Микробиологична лаборатория в клиниката - инфекциозни заболявания при децата

Инфекциозни заболявания 0
Микробиологична лаборатория в клиниката
Отговаря за правилното и ефективно използване на лабораторията за микробиология за диагностика на инфекциозни заболявания клиницистите трябва да носят. Тя е, че те, а не лабораторни работници решават кои материали трябва да бъдат събрани за изследването, кога и как да ги вземем и как да се използват лабораторни методи. Специалистът трябва също така да гарантира навременното и правилното транспортиране на материали, получени, за да знаят как да се разбере и интерпретира резултатите от микробиологичните изследвания.
Резултатите от диагностични тестове, успеха или недостатъчност се определят от избрания материал. В много случаи, лекарят ръководи от симптомите на заболяването, може правилно да поеме своята етиология. Често, обаче, клиничните симптоми са толкова нехарактерно, че само микробиологична лаборатория може да помогне при диагностицирането. Материал за бактериологично изследване трябва да бъде извлечена от органите, участващи в патологичния процес, като например цереброспинална течност е на проби трябва да се събира в рамките на менингит и - артрит. Особено внимание трябва да се обърне и на възможното цел на инфекция, като на горните дихателни пътища при пациенти с симптомите на менингит.
Лекарят трябва да го реши да извърши търсенето на причинителя, за идентифициране на антитела, за да го вземе или и двете. За да се изолира причинителят често е необходимо да се направи на няколко култури.

1. Лабораторна диагностика на бактериални инфекции

Най-предпочитаният метод за диагностициране на бактериални инфекции се основават на откриване на патогена в намазки и култури.
Култури изпражнения. Култури от тампона (тампон от ректума) или произвеждащи изпражнения по две причини: За да се идентифицират общите бактериални патогени, такива като Salmonella, Shigella, както и за определяне на преобладаващите чревната флора при пациенти с отслабена имунна система, които имат нормална флора могат да придобиват патогенни свойства. Трябва да се помни, че в изпражненията съдържа най-вече анаеробни микроорганизми, както и обичайните бактериологично изследване разкрива предимно аеробно. Когато чревната флора на заболяването нормално до голяма степен заменят патогенни и следователно улеснява изолирането на последния. Въпреки това, дори и в тези случаи е необходимо да се използва селективна среда, които инхибират растежа на придружаващите микрофлора.
През последните години, броят на патогени, които могат да присъстват в изпражненията, увеличена значително. Те включват Campylobacter, Yersinia, и Clostridium (раздел. 9-1). При определени обстоятелства е необходимо да се изследва епидемиологични изпражненията на холера и вибрион paragemolitichesky, производство на семена за тази цел на специална култура медии.

Таблица 9-1. Някои патогени за отглеждане на което изисква специален културална среда

видео: "с Genesis"Генадий Онишченко заяви за причините за появата на вируса Жика в Абхазия

