Оцветяване - микробиология с техниката на микробиологични изследвания

За оцветяване на бактериите трябва да има редица решения за боядисване, за предпочитане в специални колби с пипети, които носят гумени кутии. Боя с пипета се излива на лекарството, така че цялата намазка се покрива с него. Подготовката на боя е поставен на слайдовете на щанда. Такава стойка се поставя на чаша или фотографска тава (фиг. 14). Ако оцветяването е необходимо загряване, след това се използват специални пинсети да се плъзга (фиг. 15). При прекратяване на багрило оцветяване измиване водна струя или лекарство в съда се промива с вода. След приготвяне промиване се оставя в изправено положение, за сушене или сушени между листа филтърна хартия. Ако лекарството ще остане вода е обединена с потапяне масло, ще даде емулсия, която позволява добро зрение под микроскоп.
бои
Бои, използвани за бактериологични изследвания, принадлежат към групата на така наречените анилин. Но тъй като те се получават не само от анилин, но и поради други производни на въглищен катран. - бензол, толуол и други, че е по-правилно да ги наричаме бои на основата на въглища. тези цветове са разделени на основни и кисели. Термините "кисел" и "основния" мастило само определят афинитета на определена част на клетката. Основни багрила цапат ядро ​​добре и микроби. Киселина багрило петна микроби слабите оцветяване на тъканта са оцветени в цитоплазмата на клетките. Най-често се използват следните цветове: син метилен, thionine (синя боя), основен фуксин, еозин и шафранинов (червено мастило), bismarkbraun или vezuvin (кафяв цвят), metilgryun (зелена боя), metilviolet, тинтява (лилава боя). От тях само еозин - киселина боя. Той се използва за някои специални цели.
Всички тези мастила се продават под формата на аморфни или кристални прахове, и вече са подготвени за боядисване решения.
Получаване на разтвори за боядисване. Изходният материал за почти всички необходими работни бои са наситени алкохолни разтвори, които трябва да се съхраняват на склад и се съхраняват в колби с наземни запушалки. Наситените алкохолни разтвори се получава както следва: 10 г суха боя се излива в бутилката запушалка, излива се в 100 мл 96 ° алкохол (коригирано) и се оставя да престои в продължение на няколко дни, дневна разклащане на разтвора. От такива наситени разтвори получава pastvory алкохол-вода, подходяща за боядисване на микроби. Най-често се използва от следните решения.
Карболин пурпурно (червено Tsilya)
10 мл наситен алкохолен разтвор фуксин 100 мл 5% карболовата киселина
Единична магента
10 мл карбол фуксин 90 мл дестилирана вода
Алкална метиленово синьо, 30 мл наситен алкохолен разтвор сини 100 мл дестилирана вода, 1 мл 1% разтвор на алкален
Карболин тинтява виолетово 10 мл наситен алкохолен разтвор gentsiaivioleta 90 мл 5% карболовата киселина
gentsiaivioleta решения дават утаява в боядисване. Вместо това, можете да използвате gentsiaivioleta наситени алкохолни разтвори или metilvioleta kristalvioleta. разтвори карболови киселини могат да се 1% вместо 5%. Освен това, за оцветяване по Грам може да използва 0.25% воден metilvioleta kristalvioleta или без карболовата киселина. Разтвор на подпори и не се утаява.
По аналогия с синьото на тинтява разтвор виолетово се използва вместо парчета от филтърна хартия, предварително накиснати в алкохолен разтвор и след това се суши на боята. За тази цел, листа филтърна хартия се потапят за 1-2 минути в 1.2% разтвор на багрило в 96 ° алкохол, след което хартията се суши върху издигната въже или стъклени пръчки и нарязани на парчета 2X4 см. Тези документи се съхраняват в запушена буркани неопределено ,
Прости методи за оцветяване на микроби. В лабораторна техника използва прости и сложни методи за оцветяване микроби. Прост метод за живопис, наречена оцветяване подготовка на всеки един цвят. Такива методи включват фуксин оцветяване разреден алкален или метиленово синьо.
Оцветяване разрежда магента. В намазка пързалка подготовката и фиксиране на пламъка на горелката. След това се охлажда формулировка за 1-2 минути излива разреден фуксин. Боята се промива с вода и се суши формулировка.
Покритие алкален метиленово синьо (Loeffler). На клеветническа слайд се приготвя и да го фиксира върху огъня. В охлажда намазка излива метиленово синьо в продължение на 2-3 минути. Боята се промива с вода и се суши формулировка. Когато оцветени диференцирани ядрото и цитоплазмата, и следователно, оцветяване патологичен материал (гной, ексудат, и така нататък. D.) подходящо да се използва метилен синьо.
Сложните методи за оцветяване микроби. В методите на цветни сложни микроби върху една и съща лекарството засяга няколко багрила решения. Сложните методи се основават на физико-химична структура и афинитета на бактериални клетки за определени микробни бои. Тези техники оцветяване са важни в диференциацията на микроби. За сложни методи включват оцветяване по Грам, Ziehl - Nielsen, Neisseria, и т.н. ...
Боядисване на микроби по Грам оцветяване. Всички микробите в тяхната връзка с цвета на метода на Грам са разделени в две групи: а) грам-положителен или grampolozhitelnye- б) Грам-отрицателни или грам-отрицателни.
Различни свързани с Грам оцветяване зависи от разлики във физическата и химическата структура на самите бактерии. За оцветяване на Gram класически метод изисква следните разтвори:

