажняват с разтвор на 5% глицерол в 0,85% физиологичен разтвор. Тампоните трябва да бъдат защитени от слънцето действие, замразяването и изсушаването. Предимно ваксинация (20-50%), дифтерия бацили от пациентите дифтерия се причинява най-често, като грешен материал и продължителността на времето от момента на вземането му до сеитба.
В лабораторията се пристъпи към бактериологично изследване. Тампоните се въвеждат в тръбата от сгънати конски серум и след триене на повърхността на съдържанието в серума, докато получаване въртеливо движение. В същото време направи културата на чаша telluritovym кръвен агар, в сряда или сряда Clauberg Tinsdalya да получат чисти култури от дифтерия бацили. За диагностични цели, съдържанието на пряк микроскопичен проучване на тампона в момента се провеждат рядко, но понякога при спешни случаи, по искане на лекар, прилагащи това е оправдано. Тогава, след посадъчен материал направи петна за оцветяване в синьо и Neisseria.
Поставеният материал отглеждат при 37 ° и се изследва 18-24 часа по-късно. Може да се използва за извършване на проучване, например 6-12 часа в спешни случаи. От възрастен култура получава намазки и се оцветяват с Грам, алкална метиленово синьо и Neisser и mikroskopiruyut. Понякога това забави растежа на микроби. В тези случаи е необходимо да се оставят културата за още един ден и да го повтарям микроскопско изследване. Наличието на микроорганизми с дифтериен характеристика морфологичен и багрилни свойства, може да се счита за положителен резултат.
Един метод, който позволява да изберете дифтерия бацил бързо е, че тампона premoistened стерилен серум, който се търкаля върху тампона чрез нагряване до 80 °. Серум тампон изтри засегнатата област (фаринкс, сливиците) и се поставя в термостат при 37 °.

Видео: Гледайте видео на биоматериала на ограда - dnks.ru

Имоти дифтерия бацили и в близост до него дифте-роиди

Намазки получени от 3-4 часа култура на тампона, е възможно да се открие значителен брой бактерии.
Добри резултати се получават, като материалът не сух тампон, тампон, напоен преди употреба 2% калиев телурит. Това дава последователно голям ваксинация на дифтерия бацили. При използване на telluritovym растеж тампон дифтерия бацили в околната среда Leffler не се появи по-късно от 18-24 часа.
При идентифициране на чиста култура от дифтерия бацил и разлика му от Хофман psevdodifteriynoy пръчки и дифте-роиди определя след основни свойства (таблица. 20).
При разпределяне nontoxigenic култура без ферментиращи захари дават допълнителни проби за откриване на уреаза ензим (урея разделяне) и tsistinazy (Pisa сонда).
За определяне на ензима уреаза (ЗАКС проба) се екстрахира културален бульон се инокулира в карбамид и индикатор krezolrotom. Зачервяване среда наблюдава в рамките на 20 минути показва наличието на уреаза ензим, което не е характерно за истински дифтерия пръчки. Присъствието на ензима tsistinazy открива чрез засяване в колона от културална среда с цистин и оловен ацетат, е задължително за дифтерия пръчки. Под действието на цистин tsistinazy и отцепва чрез взаимодействие с оловен ацетат, оловен сулфид форми, който оцветява средата по време на инжектирането в черно-кафяв цвят.
За крайните диференциация дифтерия пръчки от други членове на групата coryneform поставени микроскопско тест за аглутинация на предметно стъкло с поливалентна серум дифтерия следва: слепен серум разреден с физиологичен разтвор в съотношение 1: 25. Физиологичният разтвор се получава, както следва. В 100 г дестилирана вода се разтварят 3 г натриев хлорид, нагласява рН 7,6, добавяне на 5% разтвор на Na2HP04 и се стерилизира чрез преминаващ пара в три екземпляра. Изолираният културата се промива със същия солев разтвор, стерилна пипета на Пастьор и се прилага към капка поливалентен серум. Контролът се аглутиниращи серум и физиологичен разтвор. Когато положителен отговор в рамките на 2-3 минути аглутинира появяват люспи.
Реакционната Аглутинацията могат да бъдат доставени с стандарт дифтерия серуми I, II, III, IV и VI серотипове.
Ако избраната култура е достатъчно типично, след това да се разграничи от дифте-роиди генотоксичност определи тази култура чрез инфектиране на животни. Идентифицирайте е необходимо генотоксичност, посветен на културата на дифтерия бацил и в случаите, когато този микроб изолирани от здрави носители и оздравяващи пациенти или от места, като повърхността на раната, гениталиите, ушите, очите и т.н. вируси заразяват морски свинчета по два начина - .. интрадермален и подкожната , В опита на вземане две прасета, една от които (контрола) се прилагат в деня преди антитоксично дифтерия серум в количество от 500-1000 AE-друг прасе (експериментално) серум не се прилага. В деня на експеримента двете прасета бяха приложени тест култура в количество от 0,2 мл при стандартна 50-100-200 млн. Микроб в 1 мл. С въвеждането на дневна култура под кожата на морско свинче тя развива следните явления. На мястото на приложение в рамките на няколко часа testovatoy съгласуваността на инфилтрат, който до края на 1-битов или 2 дни достига доста значителен размер. Животното става апатичен, слаб и отказва да се храни. Смъртта настъпва през различни периоди (1-5 дни или повече), в зависимост от културата и токсичност на дозата. При отваряне на администрацията на място серозен или serosanguineous инфилтрация, в които се намират доста множество ожулвания дифтерия bakterii- кръв и органи остават стерилни. Посмъртно други явления, характерни за увеличаване и най хиперемия надбъбречната и серозен ексудат в плевралната кухина и в перикарда. Органите са некротични зони проникнати от левкоцити, мускулите и нервната тъкан - дегенеративни промени. Когато интрадермално прилагане на мястото на културата е възпалителна реакция и некроза. В контролни прасета не забелязват реакция при двата метода на приложение на културата. метод Vnutrikozhiy позволява прасе за тестване на няколко щама на дифтерия бацили.
Генотоксичност дифтерия бацили могат да бъдат определени в друга, по-опростен метод. Блюдото на Петри Geidenreich излива в 12 мл разтопен и се охлажда до 50 ° 2% пептон месо-агар или 2% агар огнище бульон, към който се прибавя 0,3 мг цистин и 15-30% нормален конски серум. Смесва се добре и се оставя да се втвърди агар. След това, в средата на чашата се поставя лента от филтърна хартия и се стерилизира в автоклав навлажнена дифтерия антитоксично серум, съдържащ в 1 мл 500 AE. Блюдото се суши в сушилня в продължение на 15-20 минути, след това се инокулират с култура при изследването инсулти перпендикулярна на хартиен филтър или плаки с диаметър 1 см на разстояние от 0,5 cm от хартията. Една чаша може да посее 3-4 култура (една контрола - интоксикации).