Едно проучване на секрет от носа, гърлото и кожата. Сух памучен тампон от специален материал (водорасли) е най-удобен за патологичното материал с кожата и с мукозните мембрани. Тъй като сушене патогени бързо унищожени, тампони с биологични проби трябва да бъдат поставени незабавно в запечатана тръба, която от своя страна се поставя в преносими стативи.
Тълкуване на резултатите от изследване на култури, получени от кожата и лигавиците, е трудно, тъй като те са в нормална микрофлора е разнообразен. Някои микроорганизми се считат за абсолютно опортюнистични патогени, като дифтерия, коклюш, gonorei- друга, например стрептококи, стафилококи, патогени грип Neisserial, в зависимост от конкретните клинични обстоятелства може да се разглежда като патогенни, непатогенен или само като индикатори на бактерии. В същото време, някои микроорганизми, като Branhamella catarrhalis, рядко патогенни. Тя не трябва да бъде прекалено категорично отрече връзката на микрофлората на горната и по-дълбоко дихателните пътища с белодробни заболявания. Както за посев храчки са трудно да се получи, е необходимо да се прибегне до стремежа на трахеята или белодробен пункция на.
кръвни култури. Резултатите от кръвни култури често са най-важни за изясняване на етиологията на инфекция.
Сеитбата трябва да се извърши преди въвеждането на антибиотици, като се обръща внимание на стерилността. След промяна игла венепункция и се разпределят в епруветки с кръв културална среда при стайна температура. Ако преди лечение с антибиотици не може да получава повече от една проба, тогава общото количество кръв трябва да е достатъчна, т.е. новородено вземат 10 мл възрастен - .. и 60 мл съответно пропорционално по-малък размер на междинно съединение възраст. Във всяка от 50-millilntrovuyu колба се поставя не повече от 5 мл кръв (за настоящото унищожаване него някои пеницилин бактериолог препоръчваме добавяне пеницилиназа). В момента, хранителната среда се въвежда сулфонат polienetanola за предотвратяване на коагулацията и инактивиране на левкоцити. В някои тръби сряда обогати С02 за култивиране на анаеробни микроорганизми. При идентифицирането на растежа на културите трябва да се повтори, за да се определи: 1) дали успешно лечение, ако пациентът вече е започнало, като antibiotiki- 2) не е дали растеж в резултат на замърсяването pepatogeipym mikroorganizmom- 3) дали организмът е в кръвта, ако пациентът все още не е аз започнах да получавам антибиотици.
Анализ изисква специален въпрос се отнася до това дали избраният микроорганизъм патогенен вярно или е резултат от случайно замърсяване на материала по време на вземане на проби, тъй като обикновено патогенни микроорганизми могат да причинят заболяване при хора с увредена имунна система,
Изследване на гръбначно-мозъчната течност. Получава се от лумбална пункция или от вентрикулите на мозъка цереброспиналната течност (CSF), за да се събира в стерилен контейнер и транспортирани непосредствено до лабораторията. Лабораторни CSF се центрофугира за утаяване на микроорганизмите. Когато оцветени Грам утаяване се определи естеството на бактериален или вирусен менингит, обаче, впечатлението, получен в изследването на намазка не трябва да ограничават лечението. Грешки са възможни, дори и за опитни професионалисти, така че за предпочитане да се предпише широкоспектърен, особено в животозастрашаващо заболяване, а не да чака резултатите от засяването на CSF. Коагулацията съдържащ кръвна плазма или CSF трудно да се идентифицират и преброяват микроорганизми клетки. В този случай, част от него се поставя в епруветка с оксалат. Голям брой микроорганизми позволява серологично изследване, използвайки антитела на X. грип, или различни видове менингококова и пневмококова. За бързо и точно диагностични методи включват количествен имуноелектрофореза и реакционната латекс аглутинация. За определяне на антигени, такива като P. грип тип Ь, N. meningitidis, S. пневмония, група В стрептококи и Е.коли К1, може да се използва специфични антисеруми. Ако менингит етиология остава неясно, той трябва да се използва за боядисване киселина форма сеялки микроорганизми и идентифициране на Mycobacterium tuberkuleza- също препоръчва да се проведе антигени примерни и криптококов свиня CSF за идентифициране на гъбички.
посявка на урина. Преброяване и засяване за колония трябва да талвег урина или да го получите чрез катетър или подстомашна пункция. Последният метод е по-точен, тъй като тя дава възможност за по-малко замърсена урина.