1. Карболов тинтява виолетово;
2. разтвор на Lugol (йоден кристал 1 грам калиев йодид два грама и дестилирана вода 300 мл-йод и калиев йодид се смесват и се разтварят в 5 мл вода и след това се добавя останалата вода);
3. алкохол 96 °;
4. разрежда магента.

живопис техника грам. На фиксираната намазка поставя филтърна хартия, размера все още се правят цитонамазка. В този разтвор хартия тинтява виолетово се излива върху I-2 минути. Кондензиран мастило на хартия и без промиване с вода препарат, излива 1- две минути разтвор Lugol преди почерняване намазка. След това разтвор на Lugol се отцежда и 1 / 3-1 минута излива алкохол 96 ° (лекарството трябва поклащам). Промива се с вода и след това разредена червено багрило (1-2 минути). Кондензиран боя, промива се с вода, суши се и mikroskopiruyut.
Модифициран метод на Грам (А. син цвят). l.Ha фиксирана намазка насложени лента от филтърна хартия, импрегнирана с 1% разтвор на алкохол kristalvioleta или тинтява виолетово.

1. Се прилага към документа на 2-3 капки вода и оставете за 2 минути.
2. Хартия отстранява с форцепс и се излива разтвор Lugol за 1-2 минути.
3. Обезцветява с алкохол (10-30 секунди).
4. Освен фуксин оцветени с разредени (около 1-2 минути). _

Механизмът на оцветяване по Грам. РЕЗЮМЕ метод Грам се състои във факта, че боя gentsian- метил или kristalviolet има способността да се фиксира твърдо в бактериалната клетка. В този случай, при не се проявява влиянието на алкохол обезцветяване, че бактерията е оцветен в лилаво. Това означава, че той е грам положителен. Ако в клетка боя бактериална няма да бъде фиксирана, а след това под влиянието на алкохол микроби обезцветена и възприемат допълнителна боя - разреден магента. Микробите са боядисани в розово, т. Е. Те са грам-отрицателни (фиг. 16 вложка).
Оцветяване устойчиви киселина микроби. Методи за боядисване киселина бактерии въз основа на тяхната способност да бъдат боядисани много боядисване багрила разтвор при нагряване. В последващите действия на слаби киселини, те не са обезцветени. С такива киселинно третирана микроби могат да бъдат различени от други бактерии. Най-често срещаният цвят на Ziehl - Neelsen.
живопис техника. 1. В фиксираната намазка поставя парче филтърна хартия, върху която карболин магента, и препарат оцветени с нагряване до трикратно вид парата, след което боята се оставя за няколко минути и се оставя да се охлади препарат.

Фиг. 16. оцветяване по Грам ауреус и Vibrio.

1. Кондензиран багрило и се промива с вода препарат. 3- обезцветява с 5% воден разтвор на сярна киселина (10-30 секунди).
2. Измива с вода.
3. Промива се с чист алкохол 10-15 секунди.

6. Алкохолът се промива с вода.
7. Dokrashivayut Leffler синьо в продължение на 3-5 минути.

