Свойства на имунен отговор в зависимост от uonro - общо ниво на неспецифични реактивност

ГЛАВА 5
Приложен аспект UONRO в имунологични ЕКСПЕРИМЕНТИ
Модерна система за имунологични експерименти предвижда определена стандартизация на лабораторни животни на базата на техния генетичен хомогенност, микробиологичен статус, индикатори на развитие и растеж, общото здравословно състояние. Като правило, те са ограничени до изискванията biomodels използвани на етапа на подбора им и в хода на експеримента. Този подход очевидно не се вземат предвид редица ендогенно и екзогенно характер на факторите, които могат да имат значително влияние върху имунната реактивност на организма на експериментални животни, а оттам и на резултатите от експерименти. Първият е отделните физиологични характеристики, които определят неспецифично чувствителност и лабилност на имунната система на организма.

1. Особености на развитието на имунния отговор в зависимост от UONRO

Обобщаване на резултатите от научните изследвания (глави 3, 4), ние сме идентифицирали редица въпроси, които се нуждаят от допълнително експериментално изследване. В този случай, с цел на проучването е да се изследва връзката UONRO, хормонална активност на надбъбречната кора и неустойчивостта на имунологичните процеси при животните - производство на имунен серум.
Опитът на 20 зайци бяха избрани, 10 от които се характеризират с високо - средно UONRO (I група). Всички животни едновременно произведени кръвни проби и обем на урината за извършване на биохимични и имунологични изследвания. Експерименталните резултати са показани в Таблица 21.
Статистически анализ, проведен съгласно препоръките Montsevichyute-Eringene разкрива значимост на разликите между групите I и II по отношение на съдържанието 17, ACS

1. ACS фагоцитарната активност на левкоцитите, а също така показва ясна тенденция за разлика в индекси на адаптивни реакции.

Разпределение на някои имунологични параметри при зайци в зависимост от нивото на общата реактивност
тялото

След това животните се имунизират с антракс екзотоксин, стандартизиран за протеин в два цикъла. Първата имунизация се извършва интрадермално цикъл, той се състои от 4 инжекции с нарастващи дози (4, 5, 6 и 8 мг) в смес на антигена с пълен адювант на Freund, с една седмица интервал между инжекциите. След 30 дни на интравенозно reimmunizatsiya проведени в доза и множество инжекции, подобен на първия цикъл.
Антитяло производство способност при животни след имунизацията се оценява чрез нивото на серумни антитела в RIA.
По време на имунизация установено, че животни с високо общо реактивност на организма имат ниска устойчивост на възникване на реакция на стреса. Левкоцитни данни индекс от зайци при 30 минути след първата инжекция е намалена до 0,23 U., като същевременно се намалява общото ниво ACS в кръвната плазма с 62 мг / л, което, разбира се, показва развитието на остър стрес. Но в същото време ден по-късно всички зайци с високо ниво на общата реактивност на организма са настъпили нормализиране на адаптивните реакции в рамките на границите на тренировка. Трябва да се отбележи високата стабилност на имунологичните процеси в тези животни в периода на ваксинация, които се изразяват в активна засилване фагоцитната активност на левкоцити в имунизация (40 дни до 25 единици) и рязък спад в междуменструално период 21-ия ден е 6 единици. Инжекции максимални дози от антиген, последвано от продължителни реакции на стрес, на който управлява бързо да дръпне зайци, увеличаване mezhinektsionny период и намаляване на антигенен товара.
Зайци, имащи средна степен на общо реактивност различават стабилна устойчивост на стрес влияния време адаптиране реакции на обучение и активиране. Животните от тази група показват достатъчно нестабилност имунологични процеси (увеличение достигна 17 единици на 40 дни фагоцитната активност на левкоцити) и имат стабилни динамика с максимално увеличение на титрите на антителата в края на втория цикъл при максимално натоварване антигенен схема условие имунизация.
Животните с ниско ниво на общ реактивност на организма са изключително устойчиви на развитието на стрес, компонент на левкоцитите стабилно посочи реакция тренировка. В периода на ваксинация те се различават ниски нестабилност имунологични процеси, както е отразено в бавно повишаване на фагоцитната активност на левкоцити (в рамките на 40 дни до 14 единици). Зайците бяха характеризирани по инерция на процесите на антитялото и изисква дълго време за постигане на положителни резултати имунологични хиперимунизиране с максимални дози антиген във всички инжекции.
Изследвания възможно да се обобщи практическото аспект на животните за използване за производство на характеризират с нивото на общото реактивност (таблица. 22).
Получените данни показват наличието на тясна връзка между изследваната черта. Така заключения се потвърждават G.Selje [Alyakrinsky BS, Stepanova SI 1985] Относителните синтактични реакции, медиирани от глюкокортикоид и осигуряване състояние пасивна толерантност на организма към различни стресови фактори.

