Приложение 2 - криптоспоридиоза и ХИВ

Дебели пресни фекални петна се суши на въздуха за да прокара ауламин фенол разтвор, промива се с вода и бързо се оцветяват (5-10 минути) в разтвор на карболовата фуксин. След промиване с вода, суши на въздух и изследвани с помощта на флуоресцентен микроскоп (за предпочитане със система за потапяне).
Резултати: Cryptosporidium ооцисти имат вид на ярко флуоресциращи диск, се вижда ясно на тъмно червен фон.

IV. обогатяване методи: флотация и утаяване.

Както флотационни течности използват наситени разтвори на натриев хлорид или захароза, наситен разтвор на цинков сулфат (триста тридесет и едно гр NSO₄.7Н₂О разтваря в 1 литър питейна вода). Флотация се използва също за Бреза среда (смес от наситени разтвори на магнезиев сулфат и натриев тиосулфат и чешмяна вода в съотношение 3: 3: 1) смес Pavleseka (цинков хлорид - 220 г натриев хлорид - 210 гр, чешмяна вода-800 мл), и т.н. ,

1. флотация с центрофугиране.

Центрофугирането ускорява процеса на флотация на ооцистите, и също така позволява да се измие изпражнения, като по този начин свежда до минимум замърсяването на детрит или препарат мазнини. Когато изпиране техните изпражнения разрежда с вода, а не флотация течност, и се филтрува в центрофужна епруветка от 15 мл. Материалът на тест трябва да се центрофугира в продължение на 1-2 минути при 2-3 хиляди. Rev / мин и 3-4 мин при 1500 об / мин. След първата (отмиване) центрофугиране на супернатантата се отстранява, а останалият обем на седимент не трябва да надвишава 1 мл. Добави течност флотация тръба половината от обема си и се ресуспендират пелети в него чрез пипета с гумен балон или стъклена пръчка. След това се излива на флотация течността към горния край на тръбата и се центрофугира отново по същия режим са резултат ооцисти концентрат в филм повърхност течност. Материал от този филм за събиране на метални или стъклени капилярни примки, приложени към стъклото на плъзгача определи багрило смес Никифоров и подходящ метод, и след това подложени на микроскопия.

Видео: За да бъдем откровени за едно нещо: Първите признаци на заразяване с ХИВ

2. седиментация методи.

Обикновено се използва етер утаяване, който трябва да бъде 0.5-1.0 г изпражнения смесва с 10-12 мл изотоничен разтвор на натриев хлорид. Старателно разбъркана суспензия на щам през 2 слоя марля в центрофужна епруветка от 15 мл. Утайката се промива два пъти с физиологичен разтвор чрез центрофугиране, след това внимателно се ресуспендира в 10 мл 10% разтвор на формалин, се добавят 3 мл етер и внимателно предварително peremeshat- затворена запушалка епруветка. Получената смес се центрофугира в продължение на 2 минути при 1000. Rev / мин. Естер, повърхност отломки и изтичане формалин и останалите в долната част на тръбата, за да намазки утаяват и петна един от методите, описани по-рано.

В модифицирания метод, 0.5 мл етерни утаяване течни изпражнения смесва с 3 мл 10% разтвор на формалин и се разбърква до получаване на хомогенна суспензия. Добавя се 30 мл етил етер и внимателно се премества чрез разклащане, след това се добавят 15 мл 10% разтвор на формалин, разбърква се и се филтрува получената смес през тензух в центрофужна епруветка. Краят на пипетата с гумен балон внимателно (без да докосва стените на тръбите) под долните слоеве етер и детрит, да смуче долната колона на течност и се прехвърля в друга тръба. New тръба пълнител 10% формалин разтвор и се центрофугира в продължение на 10-15 минути. с 3000. об / мин (продължителността на центрофугиране е пропорционална на вискозитета на разтвора) от утайката за получаване на петна и ги цвят с един от конвенционалните методи.

V. Биоанализите в мишки

За да се постави биоанализ е необходимо да се хранят малки количества фекалии новородени или 2-5-дневни бели мишки. В присъствието на Cryptosporidium ооцисти в проби от изпражнения при мишки след 5-8 дни ще бъдат открити ооцисти. С откриването на мишките в по-ранен период (оптимално 3-7-ия ден) в хистологични препарати на червата (за предпочитане, в препарати илеума) ще бъдат идентифицирани ендогенно развитие етап Cryptosporidium, локализирани в граничната зона четка.

При формулирането на биоанализ животински възможно да се добавят антибиотици изпражнения хомогенат (пеницилин, стрептомицин, гентамицин), които инхибират придружаващи микрофлора, но нямат ефект върху инвазивността на Cryptosporidium ооцисти.

Брой на Cryptosporidium ооцисти брои използване Горяев камера, използвана в хематологичната практика. След инкубиране, което позволява изрязващият ооцисти, може по същия начин и се изчислява броят на спорозоити.

За количествени определяния могат да разчитат на общия брой на ооцисти в оцветяват кръвни намазки получени от определени количества от изпражненията (например, 0.2 д).

Видео: Plague Inc Evolved - # 2 - Смъртта идва от север

Под редакцията на проф Фролов VM
MD Peresadin NA, професор SN Fedchenko, помощник Бакланов AV

Видео: Не! - видео за безопасен секс (2)