Обезцветяване на препарат може да произвежда 3% разтвор на солна киселина с алкохол. С този метод, киселина оцветяване Туберкулозните бацили оцветяват рубин червено и други кисели-бързо бактерии - синьо (виж фигура 88 в Притурката ..).
Киселина и алкохол устойчиви нарастък бацили, защото те са съставени от миколова киселина, реагира химически с карбол фуксин. Това съединение улавя боята в клетката на микроорганизма, и следователно няма да причини обезцветяване на пръчки.
Оцветяване на спора. Микробиологичното практика с помощта на няколко техники за оцветяване на спори (фиг. 17 вмъкване).

1. Метод Peshkova. На ръба на плъзгача като тънка намазка от бактериални култури, суши се на въздух и записване spirt- формалин или па пламъка на горелката на алкохол-етер. Фиксирана състав се излива Leffler синьо пламъка на горелката и се загрява до кипене в продължение на 15-20 секунди. Оставя се да се охлади препарат, промива се с вода и dokrashivayut 0.5% воден neytralrota 30-60 секунди. Боята се промива и се суши формулировка. Спорите се оцветяват в синьо или син цвят, вегетативни форми - в розово.
2. Методът на Hansen. Лекарството е фиксиран на горелка 5-7 пъти с фиксиран лекарство поставя парче филтърна хартия, върху която карболин магента, и пламъка на горелката се довежда до кипене. Лекарството се дава леко да се охлади, гарнирани карбол фуксин и се вари отново. Тогава doliv карболов магента, варено за трети път. Получаването се оставя да се охлади, промива се с вода, обезцветява се с 5% разтвор на сярна киселина в продължение на 20-30 секунди и dokrashivayut синьо в продължение на 3-5 минути. Спорите здраво към боя фуксин, - червено, вегетативен бактерии тялото обезцветят от излагане на сярна киселина, се оцветяват с метиленово синьо в синьо (виж вмъкнати на фигура 101, ..).

Фиг. 18. Капсули от пневмококи.


Фиг. 17. Спорове бацили.

Фиг. 19. Капсулите бактерии.

Покритие на капсули. Покритие на капсули управляват с помощта на конвенционални багрила, метиленово синьо или разреден магента, и най-добре в намазки на органи или тъкани течност (фиг. 18 вложка). В тези случаи, тялото на микроби и фон (телесни клетки) са оцветени в синьо или червено, капсулата се вижда като безцветно ръб обграждащ микроб.
метод Джинове. В оцветяване капсули в чиста култура от бактерии, използвани от Джинове.
живопис техника. 1. На предметно стъкло покритие капката мастило чертеж и се разрежда с равно количество вода.

1. Получената спад е малко количество агар или бульон култура от бактерии и смесен контур.
2. Edge смилане стъкло загриженост капки мастило и когато мастилото се простира на ръба на стъклото, да направи намазка, намазка на кръвта.
3. Намазка фиксирана живачен хлорид в концентриран разтвор на 1 минута или пламъка на горелката.
4. Промива се с вода (при фиксиране корозивни сублимиране).
5. Карболово фуксин оцветяват синьо или 5-10 минути.
6. Промива се с вода, суши се и mikroskopiruyut.