Фиг. 86. образование утайка - флокулират ( "Boom - мустаци") в резултат на взаимодействието на дифтерия токсин, дифтерия бацили с антитоксично серум.
Засяване на всяка култура произвежда плаки или четири линии (две от всяка страна).
Културите се поставят в инкубатор. Счетоводен произвежда 24, 48 и 72 часа.
Определяне генотоксичност на базата на следния принцип: токсина, произведени в процеса на растеж на дифтерия бацил, дифузен в културалната среда като специфичен серум от филтърната хартия. Среща токсин и антитоксин придружава от образуване на утайка линии - флокулиран под формата на "антени" или "стрелката" между инсулти култури. Те могат да бъдат много ясно се вижда от това, една чаша на тъмен фон с лупа. Генотоксични щамове линии се събират в периферията на друг, и ако има генотоксични щам на контрол върху растежа, линиите са свързани за да се утаи този щам. Генотоксични флокулиран (контрола) и nontoxigenic щам не се събират, и преминава (фиг. 86).
В случай на откриване на морфологични типичен дифтерия пръчици отговори: "Установена дифтерия бацил." В отговор на диагностични тестове, освен ако няма растеж дифтерия бацили, които показват, други микроорганизми obnaruzheny- в отговор на bacteriocarrier те не могат да празнуват.
Пример.
АНАЛИЗ № 1
Слузта от гърлото на пациента Нина Иванова дифтерия на.
Бактериологично изследване на секрет от гърлото бацил дифтерия е открита. Получени растежа на грам-положителни стрептококи.
Лаборатория (подпис)
Специфична превенция и терапия. Активна имунизация на деца с цел превенция се извършва чрез въвеждане на тетаничен токсоид. В момента в широк медицинска практика включва комбинация от лекарства: дифтерия, коклюш и дифтерия-koklyushnostolbnyachnaya ваксина (DTP).
В някои случаи, за профилактика на дифтерия при деца, които са в контакт с пациенти, е необходимо да се извърши пасивна имунизация чрез инжектиране на антитоксичният дифтерия серум.
С цел на лечението на пациент, интрамускулно или подкожно приложение на дифтерия серума. Доза тя варира в зависимост от възрастта на пациента и тежестта на заболяването. Неговото действие е по-ефективна колкото по-рано се въвежда. Антитоксичният серум не бактерицидно действие и лечение на пациента, той може да остане bacillicarriers и могат да заразят други хора.
киселина бацили
В групата на киселина бацили са причинителят на туберкулозата (Mycobacterium туберкулоза) и причинител на проказа (Mycobacterium лепра). Mycobacterium на рода също се отнася брой сапрофитни бактерии, срещащи се в почвата, водата, мляко, масло и на човешка кожа (в разделени препуциума кратно-M. Smegmatis). За някои свойства (образуване на разклонени форми и забавяне на растежа на някои микобактерии на хранителна среда) микобактерии подобен на гъби, което обяснява името на групата (mycos - гъби). Бактерии от тази група става известна като киселинно-устойчиви, защото те са ясно изразено устойчивост на минерални киселини: 5-10% разтвор на сярна и солна киселина, те се съхраняват продължително време. Освен това, приемането на един или друг цвят (например, магента карболин), те не потъмнява разтвори на минерални киселини. В допълнение към устойчивост на киселина, алкални резистентни микроорганизми, тази група и алкохол.
Киселина инфлуенца сапрофити се различават от тези, които не се изисква от хранителната среда и растат в широк температурен диапазон.