Откриване и определяне на киселинни мукополизахариди - основа на хистология

Откриване и определяне на киселинни мукополизахариди (гликозаминогликани)

Убедителни данни за присъствието на киселинни мукополизахариди могат да бъдат получени от цялостна прилагане на следните методи.
Идентификация на киселинни мукополизахариди на метод Gal (Hale) (замразени секции, скоби - формалин Karnua- налива течен парафин). Решение на колоидно желязо. В 100 мл кипяща дестилирана вода, за да се излива с разбъркване в 12.8 мл 10% разтвор на железен хлорид, променя цвета разтвор от кафяв до тъмно червено. За да го отстрани от НС1 продукция диализа.
Разтвор на оцетна киселина - 2М.
Подкиселеният разтвор geksatsiano-ферат (2) калиев - фероцианид и НС1.
Метод. 1. раздели 5-7 микрона дебелина депарафиниран и доведени до вода.

1. Тигелът равни обеми диализират железен хлорид и 2М разтвор на оцетна киселина. Сложете резени в този разтвор за 10-15 минути.
2. Изплакнете обилно в няколко порции дестилирана вода.
3. Сигнална прясно фероцианид разтвор в рамките на 10 минути.
4. Изплакнете в дестилирана вода.
5. Dokrasit ядро ​​ядрено багрило (стипца кармин, хематоксилин и др.).
6. Дехидратирайте, за да просвети, да сключва в балсама.

Резултати. Киселинни мукополизахариди боядисани синьо, ядрото - на червено.
Откриване на киселинни мукополизахариди алкин син на Stidmenu (брави - Carnoy, Buena, formalin- изливане парафин). Методът се основава на образуването на химични връзки между киселинните групи на киселинни мукополизахариди (гликозаминогликани) с алкаиново синьо. Използва се за идентифициране на муцини епител и съединителна тъкан.
Получаване на алкин син разтвор. 0.1 г багрило се разтваря в 100 мл 3% оцетна киселина и се филтрува.
Метод. 1. раздели 5-7 микрона дебелина депарафиниран и доведени до вода.

1. Алциансиньо петно ​​в svezheotfiltrovannom решение за 10-30 секунди.
2. Изплакнете в дестилирана вода.
3. Ерлих gemalaunom петно ​​в продължение на 5-10 минути.
4. Диференциране в 1% разтвор на алкохол.
5. Изплакнете с течаща вода в продължение на 10-20 минути.
6. Дехидратирайте, за да просвети, да сключва в балсама.

Резултати. мукополизахариди киселини синьо-зелено ядро ​​- тъмно синьо или тъмно червено.
Методи, основани на метахроматична. Metachromasia - е оцветяване на тъкани в резултат на химични реакции плат - боядисване Цвят оцветяват структури се различава значително от оригиналния цвят на багрилото.
Практически metachromasy под разбира явление се наблюдава при използване на тиазин групата на боите.
Идентификация metachromasia използване толуидиново синьо (замразени срези или фиксирана с формалин, парафинови блокчета). 1. 5-7 микрона дебели секции бяха доведени до вода.

1. Поставете в продължение на 4-6 часа в 0.5% воден разтвор на толуидиново синьо.
2. Изплакнете в дестилирана вода.
3. За хистохимическите цели изследват във водата веднага.

Резултати. Метахроматична вещество червено, розово (у-metachromasia) или пурпурно (р-metachromasia).
Тя се основава на метахроматна методите за получаване на трайни препарати.

Диференциацията на киселинни мукополизахариди

Киселина мукополизахариди, като правило, не дават положителна реакция Schick, но оцветени с алкаиново синьо и колоиден железен получаване метахроматична оцветяване.
Киселина мукополизахариди се разделят на несулфиран (хондроитин и хиалуронова киселина) и сулфатирани (хондроитин сулфат А, В, С, keratosulfat, хепарин, хепарин).
Лечението с хиалуронидаза. Някои депарафиниран, и се довежда до водни участъци (контрола) се инкубират при 37 ° С в хиалуронидаза разтвор на тестисите, получено в изотоничен разтвор на натриев хлорид (1 мг ензим на 1 мл) в продължение на 3 часа, а другите - в чиста изотоничен разтвор на натриев хлорид (на при същите условия). След това всички секции се оцветяват чрез един от методите за киселинни мукополизахариди. Липсата на цвят в секциите за контрол и присъствието на други доказателства, че тъканта е хиалуронова киселина и хондроитин сулфат С и А.
Ако вместо тестикуларна хиалуронидаза прилага бактериален (ензим действа мек), е възможно да се разграничат хиалуронова киселина.
Метилиране реакция. секции контрол Deperafinirovannye се поставят във вода, 0.1 N разтвор на солна киселина в абсолютен метанол, и се инкубират при 58 ° С в продължение на 2-3 часа. След това, заедно с останалите срезове, оцветени или толуидиново синьо или алкин. Липсата на цвят в секциите за контрол и присъствието на други показват, че в изследваните тъкани са сулфатирани мукополизахариди (метилиране доведе до тяхното desulfation).