Изолиране на Chlamydia - Chlamydia инфекция в акушерство и гинекология

Видео: Chlamydia симптоми при жените

Изолиране на Chlamydia в клетъчна култура

отделно за уретрата и шийката на матката - Специално проектирани подложки се използват за заснемане на материал. Материалът се поставя в епруветка с транспортна среда. Епруветките и средата не са предназначени за транспортиране на проби могат да бъдат токсични за клетките, и това може да доведе до фалшиви отрицателни резултати. Средата за транспорт може да се съхранява при стайна температура в продължение на един ден при 4 ° С месечен, при -20 ° С - 4 месеца.

Взети материал трябва да се поддържа при 4-6 ° С и в рамките на 24 часа до лабораторията проба подпрян лед. Изследването изисква запазването на живо хламидии, така че е важно да се съобразят с температурата на режима на материала доставка.

Използвани клетъчни линии McCoy, L-929, HeLa-920. пасирани клетъчни линии обикновено в рамките на 5-7 дни, 3-4 дни променящата се среда. Клетките се отстраняват от стъклото с разтвор на Versene или трипсин (0.02% и 0.25% съответно). клетъчна суспензия култивиране монослой на покривни получава 2,0x10 плътност и го въведе в плоски тръби, поставени в долната част на капака на приплъзване. Тя може да се използва за тази цел пластмасови микро панели с плоско дъно. В монослой се образува вертикални тръби при 37 ° С в продължение на 24 часа.

След отстраняване на средата на културата, култивираните клетки са заразени с инфекциозен материал от транспортната среда в обем от 0.5 мл и се центрофугира в центрофуга с хоризонтален ротор при 2500 об. / Мин в продължение на 1 час. След това инокулум се отстранява, тръбите или ямките правят поддръжка среда 199 с 5% говежди серум, или фетален говежди серум, 5% разтвор на глюкоза. 0.9-1.0 мкг / мл циклохексимид, и антибиотици (100 мкг / мл гентамицин, 100 мкг / мл ванкомицин и 25 мг / мл амфотерицин В).

След 48 часа след инфекция с покривни монослой се отстраняват от епруветките, суши се на въздуха и се фиксират в студен ацетон. По-нататъшни действия в пълно съответствие с лекарства за лечение на директна имунофлуоресценция.

Разгледайте продуктите в флуоресцентен микроскоп дава възможност да се види ярко зелено на хламидия вътреклетъчни microcolonies на оранжев фон цитоплазма.

Когато малко количество елементарни тела в материала терминът инкубация на заразените култури се увеличи до 3-5 дни в някои случаи произвеждат пасажи R. Е. заразяване пресни култури от течната фаза и първичните клетки култура. Диагностични лаборатории рядко използват пасажи поради прекомерно затягане да издаде отговор.

метод за разпределение С трахоматис в клетъчни култури е много чувствителен и специфичен, но това ви дава възможност да намерят осъществими патогени. Въпреки това, този метод е 10-15% от случаите може да даде фалшиво отрицателен отговор.

Резултатът от анализа е дадено в 5-7 дни. Изпълнения издаване отговор в културата диагноза: "метод културата подчертано С трахоматис", "метод култура С трахоматис не разпределя", "Проучване отново заради цитопатичен ефект",

Видео: хламидиоза при жените