Характеристики на функционираща заек производство организъм, в зависимост от общата реактивност с хиперимунизиране

Като резултат от експериментите установи ясна връзка с фоновите стойности UONRO лабилност и интензитет имунологични процеси, като се гарантира образуването на специфичен имунен отговор на бактериални антигени. В същото време се установява, че индивиди с високо UONRO имат висока лабилност на имунологичните процеси и способността за производство интензивно антитяло в отговор на подходяща антигенна стимулация. С намаляване UONRO понижено имунологичен лабилност, повишена толерантност към антигенна стимулация [N. Tikhonov и сътр., 1992].
Целта на по-нататъшни изследвания е по-дълбоко проучване на физиологичните механизми за хомеостаза в образуването на имунния отговор към антигена както прокариотни и еукариотни произход, в зависимост от UONRO. Резолюция на тези въпроси ще позволи пълното използване на интегративен UONRO при решаване на различни приложения на имунологията.
В първия етап на изследвания на законите на развитие на производство на антитела се изследват с помощта на еукариотни антигени произход.
Експериментите се провеждат върху 30 бели мишки. По отношение UONRO те са били разделени в две противоположни групи - високи и ниски. Всяка от тези групи е допълнително еднакво разделени в две подгрупи. Както се използва антиген екстракт от острици, който е силен имуноген в мишки. Животните са имунизирани подкожно първите подгрупи минимална доза антиген (1.2 мг протеин на килограм телесно тегло 1) и мишките на втория подгрупи - увеличена доза антиген (2.4 мг протеин на 1 кг телесно тегло). След 7 дни, ние направихме събирането на титри на кръв и серум ELISA антитела определени.
Проучванията показват, зависимостта на продукцията на специфично антитяло от имунизация с антиген UONRO еукариотен произход (таблица. 23).
Таблица 23
Характеристики на антитяло към Passalurus ambiguus, в зависимост от дозата и UONRO антигенен натоварване в мишки

Забележка. AT титри са показани в обратна условия.
Статистическа обработка на експерименталните данни, методът изпълнен Montsevichyute-Eringene оставя да се установи надеждност предимства количества титри на антитела в животни с относително ниски индивиди UONRO, притежаващи високо ниво на общ реактивност на организма, в случай на повишено натоварване антигенен Passalurus ambiguus (р < 0,05). При иммунизации мышей пониженной дозой антигена определена обратная зависимость. Наиболее интенсивное антителообразование отмечалось у особей, характеризующихся высоким УОНРО.
Анализ на резултатите потвърждава връзката, предварително определени образци на прокариотни антигени. Това означава, че високата реактивност на имунологични видове с висок UONRO при представяне на антигенни ниско натоварване и способността на хората с ниско UONRO до пълен имунен отговор в случай на антигенно стимулиране.
Следните експерименти са проведени при зайци, като се използва като антиген BSA. Целта на експериментите е да се потвърди по-рано установените ползи от антитела в проби, имащи среден UONRO, в случая на оп
оптималност на специфични животински видове емпирично установена дози имуногенни бактериални антигени.
Рандомизирани в четири групи на лечение на зайци, 6 животни всяка. Тогава всички опитни животни са имунизирани подкожно в същото време BSA. В тази група на зайци I са влезли 4 мг протеин на 1 кг живо тегло, и животните, II, III, IV групи съответно 8 мг / кг, 12 мг / кг и 16 мг / кг. На 8-мия ден след имунизация направи кръвни проби и се определя на специфични титри ELISA антитела. Максималната Титърът на антителата, открити в животни Група II, и минимум при зайци Група IV (фиг. 16).

