Получаване олющени продукти - основа на хистология

Видео: микробиология. Получаване временни препарати (Е. Zvonaryova)

Видео: Bioefekts: микробиологични препарати за п / ст

В тези случаи, когато е необходимо да се изследва микроскопски структурата на обекта с мъгляв структура (серозен и менингите, съединителната мембрани и т. Д), получен интегрални (общо) препарати. За да се тества този филм се изрязва част и да се избегне набръчкване преди фиксиране убождане в разширено състояние на восък (или корк) база (вж. Стр 153).
След завършване на фиксиране материал се обработва по обичаен начин: фиксатор промива, боядисани, обезводнени, и вградени в осветяване съответната среда.

Ин виво (жизненоважни) оцветители тъкани

Описано в предишните раздели, преработващи методи материал за микроскопско изследване на органи и тъкани имат голям недостатък: изследователят винаги е статично състояние на обекта, записани по време на или след прекратяване на жизнените процеси. Естествено биолози желаят да бъдат въоръжени с техники, които ви позволяват да се наблюдава на живо органи и тъкани. Тази възможност се отваря с въведение в практиката на методите на жизнено оцветяване на изпитвания обект.
Основни изисквания за supravital багрила: минимална токсичност и селективен оцветяване на отделните структурни елементи на клетки и тъкани.
Знаейки, на начина на разпределение на тъканите на различни бои в нормалното функциониране на организма, може да се определи различна деформация се среща при
тези или други патологични състояния. Значително внимание е предвидено жизненоважни багрила в ембриологични изследвания, изучаване на развитие, тъй като е възможно да се проведе успешно проследяване на движението на оцветените клетки. Горното напълно се прилага за изследване на тъканна култура (отглеждане на хранителни медийни парчета специални органи и тъкани).
Както конвенционални хистологични багрила, всички багрила за жизнено оцветяване са разделени на основни, киселинни и неутрални.
Основни багрила се възприемат от почти всички клетки, но е особено добри клетки и структурите, богати на липиди. Именно този последен имот осигурява добра жизнена оцветяване с основни бои на нервната тъкан.
Киселинни багрила боядисване само определени видове клетки и предимно клетките на ретикулоендотелната система, с висока фагоцитната активност. Тези клетки играят важна роля в защитна реакция на организма. Тяхната способност да се натрупват частици в багрила виво киселина прави широката употреба на жизнено оцветяване да се провери тяхната функционално състояние. Такива багрила включват трипан синьо мастило, литиев кармин.
Има различни методи за използване на жизнените багрила. Близо до лабораторни животни оцветяване разтвори се прилага чрез интравенозно, интраперитонеално или подкожно инжектиране, при което скоростта на оцветяване зависи от начина на приложение (максимум - при интравенозна, най-ниската - подкожно). Жаба багрило се прилага в гръбначния лимфната торбата или коремната вена. Цвят малки водни животни произвеждат разкрасяване на водата в аквариума.
Използва се като метод за въвеждане на боя през устата, смесване в храната си.
Обикновено багрила се разтварят в дестилирана вода или изотоничен разтвор на натриев хлорид. Въпреки това, най-идеален разтворител е кръвния серум на съответното животно, осигурява по-добро усвояване на багрилото. За да се получи такъв разтвор се приготвя при стерилни условия 1% разтвор на съответния багрило серум, тя се центрофугира (3,000-3,500 об / мин) и супернатантата се аспирира с пипета.
Усвояване жизнено техника оцветяване е най-удобно в процеса на багрене бяло съединителната тъкан на плъхове (или мишки) трипан синьо.
Приготвяне на разтвора. Разтваря се 1 г трипаново синьо в 100 мл изотоничен разтвор на натрий (или дестилирана вода) хлорид. Пригодността на решението, когато се съхранява на хладно място в продължение на 3-4 седмици. Преди употреба разтвор багрило се филтрува стерилизирано (чрез кипене за 10-15 минути) и се оставя да се охлади до 25-35 ° С Едновременно dvuhgrammovy стерилизира спринцовка и игла.
Подкожна инжекция. Помощник улавя форцепс кожата експериментален плъх в задната част и от друга страна е на животното до върха на опашката и се простира назад към плота на масата. В опита набиране разтвор багрило спринцовка (размер на 0.5 мл за 20 г телесно тегло) свобода издърпва кожата на гърба (или върху страничната повърхност на тялото на животно) и чрез залепване на иглата в кожата, влиза в боята. 
Въведение интраперитонеално. Асистентът отнема плъхове, както и в предишния експеримент, но той дърпа вертикално с главата надолу. В тази ситуация има движещо се тяло на коремната кухина на диафрагмата, което го прави лесно да се проникне в коремната кухина, без да вредят вътрешностите. Иглата е поставена в лявата долна половина на коремната стена под остър ъгъл (надолу). Методът по-бързо и по-лесно от завързване на крайниците в легнало положение. Концентрацията и количеството на багрило е същият, както и когато се прилага подкожно.
Интравенозното приложение. Това може да се направи в югуларната или опашната вена, в специална машина корема на плъх предварително вързани нагоре. Количеството на багрилото е по-малко от два пъти в сравнение с предходните два метода, концентрацията е същото. При успешно единична интравенозна инжекция добро оцветяване настъпва в рамките на 24 часа, докато вътре в перитонеалната -. 48 часа Подкожно прилагане обикновено се повтаря няколко пъти, след 3-4 дни. Offensive обща оцветяване лесно определени от синьо в лицето и лигавиците на очите ириса. Общо посиняване на кожата идва по-късно.
Животните се умъртвяват един от приетите начини (обезглавяване, етер или хлороформ), откриването и вземат произвеждат да бъдат изследвани органи и тъкани.
Фиксиране. Фиксиране депозиран в тъканите трипаново синьо най-добре се случва, когато се прилагат сложни застопоряващи -. Buena Shtiva т.н. Въпреки това, ако липсва, могат да се използват и формалин (165).. Следва да се има предвид, че нежните пелети обезцветени и боята разпространява в други структури. Пробни препарати могат да бъдат направени от парчета, получени по замразяване микротом. Обикновено материалът се излива в парафин, се получават участъци от 5-7 mm и се оцветяват дебелина :. При използване на трипаново синьо (или труп) - кармин или неутрално червено, когато се използва литиев кармин - метилен синьо и т.н. След това се дехидратира, осветяване и вградени в балсам.