Оцветяване на тъканта по метода на Ван Gieson, Малъри - на базата на хистологията

Оцветяването на съединителната тъкан и мускулната по метода на Van Gieson

Този метод има няколко предимства в сравнение с хематоксилин-еозин оцветяване, тъй като различните различни компоненти цветни тъкани. Когато се оцветяват от Van метод Gieson се използват две решения: а желязо хематоксилин Weigert (получаването виж по-долу.) И б), вместо на киселинна смес picrofucsin еозин. Колаген съединителната тъкан влакна след багренето picrofucsin имат ярко червен цвят, и мускула и еластичните влакна - кафеникаво червено или жълто-зелено. Iron хематоксилин Weigert оцветява ядрата на тъмно-кафяв или кафяво-черен цвят. Можете да оттенък ядро ​​и силен разтвор хематоксилин Boehmer (без диференциация).

Работещи решения

Хематоксилин Weigert приготвя непосредствено преди оцветяване чрез смесване на равни обеми от изходни разтвори Weigert (първи и втори) се съхраняват отделно.
Weigert разтвор произход: в 100 ml 96% алкохол се разтваря 1 грам gematoksilina- втори разтвор: 4 мл от 29% разтвор на желязо (3+) хлорид * кондензиран с 1 мл силна солна киселина се прибавя и 95 мл дестилирана вода.

* При липса на железен хлорид (3+) може да се използва 2-3% разтвор на железен стипца.

При смесване на втория разтвор се излива към първия разтвор не е равна, но малко по-малки количества, и след това втори разтвор се прибавя към смес на капки с пипета на равно количество с първия разтвор.
Чрез вариране на повърхностното напрежение на разтвора започва да се изкачи стените на (бутилка проба) кораб и се събира в капчици, които отново поток в течността. Този феномен показва правилната количественото съотношение на първия и втория разтвори Weigert в сместа и след това добавяне на втори разтвор да бъде спряно. Боя, ако се приготвят правилно, дълбок лилав цвят. Ако е кафяв, че има излишък от втория разтвор. Ядрото така боята няма да бъдат боядисани в черно, и кафяво.
Weigert решения самостоятелно могат да се съхраняват в продължение на години, смес от тях, не повече от 3-4 дни, така че е най-добре да се използват пресни решение.
Разтвор picrofucsin: за 100 ml наситен воден разтвор на пикринова киселина се прибавят 4.10 мл 1% воден разтвор на фуксин а.
Ако спешна нужда за получаване на много малко количество разтвор във флакона от филтрираната пеницилин излива в наситен разтвор на пикринова киселина (половината от балон) и към него се прибавя на капки 1% разтвор на киселина фуксин. В този случай, контролът може да служи като капка от сместа върху филтърната хартия, които трябва да имат цвят на прясна кръв.

оцветяване

1. От секции в дестилирана вода трансфер Weigert хематоксилин за 2-5 минути. Цветни сърца трябва да бъдат контролирани под микроскоп.
2. Изплакнете секции в дестилирана вода и се прехвърля в чешмяна вода в продължение на 10 минути (на водата трябва да се променя).
3. Сложете секции 1-2-3 мин (понякога Vi мин) picrofucsin.
4. Бързо (5-10s) секциите се промиват в дестилирана вода и ги държат здраво в 96% алкохол (може да се променя), в освети карболфуксин-толуен, толуен и затворени в Канада балсам. Резултат: колагеновите влакна на ярко червен цвят, а мускули и еластична - кафяво-жълт или жълто-зелен. Ядрото burokorichnevogo или кафяво-черно.

Характеристики на цветовете.

Изисква постоянно наблюдение под микроскоп. Ако ядрата придобиват кафяв, а не черен, е необходимо да се държи по-дългите участъци в хематоксилин или по-малко, тъй като picrofucsin picrofucsin е силно разграничаване действия срещу хематоксилин.
Ако влакната на съединителната тъкан оцветяват интензивно червено, след което следва по-дълъг изплакване picrofucsin филийки във вода, при което киселата фуксин разтваря. Ако, напротив, съединителната тъкан се боядисани бледо магента, трябва да бъде бързо промива филийки във вода или дори напълно да се изплакнат и незабавно прехвърлени на алкохоли.
Ако слабо оцветяване се получава с пикринова киселина (жлеза клетки на гладката мускулатура), е необходимо да се ускори свързването с алкохоли, тъй като те се възстанови от подготовка пикринова киселина. Когато боядисване препарат пикринова киселина е необходимо да се увеличи времето за престой на разреза в алкохол.
Значителен недостатък на този метод е, избелващи агенти, така че те не могат да се съхраняват за дълго време. Може да се използва с хематоксилин на Майер, Karatsu, Ерлих, но хематоксилин Weigert дава по-добър цвят.

метод оцветяване съединителна тъкан Mallory

Парафинови срези оцветени и tselloidinovye.
Метод и идентифицира различните елементи на съединителната тъкан, по-специално колаген и retikulinovye влакна. Тя може да се използва за оцветяване на мускулите и други тъкани.
Материал по-добре, определено в сублимират ключалки, особено в смес Zenker.
Ако материалът е фиксирана във формалин, преди да се оцветят секциите трябва да бъде поставен във флуидна Zenker за 15-30 минути. След няколко минути секции се потапят в алкохол разтвор на йод, освобождавайки секциите от живак дихлорид утайки. Секциите бяха поставени в 0.25% разтвор на натриев тиосулфат (Hyposulfite), за да се възстанови йод.

Работещи решения

Необходимо е да има три работен разтвор.
Водната киселина фуксин 0.1% разтвор.
Разтвор на фосфомолибденова киселина 1%.
Смес, състояща се от анилиново синьо оранжево G и оксалова киселина. За получаването на смес на багрилото от 0.5 г от анилиново синьо оранжево G 2 гр и 2 г оксалова киселина се разтварят в 100 мл дестилирана вода. Тази смес се загрява до кипене, охлажда се и се филтрува. Когато компонентите се разтварят, сместа става интензивно кафяв цвят с зеленикав оттенък. Разтвор подходящи за използване веднага след приготвянето. След дълго съхранение преди употреба разтвор трябва да се вари и се филтрира.

оцветяване

1. След освобождаването от парафинови срези дестилирана вода се прехвърля към разтвор на 0.1% фуксин киселина в продължение на 2-3 минути.
2. Бързо се промива в дестилирана вода в продължение на 1-2 минути.
3. За закрепване, киселинни фуксин оцветяване части се прехвърлят в 1% разтвор на фосфомолибденова киселина в 3-5 минути.
4. Бързо се изплаква с дестилирана вода.
5. Прехвърляне на секции в svezheprofiltrovannuyu смес анилиново синьо оранжево G и оксалова киселина в продължение на 1 минута (за да се избегне оцветяване).
6. Срезовете се промиват в дестилирана вода.
7. Обособени в 96% алкохол в продължение на 3-5 минути или повече, докато микроскоп се появяват сини боядисани колагенови влакна.
8. Преминава през абсолютен алкохол, ксилен, затворени в Канада балсам.

Резултати.

Колаген влакна и retikulinovye тъмносин слуз - сини, червени кръвни клетки - червено-оранжево, мускулните влакна - ярко оранжево хроматин - червено с жълтеникав оттенък, Невроглия и ганглийни клетки - червеникаво-лилаво, секреторни гранули - червено.