Фиг. 16. Зависимостта на производство на антитяло при зайци с доза от антиген натоварване (BSA)
Така емпирично установена оптималната доза на имуногенния BSA породата "съветски Shinshu" зайци.
След това целенасочено образува три групи от зайци, 6 животни всяка, предмет UONRO. Всички експериментални животни бяха имунизирани подкожно в същото време оптималната доза на BSA (8 мг / кг). На 8-мия ден след прилагането на антиген произведен кръв вземане на проби и се определя на специфични титри ELISA антитела (таблица. 24).

От антитела към BSA при зайци с различни нива на не-специфична реактивност на организма

Статистическият анализ на резултатите, образувани от Montsevichyute-Eringene разкрива значително предимство количества антитяло титри в животните със среден UONRO относително ниски UONRO индивиди (р < 0,05) и тенденцию к аналогичному преимуществу относительно индивидов с высоким УОНРО (р < 0,1). Это явилось несомненным подтверждением общебиологической закономерности развития индивидуального иммуногенеза, обусловленного УОНРО, верной для антигенов и прокариотной, и эукариотной природы.
Практическият резултат на идентифицираните модели използват прокариотни антигени различават ниска имуногенност е предложение за целенасочен избор на животни - производство на имунен серум с високо UONRO [Mulik AB и сътр., 1991].
Остава спешна проблем за получаване vysokotitrazhnyh серуми на антигените на еукариотен произход, които имат ниска имуногенност.
UONRO да се изследва ефекта върху образуването на специфичен имунен отговор към антиген, избрани спори Coccidioides immitis (слаб имуноген еукариотна характер). Проведени са изследвания при зайци, предварително определяне ги UONRO. Опитът отне 16 животни с противоположни стойности UONRO за образуване на 2 групи. Имунизацията се извършва според конвенционалния схема, в два цикъла, с непълен адювант на Freund. първи цикъл

Той включва 4 подкожната имунизации с интервал от 2 дни, единична доза 1.0 милиарда микрона антиген. Cl. След 7 дни след първия цикъл на втория цикъл на отработени 6 интравенозни инжекции с интервали от 3 дни с използване на същия антиген доза. 7 дни след имунизацията предизвиква събиране на кръв и серум антитяло титри, определени в RID. При положителен резултат в производството на антитела от производството на регламенти суроватка включва получаване на титър на антитяло 1: 8 и по-висока. Имунизация резултати са показани в Таблица 25.
Таблица 25
Свойства на антитяло при зайци с крайности UONRO антиген чрез имунизация на еукариотен произход (С immitis)

В резултат на проучвания са установили, че в 90% от зайци с висока UONRO може да се получи достатъчно серум титър на специфични антитела. В същото време в животни с ниска UONRO не разкриват пълноправен производителя. По време на статистическия анализ установихме, че стойността на титрите на антителата в зайци с високо ниво на общ реактивност е значително по-висока от индивиди с ниска UONRO (р < 0,001).
По този начин, когато слаб имуноген имунизация (малка абсолютна стойност на коефициента на обратна връзка), независимо от естеството на неговия произход, индивид с висока UONRO (подобрена имунологичен фактор чувствителност) има предимството, че е в състояние активно да immunogenesis.
В допълнение към получаване vysokotitrazhnyh имунни серуми по приложна имунология има и други актуални проблеми. Един от тях е натрупването на асцит при лабораторни животни в хибридомна технология. astsitoobrazovaniya успех зависи не само от качествените характеристики на хибридни клетки (хибридоми), но също така и за физиологичното състояние на животните реципиенти. Въз основа на това, ние хипотеза, че хората с високо UONRO (подобрена имунологично лабилност) са в състояние да по-активно astsitoobrazovaniyu и, очевидно, осигуряване на благоприятни условия за производството на моноклонални антитела.
За идентифициране на предвидените в зависимост проведени експериментални изследвания. Както се използва biomodels линейни мишки Balb / C и В8 хибридомен клон производство на моноклонални антитела към melioidosis на патоген. Животните се разделят на две опитни групи, различни крайности UONRO, 20 животни всяка. След това, докато всички експериментални мишки инжектират интраперитонеално с 3 х 10 хибридомни клетки в 0.5 мл 0.15 М разтвор на NaCI. Като грундиране агент, използван непълен адювант на Freund. Критерии сервират времето, количеството и качеството на получените асцити (таблица. 26).
Таблица 26
astsitoobrazovaniya води в Balb / C мишки според
от UONRO