Когато съдържанието на 1 мл талвег урина, получена след подходящ препарат, повече от 105 микроорганизми могат да бъдат посочени и в количество 104-105 само поеме инфекция. Това се отнася само за неусложнени инфекции на пикочните пътища, причинени от Грам-отрицателни Ешерихия коли. Други критерии, използвани срещу грам-положителни и дрожди-организми при пациенти с диабет, хроничен пиелонефрит или получаване на антибиотици. Въпреки малката вероятност за това заболяване сред хората в урината се определя от малък брой бактерии, във всеки случай, трябва да се извършват повторни култури и извършва клиничен преглед, преди да реши въпроса за начина на лечение. Неправилно голям брой микроорганизми често открит в урината момичета, взети без адекватна предварителна подготовка и за дълго време се оставя при стайна температура. В такива случаи, повторени изследвания са потвърдили бактериурия. Сеитбата трябва да се извършва много внимателно, тъй като фалшиво положителни резултати може да доведе до дългосрочно лечение на пациента с антибиотици.
Ексудат и transudates. абсцеси съдържание, изливи интраплеврално, вътреставно течен секрет от уретрата, други ексудати тялото и transudates може да се засяват директно върху агар. Трябва възможно най-бързо, за да достави на събраните материали в лаборатория. В допълнение към намазка и култура, в ексудатите и трансудат е необходимо да се определи нивото на кръвната захар и състава на клетки за същите причини, както при анализа на CSF.
Оцветяване намазка грам. От всички течности, насочени към бактериологично изследване, включително урина утайка трябва да се приготвят намазки оцветяват от Грам. Намажете осигурява бърза реакция и също така помага при последващото тълкуване на резултатите от изследването.
Специални методи на отглеждане. Повечето патогенни микроорганизми могат да бъдат култивирани в кръв и шоколад агар и MacConkey среда. През последните години в резултат на увеличаване на използването на медиите с нисък потенциал за намаляване става все по-отпусне анаеробни микроорганизми. Tioglikolatovy бульон, голямо среда за нормална реколта, не е благоприятна за развитието на строго анаеробни флора. Пробите, които се приемат за анаеробни патогени, трябва да бъдат транспортирани в запечатан спринцовка или специален тампон поставя в безкислородна среда. В някои случаи, когато е клинично показано, се използва специфична среда (вж. Таблица. 9-1). Спекулациите за евентуален причинител на лекаря трябва да се отчетат в лабораторията по-рано. Ако болнична лаборатория не е подходящ за вашата среда, трябва да извършите тези изследвания в други лаборатории.
метод флуоресценция. Метод имунофлуоресцентен значително разнообрази възможности Bacterioscopic диагностика. Вече се предлага в различни специфични серум за много патогени. Молекулите на антитяло са плътно свързани с флуоресцентно багрило.
Намазка съдържащ предполагаемия микроорганизъм се третира с подходящия серум и mikroskopiruyut ултравиолетова светлина. Около този патоген концентрира антителни молекули, което води до светло флуоресценция. Този метод позволява откриване на минималния брой патогени в препарата. описан директно техника флуоресценция е възможно само в присъствието на антитела, белязани с флуоресцеин. В противен случай се прибягва до по-сложна технология на непряк флуоресцентна микроскопия е както следва. Първо, анализирани намазка покритие немаркиран специфични антисеруми, което позволява на улавящо антитяло, и техните излишък (не-фиксирана антитела) се отмива. Второ, за намазка добавена гама-глобулин белязани с флуоресцентно багрило и съдържащи антитела серум на животни, от които са получени антисеруми. Така маркирани антитела се определят от специфичния микроорганизъм комплекса - антитяло. метод флуоресцентно антитяло се използва по-специално за идентифициране на Mycobacterium туберкулоза, коклюш, дифтерия, гонорея, група А стрептококи, Legionella, и др. За откриване на Mycobacterium туберкулоза без да се прибягва до метод за използване antitel- намазки оцветени с родамин-auramip селективно захващане микобактерии и mikroskopiruyut в ултравиолетова светлина. Това оцветяване е по-чувствителен, но по-специфично от обичайното, въз основа на способността на микобактерии на киселина съпротивление.
Кожните тестове. Основната индикация за тестване на кожата е заподозрян микобактериални инфекции.
Пречистеният протеин производно на Mycobacterium туберкулоза (PPD-S) и други микобактерии (PPD-B, PPD-Y и др.) самите не са чувствителни макроорганизма, но са в състояние да откриват повишената чувствителност, че в много случаи по-лесно и по-бързо диагностициране. Отрицателните резултати от тестове на кожата за съмнение за туберкулоза могат да посочат, алергия, следователно необходимостта от провеждане на допълнителни тестове с набор от антигени, които включва антигени гъбички. Кожните тестове могат да се извършват и гъбични инфекции, но те по-голямо значение за епидемиологията, отколкото да диагностицирате отделни случаи.
серологични тестове. Набор от бактерии често се извършва чрез използване на аглутинация със специфичен серум (понякога прикрепен към латекс частици). Определяне на титър на антитяло в серума има значение само по време на някои бактериални инфекции, включително тези, причинени от Streptococcus, Salmonella, Brucella, и Legionella Leptospira.
Когато стрептококови антитела срещу инфекции екзотоксин изследват За да се определи дали те са се образували по време на последния инфекцията.