Капсулите не цапат, но чрез прилагане на спирала представена строго определена, бактериалната тялото боядисани и се намират в капсулата (фиг. 19, вложка).
Покритие метахроматна зърна (volutin) от Neisseria. трябва да бъдат подготвени два цвята: а) оцетна Blue Neisser, б) боя vezuvin или bismarkbraun.
Xin Neisseria състои от две решения:
разтвор А
Метиленово синьо 0.1 грама етил алкохол 2 мл ледена оцетна киселина, 5 мл дестилирана вода, 100 мл
разтвор Б
Kristalvioleta 1гр
Етилов алкохол (абсолютно) 10 мл дестилирана вода 300 мл
Разтворите А и В се смесват непосредствено преди оцветяване на 2: 1.
Paint vezuvin или bismarkbraun, получен чрез разтваряне на 1 г от прах в 300 мл кипяща дестилирана вода.
живопис техника. Фиксирана формулировка се прилага пилеене на пари Neisseria 0.5-1 минути, промива се с вода и боята е допълнително боядисани с разтвор vezuvina 1-3 минути. След тази подготовка, се промива с вода, суши се и mikroskopiruyut. В този процес, бактериите се оцветяват в светло кафяв цвят, и метахроматична зърно - в синьо (Фигура 83 в Притурката.).
В някои лаборатории, даден по класическия метод на Neisseria малко модифициран. Оцетна синьо се прилага в продължение на 4-5 минути, промива се с вода. След това лекарството се излива върху разтвор V2-1 минути Lugol, тя се излива и dokrashivayut vezuvinom за 1-V2 минути.
Живопис върху Романовски-Гимза. Paint Giemsa - Алкидни смес (органична боя, получена от метиленово синьо) и еозин метиленово синьо. Както в разтвора синьо, което оцветява клетъчната цитоплазма в син цвят и ядрата на клетките, зърнистост, слуз, капсули бактерии - в червено-лилав цвят.
Покритие Romanowsky-Гимза, е една от основните техники в изследването на морфологията на протозои, спирохети, а в рамките на разследването на кръвни клетки.
Метод на приложение. Към 10 мл дестилирана вода е неутрална или леко алкална реакция непосредствено преди оцветяване на лекарството се прибавят 10 капки боя и веднага се излива върху фиксиран лекарство (или лекарство се потапя в бехерова чаша с боя). След 1 час боята се излива, лекарството се промива с вода, суши се на въздух и тестван. Когато е поставена с формулировката на боята в инкубатор при 37 °, оцветяването се провежда бързо (30-40 минути). резултати в оцветяването зависи от свойствата на водата, така че трябва да се провери нейната реакция.
Оцветяване за рикетсиал Zdrodovsky. Фиксирана тънка намазка на пламъка на горелката. Оцветяване продукция разредена карболфуксин фуксин (10-15 магента капки на 10 мл редестилирана вода) в продължение на 5 минути. Рисуван препарат се промива с вода и след това се обезцветява в разтвор на органична или минерална киселина (0.5% лимонена киселина, 0,01% солна киселина) в продължение на 2-3 секунди. След това получаване се промива с вода и dokrashivayut 0.5% разтвор на метиленово синьо в продължение на 1.3 минути. При подготовката на син фон ще се вижда зачервена Rickettsia (фиг. 116 вложка).

Проучването на микроорганизми в живо състояние

Тъй като методите за установяване трудно камшичета и определянето на мобилността на бактерии служи за определяне на вида им, в ежедневието лабораторна практика за определяне на мобилността на употреба наблюдение на бактериите в една жива състояние - в натрошени или висящи капка.
Дребен слама. В средата на слайд покритие линия или капка пипета изпитвания материал. Този спад е покрита с покритие стъкло, обкова внимателно с пинсети, така че течността не се образува въздушни мехурчета. Правилно направи капка запълва пространството между капака и плъзгача, но течността не се издава извън ръба на стъклото на покритие. Ако лекарството е необходимо да се счита за дълго време, ръбовете на покривното предварително смазани с вазелин.
Висящи капка. Спад на изпитваното вещество се прилага към средата на предпазно стъкло. След това стъклото на капака се завърта бързо пада надолу и постави на стъклена плочка с вдлъбнатина ( "дупка") в центъра. Капка трябва да висят свободно във вдлъбнатината, без да докосва дъното и ръбове (фиг. 20). Ръбовете на вдлъбнатините на плъзгача да бъде предварително смазват с вазелин. Така, спадът е херметически затворен във влажна камера и защитени от изсушаване.
Определяне на мобилността в микроби, използвани в лабораторна диагностика на дизентерия, холера, коремен тиф и други заболявания.
В проучването на живите микроорганизми да се разграничава активно подвижни бактерии, което показва наличието на тяхната невидим камшичета, от пасивни молекулни (брауново) движение общи за всички суспендира в течни фини частици (частици, зърна, частици прах, микроби като лишени от камшичета и убити) ,

Фиг. 20. Висящи капка.

Изследвания в тъмното зрителното поле. Движението на бактерии и спирохети може да се наблюдава в микроскопа, което е различно от нормалното прилагане на светлата страна осветлението, при което на графичния образ на светлинен обект на тъмен фон. Принципът на тъмно поле се основава на факта, че светлинните лъчи се отклоняват встрани, попадащи плътни частици (като бактерии) и продължи през окото на наблюдателя, са представени от светло. Странични осветление в микроскопа може да се получи чрез замяната на конвенционалните осветител специален кондензатора с оцветяване в центъра. Такъв кондензатор притежава всички централни светлинните лъчи и предава само периферно. Нашият подход е както следва. Нанесено върху предметно стъкло и спад на изпитвания материал е покрита с покривно внимателно, за да се избегнат въздушните мехурчета. След това, кондензатора на повърхността се поставя капка вода или борово масло, и плъзгача с препарата се поставя на спад.

Видео: цитология-2: оцветители