Забележка: титли, показани в обратните ценности.
В резултат на експерименти, беше установено, че животните с ниско време UONRO за получаване на средната стойност за асцит от трета по-кратък, а обемът му с 40% по-висока, отколкото в мишки, които се различават високо UONRO. В този статистическа обработка, извършена от Montsevichyute-Eringene възможно идентифицирането значителни излишните количества титри на антитела в групата от животни с високо UONRO TIFM в реакцията (р < 0,001), так и в реакции НМФА (р < 0,002).
По този начин, тя трябва да се счита за целесъобразно в хибридомна технология за получаване на асцит от животните, които се използват моноклонални антитела с висок UONRO.
Отделен проблем е оценката на заявената имунология специфична активност на препаратите на ваксината да bioprobnyh животни.
Изследване на специфична активност на получаването на ваксината включва определяне тяхната имуногенност големите титри на антитела откриваем, когато имунизация на животни, както и защитен, определена от оцеляването на ваксинираните животни при последваща инфекция на тест-култура на вирулентен щам съответния патоген. Проектиран за доза на заразяване на тест-култури трябва да спазват стриктно на LD50, а в някои случаи - МЛД. Цел определяне на летални дози от специфични патогени, свързани с някои трудности поради индивидуалните характеристики на bioprobnyh животни. Освен това, чувствителността на индивидите, използвани в предварителни експерименти за определяне на летални дози трябва строго съответства на чувствителност на индивидите, използвани в състава контрол на ваксини. Като се има предвид наличието на известно отношение на отделни животни bioprobnyh устойчивост на бактериална инфекция на UONRO на стойност следващите бяха извършени разследвания.
Експериментите са проведени на 60 златни хамстери. UONRO големите животни са разделени на 3 експериментални групи от по 20 животни всяка. Освен това, всяка група бяха произволно разделени в 4 подгрупи. След това, в същото време, IP, произведени инфекция на хамстери причинител на сап. В същото време животните първите подгрупи от всяка група
Н Н влезли средно по 160 микрона. kl.- втори подгрупи - 80 микрона. kl.- трети - 30 микрона. kl.- Четвърто - 10 микрона. Cl. В бъдеще всеки ден да се направи сметка на умрели животни.
Изследванията бяха определени някои характеристики оцеляване златни хамстери в зависимост от размера и дозата UONRO инфекция. Първата подгрупа, убива всички животни (8LD50 доза инфекция). продължителност на живота на хората с високо UONRO (I) група беше 7.0 ± 0.0 дни. Животните имат среден UONRO (II група), процентът е на 6.4 ± 0.6 дни. И при хора с ниско продължителност на живота UONRO е 4,8 ± 0,2 дни (фиг. 17).

Фиг. 17. Динамика на златен хамстери смърт в зависимост от общия неспецифична реактивност при заразяване на Pseudomonas mallei доза 8LD50
Смъртта на животните в втората подгрупа от група I се наблюдава при 60%, и в други подгрупи на втората и третата групи - 100%. Третата подгрупа първата и третата групи падна до 60% и в третата подгрупа от втората група се убиват 80% от хамстери. Четвърти подгрупи смърт се наблюдава предимно в животни от първата група, и се определя на 40%, докато при втората и третата групи намаля до 20% от лицата, (фиг. 18).

