Използване ензимни реакции и радиоактивни изотопи - biomaterialovedenie - полимери за медицински цели

методи за анализ, използвайки ензимни и радиоактивни изотопи
На повърхността на полимера в контакт с кръв предимно адсорбирания плазмен протеин след това се провежда по trombotsitov- адхезия аденозин фосфат освободен, серотонин и други активни вещества. Това ще засили сближаване и агрегирането на тромбоцитите, т. Е. процеса на кръвосъсирването. Разбирането на механизма на тромбоцитна адхезия е основен проблем на цялата развитието на полимерни материали за медицински цели, имащи tromborezistentnosti.
Лий и Ким и др. [47] осъществява цикъл кинетичните опити за изследване на тромбоцити адхезия към различни полимерни техники в materialam- полагане използване на ензимни реакции. Известно е, че при контакт на кръвта с полимера непосредствено преди етапа на тромбоцитна адхезия започва конкурентни адсорбция на плазма протеин съставки. За да се изследва естеството и кинетиката на този процес, експериментаторите са белязани в 1251 трите компонента на протеин албумин, гама-глобулин и фибриноген. Техниката се състои от радиоизотопни маркери, че първият белязани с един от тези протеини, а останалата част се оставя nemechennymi- смес от три компонента като изкуствен плазмена проба се приготвя със съотношение almubin / у-глобулин / фибриноген = 16/6/3. След това всяка проба се инжектира в контакт от този тип с полимерен материал и определя количествено с помощта на адсорбция сцинтилатор протеин във всеки случай. Фиг. 94, 95 и 96 са показани кривите описващи кинетиката на адсорбция на албумин, у-глобулин и фибриноген проби флуороетилен-пропиленов съполимер, сегментирани tersopolimera естер с карбамид и уретан и силиконови смоли. Графиките показват, че в зависимост от природата на полимера и скоростта на равновесие на адсорбция претърпи много силни промени.
То е проведено и пилотен цикъл. Пробите, идентични на тези, описани, е в контакт с кръв в продължение на 3 минути се определя всеки състав и адсорбираният протеин и адхезията на тромбоцитите. Резултатите са показани в таблица. 50.

Време, мин
Фиг. 95. А конкурентни адсорбция на компоненти на кръвната плазма протеини на повърхността на сегментния съполимер с естер уретанова и карбамид. 1 - fibrinogen- 2 - албумин 3 - V-глобулин.

Фиг. 94. конкурентни адсорбция на белтъчните компоненти на кръвната плазма на повърхността на флуороетилен-пропиленов съполимер.
1 - fibrinogen- 2 - албумин 3 - V-глобулин.
Digital материал показва, че тези полимери, които лесно се адсорбират фибриноген и глобулин,

Фиг. 96. А конкурентни адсорбция на компоненти на кръвната плазма протеини на повърхността на незаети силиконов каучук.
1 - fibrinogen- 2 - албумин 3 - у-глобулин.
способност за сцепление на червените кръвни клетки, изразено много по-силна, отколкото материалът лесно адсорбира албумин. Причините за това разминаване са били обект на разследване Ким и др. Избрани им техника се основава на използването на ензимни процеси.
Известно е, че фибриноген и глобулин - гликопротеин, съдържащ странични вериги от въглеводородни радикали, като албумин не е гликопротеин.

Таблица 50. Състав на протеин, адсорбиран върху повърхността на пробите от полимерен материал и броя на тромбоцитите спазват

Също така беше установено, че има tsialevokislotnaya и галактоза трансфераза филм върху повърхността на тромбоцитите (ензими, които съответно tsialevuyu транспортиране киселина от CMP-производно краища graftoznye и галактоза от своя CDP-ацетилглюкозамин производно в краищата). Всичко това прави възможно да представи работна хипотеза, че специфична връзка на еритроцитите с плазмените протеини поради glyukotransferazy повърхността взаимодействие еритроцити с плазмен гликопротеин странични вериги - на един от неговите матрици [48]. (Глава 3 вече беше споменато тази хипотеза.)
Полиетилен и силиконова смола се извършва по същия размер тръба и ги инжектира в контакт с разтвор на албумин (60 мг%), гама-глобулин (60 мг%) и фибриноген (20 мг%) кръв говежди серум и човешка плазма. В резултат на вътрешната повърхност на тръби, покрити с различни протеинови отлагания. Всяка епруветка се обработва с невраминидаза, разцепване и по този начин изваждане от 80 до 90% tsialevokislotnyh остатъци, съдържащи се в гликопротеина. Също така част от епруветките се обработват допълнително и р-галактозидаза, премахване на 60 до 70% от галактозни остатъци. Протеин, който преди третиране с ензими, съдържащи tsialevokislotnye остатъци в краищата на страничните вериги в трансформираната матрица tsialevokisloy трансфераза, подходящи за отстраняване на чрез ензимно третиране на тръбите, след лечение, tsialevokislotnye остатъци. Очевидно, това се дължи на това се приема на голям брой tsialevoy киселина от CMP-производно.
Подобен модел се наблюдава в протеин, съдържащ ензимното действие на крайните групи в страничните вериги на галактоза. След ензим лечение тръбите на втората група се превръща в подходяща матрица галактоза трансфераза и по всяка вероятност, много приема галактоза от UDP-негово производно.
Въз основа на тази хипотеза, са извършени последващи експерименти. Gomozinazoy разцепва третира еритроцити, при което се получават glyukotranoferazu, получен и смес с белязани проби GMR 14C tsialevoy киселина и PR-14C-галактоза. След това сместа се поставя в контакт с тръбите смола лекувани веднъж или два пъти по начина, описан по-горе (във всички случаи едновременно контакт). След това се определя количествено като се използва сцинтилационен трансфер белязан 14C глюкоза в протеин по повърхността на тръбите. Резултати от експерименти, проведени при 37 ° С за тръби от полиетилен са показани в таблица. 51.
Таблица 51. обработка на глюкоза странични вериги и променя трансферазна активност на адсорбирания протеин, трансфер tsialevuyu киселина и галактоза в еритроцити (тръба от полиетилен, 37 ° С);