Методи за използване на streptozima очила тип

Wampole ви позволи бързо и точно определяне на антитела към многобройните екотоксини. По отношение на Salmonella (Widal тест) антитяло може да се открие отделно за всяка група (А, В, С, D и др.) И флагелати и соматична. Точността на серологични тестове зависи от качеството на антисеруми да се наблюдава периодично. През serodiagnosis е необходимо да се разгледа възможността за кръстосана реактивност, и наличието на антитела след рано контакт с патогена. Във всеки случай се счита надежден само 4-кратно повишение в титъра на антитела към съответния патоген или повече.

Тестове за чувствителност към антибиотици. В повечето лаборатории изследва чувствителността на микроорганизмите към антибиотици. Съответната информация е жизнено важно за лекарите лекуващи агент на избор, но те не винаги са запознати с това как да заявите най-много информация в лабораторията и как да го тълкувам.
Най-разпространените методи за определяне на чувствителност към метод антибиотици отнася Kirby - Bauer, където в плочата посява със стандартен брой микроорганизми. Парче от филтърна хартия, импрегниран с антибиотик са поставени върху плочата и измерване на потискането на зоната на растеж около всяко парче (диск). Концентрацията на антибиотика в твърдия диск съответства приблизително създаде нива на лекарството в кръвта, а диаметърът на зоната на инхибиране показва чувствителността на микроорганизъм към него. Тя трябва да бъде известно на стандартен размер на зоната показва чувствителност или резистентност към антибиотик.
Въпреки това, методът на диск има редица недостатъци. Например, изследванията са установили геометрични фигури, че разликата между зоните на инхибиране на растежа на 1 mm съответства на 17%, еквивалентни на 17% от активността на съответния антибиотик. Следователно, дори много малка разлика в диаметъра на зоната ще се превърне в значителна активност разлики наркотици. Във връзка с това много важно да придобива точността на измерване и скоростта на дифузия на антибиотика.
За по-точно определяне на чувствителност към антибиотици, все повече се използват техники решения за размножаване в епруветка или микротитърна стъкло. Антибиотик постоянно отглеждани за развъждане на някакво ниво, за едно и също ниво в кръвта. След това към всяка епруветка се поставят на плоча или определено количество от културата микроорганизъм (приблизително 105 лица), варира в зависимост от характеристиките и хранителна среда обем. След 24 часа на тръба или плоча се проверява чрез определяне на мътност в него разтвор прозрачност в първата тръба показва минималната концентрация на антибиотици, оказващи бактериостатично действие на патогена (минимална инхибираща концентрация - MIC). След това материалът на тръбите или плаките се посяват върху твърда среда агар да брои броя на колониите. Концентрацията на антибиотика, който разрушава 99.9% на микроорганизмите се счита минимална бактерицидна (МВС).
В допълнение към техническите грешки, грешки могат да се дължат на неправилна интерпретация на резултатите, получени клиницист. Тълкувайте ги само когато е необходимо да се отчитат фармакокинетиката на антибиотика. В някои клинични ситуации, като ендокардит или остеомиелит) трябва да се използва преди всичко бактерицидно отколкото бактериостатични агенти. Когато хематогенни инфекции, причинени от стафилококи, които са чувствителни към еритромицин и полусинтетични пеницилини, лечение пеницилин трябва да се прилага. Необходимо е да се вземе под внимание, че токсичността на лекарствата и да даде приоритет на по-малко токсични. В крайна сметка, текущото ниво в кръвта и тъканите на антибиотици е показател за неговата клинична ефективност. По този начин, полимиксин В инхибира растежа на бактериите върху голяма площ само в vitro- в клиниката на най-високата поносима доза не осигурява достатъчно високо ниво в кръвта. В контраст, карбеницилин, не показва активност ин витро, е високо ефективен ин виво, както в кръвта създава висока концентрация и е маркиран синергизъм с други антибиотици като гентамицин.
Бактериостатична и бактерицидна активност на антибиотика в серума или други телесни течности на пациента може да се измери. За този патоген, изолирана от пациент се поставя в серума на различни разреждания, получени през време след прилагане на антибиотик на пациента. По същия начин, концентрацията на антибиотик в кръвта може да се определи чрез химически или микробиологичен метод при използване на набор от бактериални щамове с точно известна чувствителност към съответния лекарството. Тези измервания трябва да се правят при лечението на аминогликозидите при пациенти с бъбречно заболяване.
Значението на тези техники потвърждават данните, получени от наблюдение на пациенти с стрептококов ендокардит. Първо определяне на чувствителността на патогена на избрания пеницилин G. Когато чувствителността към него микроорганизми измерва бактериостатично и бактерицидно действие на лекарството при 30 минути и 6 часа след приложение. Бактерицидното действие на лекарството се наблюдава след 30 минути на кръв при разреждане на най-малко 1: 8, и след 6 часа - при разреждане 1: 2.