Фиг. 18. Оцеляване на златни хамстери зависимост UONRO когато заразени с различни дози от Pseudomonas mallei
По този начин, беше установено, че високи дози сап патогенна инфекция предимно хора умират, характеризиращ UONRO средно и ниско, и смъртта им, отбелязани по-кратко време. В същото време индивиди се характеризират с високо UONRO, са по-устойчиви на високи дози от инфекция. При инфекция с ниски дози причинителят на сап предимно животни се убиват с високо UONRO.
Получените резултати позволяват да се препоръча запазване на стойността избор UONRO bioprobnyh животни, използвани за опити за бактериална инфекция при определяне на вирулентност на култури.
Следващата фаза на проучването е посветена на изследването на влиянието на UONRO точността и обективността на определяне на специфичната активност на ваксините от най защитния ефект на инфекция на имунните животни.
Работата се извършва от 150 бели мишки, UONRO съвпадащи и разпределени в три групи. Първата група се състои от хора с високо UONRO, на второ място - със средно, а в третата

1. ниска. Животните от всяка група, избрана произволно разделени в три допълнителен пилотен (10 животни) и четири контрол (5 животни) подгрупа. Тогава подгрупи опитни мишки са имунизирани подкожно в същото време чума жива ваксина в доза от 30 хиляди. Н. Cl. След 20 дни те определят титрите на специфични серумни антитела чрез ELISA. Средно аритметичният титри в първата група са 1: 440, във втората група - 1: 725, а в третата група
2. 1: 606, което потвърждава оптимална стойност антигенен товара. На следващия ден, произведени едновременно инфекция всички опитни животни с вирулентен Y. Pestis (J. Pestis, щам - 231). Дозите заразени мишки четири контролни подгрупи на всяка група е с 1 х 102 и 1 х 103 и 1 х 104, 1 х 105 микрона. клетки и експериментални животни три подгрупи във всяка група. - 1 х 103, 1 х 104, 1 х 105 микрона. Cl. След инфекция, гледане на интензивността на смъртни случаи на животни.

В резултат на това беше установено, че подгрупите за управление (интактни животни) остава същата тенденция както при експериментите със златни хамстери, а именно при максималната
доза инфекция (1 х 105) падна всички мишки, но средната продължителност на живота на първата група от животни беше 3.4 ± 0.30 дни, втората група - 3.0 ± 0.00 дни, и третата група - 2,6 ± 0 на 30 дни. Когато предизвикателство минималната доза (1 х 102) се регистрира най-ниските живот мъртви лица в първата група - 3,6 ± 0,80 дни, докато продължителността на живота на животните от втората и третата групи, съответно, е равна на 5.3 + 1.36 и 7,0 + 1,44 ден (Таблица. 27).
Таблица 27
Продължителността на живота на бял мишките, когато са заразени с различни дози от свински патоген, в зависимост от големината UONRO

Забележка. За контролната група условно приетата животни с високо UONRO.
Оцеляване на мишки получават подгрупи е в пряка зависимост от големината на специфични титри на антитела и е на достатъчно високо равнище в секунда животното (70%) и трети (60%) групи (фиг. 19).

Фиг. 19. Зависимостта на оцеляването на UONRO бели мишки след имунизация с предизвикателство с различни дози свински патоген Статистическият анализ на резултатите се извършва с помощта на т-тест на Student показва тенденция за преференциално унищожаване bioprobnyh животни от първата група по отношение на втория образци (р <0,1) и третьей (р < 0,25) групп при контрольном заражении.
Отделно от тези проучвания на подобни експерименти схема бяха проведени на 54 морски свинчета. Животните се третират предварително с UONRO разделени на три групи от 18 лица. Всяка група се рандомизирани еднакво разпределена в три подгрупи (един за контрол и две експериментални). Zhi-
votnyh опит двете подгрупи бяха имунизирани подкожно язвата жива ваксина при доза от 500 микрона. Cl. След 20 дни, те се кръв и РНА определят титри на серумни специфични антитела. Средните аритметични стойности на титрите на антителата в първата група, равно на 1: 108, във втората - 1: 92, а третият - 1: 233. На ден 21 всички морски свинчета експериментални и контролни подгрупи едновременно инфектирани с вирулентен Y. Pestis (J . Pestis - щам 231). Дозата за контрол на инфекция животни подгрупи е 1 х 104 микрона. т., както и опитни подгрупи от всяка група

1. 1 х 106 и 1 х 107 микрона. Cl.