В нея се посочва, както следва. В случай на тръби, покрити с албумин, който има активност почти никакви странични вериги glyukotransferazy срещу тромбоцити остава ниска независимо дали тръба подлага на ензимно третиране. От друга страна, у-глобулин и фибриноген, съдържащ странични вериги въглехидратни остатъци, се характеризират с (дори преди лечението ензимната) glyukotransferazy висока активност по отношение на тромбоцитите. Както tsialevokisloy трансфераза от края на елиминиране tsialevoy киселинни странични вериги, и галактоза трансфераза след елиминиране tsialevoy киселина и галактоза, активността на тези ензими, както се увеличава с един порядък. Резултатите от тези експерименти ясно показват, че глюкозата странични вериги на фибриноген и у-глобулин, адсорбирани върху функционирането на полимер като акцептори glyukotransferazy повърхност на тромбоцитите. Това е причината за високата способност адхезия на червени кръвни клетки по отношение на споменатия гликопротеин.
Описаното изследване е предназначено да открият и интерпретира механизъм bedkami характеристика връзка между кръвната плазма и червени кръвни клетки по отношение на ММР специфичност glyukotransferazy еритроцити по отношение на структурата на захарни странични вериги на плазмените протеини. В тази връзка, че е изключително важно да се извършват всички изследвания в умерени температурни условия, така че да се извърши структурна обмен на страничните вериги на протеини, във всеки случай, без да се променя структурата на основната верига. Използването на ензимни реакции позволено Лий и Ким успешно да изпълни тази задача. Тя все още е неизвестен за причините за защо фибриноген и глобулин, са в адсорбирана форма, активно да взаимодейства с тромбоцитите, докато същите протеини, но свободно съществуваща в плазмата, не показва голяма част от дейността.
Таблица 52. Ефект на 1 ~ 1311-адсорбция върху повърхност платина ACN, хром и силиций (мг / м2)

Освен това, експериментите показват, че за количествено определяне на протеин адсорбция върху повърхността на медицински полимери е много ефективен метод за използване на радиоактивни изотопи. Литературата описва някои от въпросите в тази област остават нерешени и изискват развитие [49]. За 1311 и 1251 изотопите протеинови етикети се използват най-често в таблицата. 52 показва резултатите от тестове за определяне на адсорбцията на кръвния албумин, човешки серум (ACS) на повърхността на платина, хром и силиций. Експериментите се основават на 1311 проби от три метали предварително инкубирани в продължение на 18 часа в разтвор на натриев йодид (1 мг / мл).
От Маси материал. 52 показва, че във всички случаи протеинът се адсорбира върху повърхността на силиций и хром в количества от същия порядък, както и на платината - много по-трудно. Много е вероятно, че тази разлика се отнася до способността селективно да адсорбира платина йод, при което е много податливи на влиянието на I- в разтвор. По този начин, данните в таблицата. 52 съответства не само ACN адсорбция върху повърхността на платина, но също така и утаяване на общото количество йод в системата.
Вместо това, етикетът 1311 може да се използва на 3 часа. Адсорбция на 3H-белязан AKC 1311 проби на платина и хром повърхност, посочени в таблицата. 53. нива значителна разлика адсорбция, достигайки 95%, дава възможност да се установи наличието на специфични протеинови взаимодействия с материала. Също така се изключват напълно да промени структурата на протеини и по този начин въвеждането на радиоактивен изотоп. Така че, съществува значителна разлика в нивата на адсорбция модели 1311, ACN и 1251 AKSg въпреки идентичността на методите за получаване на белязани проби и експериментални условия. Всички фактори, причиняващи несъответствието, но не се тълкува, обаче, възможността за структурни промени на протеина с въвеждането на радиоактивни изотопи не е под съмнение.