Приложение - криптоспоридиоза и ХИВ

Видео: Международният ден за борба с ХИВ инфекция и СПИН. Рязан 01.12.2014. Това е интересно.

I. бъдат изследвани контингенти:

1. Пациенти със синдром на дълготрайна диария.
2. Пациенти са инфекциозни чревни болници.
3. Пациенти с HIV инфекция с признаци на чревна дисфункция.
4. Лица, които са в контакт с пациентите да се възстановят от криптоспоридиоза рано (оздравяващи).

II. Тестовите материали:

1. изпражненията на пациентите.
2. повърня.
3. храчките и промивна течност (подозира дихателните криптоспоридиоза).

В изпражненията се събират в чиста, суха добре запечатани контейнери и транспортирани до лабораторията. Ооцисти в изпражненията се съхраняват в продължение на относително дълъг. Ако е предназначен дългосрочно съхранение материал, се използват консерванти (10% формалин течност Barbagallo, 2.5% разтвор на калиев бихромат). Консервант смесен с фекалиите в съотношение 2: 1 и се разбърква добре. Се съхранява в хладилник при + 4 ° С Ооцисти в 2,5% разтвор на калиев бихромат остават жизнеспособни през цялата година.

В симптоматични случаи на криптоспоридиоза в оцветени петна на фекалии намерено значителен брой ооцисти. .. Изследване на контактните лица и оздравяващи пациенти, т.е. с установена ниска концентрация на ооцисти в изпражненията, се използват техники за обогатяване - флотация и утаяване.

III. Подготовка и боядисване на намазки изпражнения:

На плъзгача малко количество изпражнения депозирани и равномерно тънкослойна намазка. Ако е необходимо, бучка изпражнения могат да добавят 1-2 капки физиологичен разтвор. В намазка се суши на въздух и се фиксира в Никифоров смес (смес от равни части от етер и етилов алкохол 96 ° С) в продължение на 10-15 минути, след това отново се суши на въздух и се оцветява, и след това се подлага микроскопия.

I. карбол фуксин оцветяване Ziehl-Nielsen:

Фиксиране на Pap бързо харчат 3-5 пъти над пламъка на горелката. Stain разтвор carbolfuchsin 5-20 минути. Състав на разтвора: основния фуксин - 2 грама, 96 ° етил spirt- 12 мл, фенол - 5 мл дестилирана вода - 100ml до (магента разтваря в алкохол на фенол-вода, след това се сливат заедно).

Изплакнете намазка чешмяна вода, обезцветени, 7% (5-10%) разтвор на сярна киселина в продължение на 20-60 секунди. промива се с вода и нюанс на 5 минути с 5% воден разтвор на зелен малахит в 10% етанол или 0.2% воден разтвор на метиленово синьо. Изплаква се с вода, внимателно се изсушава на въздух и изследва под микроскоп с потапяне.

Резултати. Cryptosporidium ооцисти са оцветени в различни нюанси на ярко червен цвят и имат формата на заоблени образувания до 5 микрона в диаметър. Вътре някои от ооцистите могат да бъдат изучавани удължени спорозоите. Свързани микрофлора е боядисан в зелени тонове.

Забележки: Червеният цвят може да се боядиса с капка вещества подобни на мазнини и мъниста детрит. Дори случайно сходство по размер, тези образувания могат лесно да бъдат разграничени от ооцисти на Cryptosporidium от липсата на отделна мембрана и някои структурирано съдържание вътре. В случай на съмнение, серийните петна трябва да рисуват различен метод. Ако е необходимо да се намали концентрацията на малахитово зелено (избран емпирично). Оцветяването Ziehl-Nielsen могат да бъдат направени без предварително фиксиране на намазки.

Този метод се счита за един от най-информативен и надежден за откриване на Cryptosporidium ооцисти.
Боята не избледнява в продължение на много месеци.

2. Оцветяване с Сафранинът от Kester.

Цитонамазка, суши на въздух, фиксирани в смес от Никифоров, суши се отново при стайна температура, за да се определи над пламъка на горелката. Сафранинът багрило разтвор в продължение на 5 минути. (Наситен воден разтвор Сафранинът - 2 части, 5.6% разтвор на КОН - 5 части). След измиване с вода в продължение на 10 секунди, за да се диференцират. в 0.1% разтвор на сярна киселина в разтвор багрило вода и бави при 5% малахитово зелено (см. по-горе) в продължение на 10-15 секунди. Изплаква се с вода, внимателно се изсушава на въздух и изследва под микроскоп с потапяне.
Резултати: Cryptosporidium ооцисти са боядисани в бледо розово и добре подчертани на зелен фон. Други микроорганизми не се оцветяват с шафранинов.
Забележка: Този метод се счита за един от най-точен тест за определяне на Cryptosporidium ооцисти, което позволява най-ясно се вижда вътрешното съдържание на ооцисти (sporozopty). Боядисване нестабилни лекарства бързо избледняват и не са подходящи за дългосрочно съхранение.

3. Оцветяването с лазурно-еозин от Романовски-Гимза.

Това широко метод кръв намазка оцветяване може да се използва успешно в ооцистите на идентификация kriptosporody. В някои случаи това е много информативна, тъй като с подходяща предварителна подготовка намазка боята прониква ооцисти и спорозоити цветовете.

Цитонамазка, фиксирана Никифоров сместа и внимателно се изсушава на въздух, prevesti бързо над пламъка на горелката (3-5 бързи движения). Багрило 10% разтвор на багрило от 10 до 35-40 минути. Изплаква основно с вода (за предпочитане под течаща вода), изсушава се във въздуха (това е възможно в струя студен въздух под сешоара) и се изследва под микроскоп със система за потапяне.

резултати: Cryptosporidium ооцисти са оцветени или слабо оцветени форма заоблени образувания до 5 микрона в диаметър. В някои от ооцистите могат да бъдат изучавани бледо синьо продълговати и леко извити органи (спорозоити) с червеникаво гранули вътре. Спорозоитите са разположени в периферията на ооцисти, оставяйки централната му част е празна.

Забележка. Идентификационните ооцисти трудно поради факта, че други чревни микроорганизми също се оцветяват с лазурно-еозин, и много по-интензивно ооцисти. В тази връзка е необходимо да се направят тънки петна, в която налагането на микрофлората не е "бягство" на последния от наблюдателя. Боядисани продукти не избледняват в продължение на много месеци, са подходящи за дългосрочно съхранение.

Видео: Хората на Казахстан е все още много малко познания за предаването на ХИВ