Експерименталните резултати потвърждават наличието на предварително установени в зависимост живот заразени свински патогени интактни животни в доза от DCL, величината UONRO (таблица. 28).
Таблица 28
Особености bioprobnyh оцеляване на животни в зависимост от UONRO при определяне на специфичната активност на жива ваксина на чума

Бележки.
* АТ титри се определят чрез ELISA. ** AT титри бяха определени в град.
Морските свинчета първата група са живели средно 8,8 1.17 дни, втората група - 7.5 + 0.28 дни, а третият - 3 + 0.56 дни. Оцеляването на експериментални (имунни) подгрупи зависи от величината на специфични титри на антитела след имунизация. Максималната оцеляването се наблюдава в животни от третата група (67% в доза от 1 х 106 и 33% при доза от 1 х 107 микрона. Cl.). Минимална оцеляване се наблюдава в животни от втората група (33% в доза от 1 х 106 и 17% при доза от 1 х 107 микрона. Cl.).
За да се потвърди разкритите законите допълнително извършва изследвания върху бели мишки, като се използва химически туларемия ваксина за имунизация.
Общо 48 животни опит избран, които след това бяха разделени в три групи въз основа UONRO (16 животни). Всяка група е допълнително рандомизирани еднакво разпределени в експериментални и контролни подгрупи. Животните получават подгрупи едновременно подкожно туларемия ваксина химически при доза от 100 микрограма. След 20 дни, те се кръв и се определя посредством ELISA нива серум антитела. Средната стойност на титрите на антителата в групи е както следва: животните от първата група - 1: 400, а вторият - 1: 3200 и третата група - 1: 8133. На 21-ия ден от животински експериментални и контролни подгрупи едновременно инфектирани с вирулентен щам на туларемия в доза 5 х 103 микрона. Cl. (Приблизително 5 LD50).
Както е разкрито зависимост е доказано по време на експеримента. По този начин, на живота на контролните животни подгрупи е 8.7 + 1.30 дни в първата група, втората група - 8.5 ± 1.26 и в третата група - 8,2 + 1,15 дни. Оцеляване на мишки беше бяло в пряка зависимост от големината на специфични титри на антителата в тест подгрупи (фиг. 20).

Фиг. 20. Динамика ноцицептивен реактивност при зайци съгласно UONRO време хиперимунизиране със средна антигенен товар (Пс. Pseudomallei)
В първата група се понижи до 75% от индивидите от втората група - 43% и в третата група - 17% от животните. Статистическият анализ на резултатите от предизвикателството животни от експериментални подгрупи образувани чрез тест т-Студентски показаха значително (р < 0,05) увеличение их выживаемости в третьей группе по сравнению с выживаемостью животных первой группы (табл. 29).

Информацията имунната оцеляване бели мишки в зависимост от патоген по време на инфекция UONRO туларемия

Бележки.

1. За контролна група животни получават пробация ниско UONRO.
2. Титрите на антителата са представени в обратни стойности.

Така, обобщавайки резултатите от експерименти, целящи идентифициране на връзка UONRO с модели на оцеляване след животни инфекция вирулентни патогени чума, туларемия, и също функции осигуряващи специфичен орган защита, трябва да се отбележи, че индивиди с високо UONRO имат намалена устойчивост на ниско и повишена устойчивост на високи дози от бактериално замърсяване. Лица, характеризиращи се с ниска UONRO, най-устойчиви на ниски и по-малко на високи дози от микробен експозиция. Животни със средно UONRO са междинни в чувствителността към високи и ниски дози до инфекция. След имунизация, зависимостта на оцеляване biomodels UONRO време на инфекция поради особеностите на антитяло. производство на антитела, от своя страна, също се намират в определена зависимост от UONRO имунизирани животни.