Метод Кръгов дихроизъм - biomaterialovedenie - Полимери медицински цели

Първите стъпки в използването на кръгов дихроизъм (CD) в biomaterialovedeniya (а именно за изследователски stereostructures биополимери) принадлежат на автора на тази глава. Целта беше да се съвместно използване на методите на UV и CD спектроскопия и количествен анализ на процес протеин адсорбция полимерната повърхност най-прост и лесен начин, при условия, възможно най-близо до естествено съществуващи в живото тяло.

Фиг. 78. Схема спектроскопия Кръгов дихроизъм (CD). Обяснението в текста.

Фиг. 79. членове метод диаграма KD използва кювета покритие полимерен филм.
Основният принцип на метода е представено с KD схематично на фиг. 78. лъча светлина пада от източник 1 (ксенонова лампа) на за фокусиране огледало 2 и влиза в монохроматор 3 и в поляризиращ елемент 4. Тук монохромни поляризирана светлина придобива плоска поляризация и след това влиза в кюветата Pokelya 5, където се разделя на лявата и поляризирани греди дясното въртене. След това лъч преминава през кювета 6 полимер с проба и навлиза в детектора 7, което е фотоумножител. Тук, разликата между изчезването на пробата по отношение на лява и дясна кръгова поляризация лъчи [34, 35].
В резултат на работата на автора и колеги. [36] метод за анализ се основава на използването на изпитвателната камера с покривния материал. Процесът на техника е както следва. Използване на кварцова кювета подходящ за UV спектроскопия, и метод за CD. На вътрешната повърхност на клетка или на повърхността на уплътнението, вкарана в него, покрити с филм от полимера в процес на разглеждане. След това кюветата се въвежда в протеиновия разтвор (рН 7,4- 37 ° С) и се поставя в контакт с полимера за предварително определено време. След старателно се промива с разтвор на кювета фосфатен буфер. Накрая, запълва този буфер и се анализират и съща проба, чрез последователно UV метод CD спектроскопия.
Фигура 80. Спектралните криви на CD а-спирала (1), р-структура (2) и произволен намотка (3).

Следователно, предложен техника позволява практически едновременно определяне на количеството на протеин адсорбирания полимер и маркирайте всички денатуриращи разгражда промени. Общата схема на такава техника е показано на фиг. 79.
С помощта на UV пик при 220 нм, калибрационна крива за говежди серумен албумин кръв (влизане I / I0 = д / С- I - дължина на кюветата, в - концентрация). Резултати от анализи позволиха да се установи, че този връх >Тя не зависи от промените в разграждането на протеина, както е определено от неговата концентрация. Използване елиптичност коефициент F222 до 22 нм, което се определя начин KD се изчислява коефициент [0] R22 среден брой на остатъчни групи на адсорбирания протеин. Изчисляване проведено от формулата:
където M0 - среда баланс обем, равен на 118.
Фиг. 80 показва спектрални криви на CD а-спирала, р-структура и случайна намотка. Както се вижда от кривите, една от характеристиките на спектрална профил конфигурация като CD-спиралата е фактът, че при 222&rsquo- нм и 208 нм, тази верига има два отрицателни пикове на приблизително еднаква амплитуда. Известно е, че отрицателно пик при 222 нм не зависи от естеството на протеина и видовете и количествата -40000, следователно по следната формула по-долу може да се определи процентът на протеин в структурата на а-спирална.
Съдържанието на а-спирална структура,
По методиката, описана адсорбцията на албумин и глобулин е изследвана в резултат на 15 секунди контакт с

polyionic комплекси. По-специално, те са манипулиране на комплекса, който препоръчва формула Tsuruta Teydzi.
Фиг. 81 показва CD спектъра на разтвора на албумин и албумин адсорбира върху филма на polyionic комплекс. Сравнение на спектралните криви показват, че степента на денатуриране на белтъците е практически незначително. Фиг. 82 показва разтвор CD спектри глобулин и гама-глобулин, филмът адсорбиран върху polyionic комплекс.
Сравнение спектрални криви Очевидно е, че адсорбцията причинява много значителна промяна в пространствената структура на протеина.
Кривите в двете графики (фиг. 81, 82), че дори след 15 секунди на абсорбция на полимер повърхностния слой се образува от няколко протеинови макромолекули дебели. Също така беше установено, че у-глобулин съдържание на р-структура варира 16-31%, т.т. Е. много силно.

В заключение трябва да се подчертае, че, за разлика от метода на IR спектроскопия ATR, метод CD не е свързано с необходимостта от сушене на образците и позволява да се манипулира при условия, които са достатъчно близо до естественото, така че с основание може да се разглежда като много обещаващ.
Фиг. 81. CD спектри на разтвор албумин (А) и албумин адсорбира върху polyionic комплекс покритие (В).