Получаване и оцветяване на кръв намазка за броя на левкоцитите - основа на хистология

За морфологичен анализ на кръвните клетки и левкоцитите броене кръв намазка се получава. Правилно направено и добре оцветени намазка е необходимо условие за получаване на надеждни резултати в изследването на морфологичните характеристики на кръвните клетки и левкоцитите преброяване. Кръв намазка трябва да отговаря на следните изисквания: 1) започва на 1 см от началото и в края на плъзгача на разстояние 2-3 cm от своя противоположен край, общата дължина на хода трябва да обхваща 1 / 2-3 / 4 stekla- 2) имат еднаква дебелина, отколкото вълнообразни, добра намазка дебел само в началото и след това постепенно изтънява края на пистата ( "четки виж") - 3) кръв слой не трябва да достигат краищата на стъклото, между него и ръба на стъклото трябва винаги да е няколко милиметра пространство.
Ударите над 3/4 от дължината на слайда, са много дебели. Те са дебел слой на червени кръвни клетки, се притискат един срещу друг и образуват монети колони, които предотвратяват изследователи смятат тяхната морфология. Ударите по-кратък Vi слайд твърде тънки: бели кръвни клетки са много редки и са деформирани. Ако няма свободен намазка ръба на плъзгача (което се случва, когато голям диаметър смилане стъкло), големите клетки се премества в края на хода, което води до неравномерно разпределени в него.
вълнова като разпределението на намазка кръвни клетки също грешни - дебелина секции съдържат повече лимфоцити, тънки - повече моноцити и сегментирани клетки.
подготовка Техника намазка. Слайдовете, които ще направят кръвни петна, трябва да са добре обезмаслени и измити. За тази цел, те се поставят в разтвор на калиев бихромат (смес K2Sg2O7 + силен H 2SO 4) в продължение на 24 часа (с Chrompick трябва да се работи внимателно, тъй като може да пръска от изгаряне дрехи, чорапи). След това стъклото се промива с течаща вода в продължение на 24 часа, подсуши и се поставя в стъкленица със смес от етер spirt-. те се сушат преди употреба. До капка кръв докосна слайда, така че да не докосва с пръст. Капка кръв върху стъклото преминава. За да намазка е стойността на 1 / 2-3 / 4 на плъзгача, диаметър на капчиците трябва да бъде 2-5 мм. предметното стъкло на взето в лявата ръка палеца, показалецът и средният пръст, така че капка кръв е на върха. Нарежете стъкло, което ще направи ход, хвърля под ъгъл от 30-45 ° на разстояние 1-2 мм в предната част на спад, държейки палеца и показалеца на дясната си ръка. Cut стъкло се плъзна назад, така че да докосна една капка капка кръв и се разпространява в ъгъла между земята и слайда (движение назад също помага за отстраняване на излишната кръв, ако намалението е твърде голям). След това бързо движение напред на ръката направи намазка. Необходимо е, че при изготвянето на клеветническа палеца и показалеца на дясната си ръка се плъзна по ръба на пързалката и да се създаде необходимата подкрепа за налагането на равномерен слой от кръв. Cut стъкло трябва да е по-тесен от целта да се плъзга ръбове са били свободни от инсулт.
Ако земята стъклото е същата ширина като на обекта, ъглите Отрязаха в приземния стъклото съкращаване 1-2 мм. Cut стъкло може да се замени с капак.
Получаване на добра намазка на кръвта, въпреки че не е трудно, изисква определена умения. Трябва да се помни, че тя не е от варени удар води до сериозни грешки в резултатите от научните изследвания. Качеството на намазка е до известна степен "сертификат" работи в лаборатория.
Оцветяването кръвни натривки. Получава се по този начин се суши кръвни петна и след това се фиксират с метанол (3-5 минути) и абсолютен етанол (100%) (10-15 минути) или ацетон (5 мин). Най-добрите резултати са все още фиксиращи петна метилов алкохол *. фиксиране флуид денатуриран клетъчни протеини при запазване живота си структура и фиксирани петна върху стъклени слайдове. Нефиксирани намазки лесно отмиват.

* Имайте предвид, че метанол е мощен отрова и ацетон запалим и експлозивен течност, поради което те не могат да напуснат работното място (преди и след употреба), ястия да бъдат ясно обозначени и се съхраняват в разтвора трябва да бъде безопасна.

Видео: кръвни клетки: червени кръвни клетки, бели кръвни клетки (Nauchfilm, образователни видео на СССР)

В определяне течността се излива в достатъчно количество за стъкло или стъкло с намазки се потапят в буркан на фиксатор. След фиксиране и сушене петна започват да им оцветяване. метод Романовски-Giemsa обикновено се използва. В лаборатории, винаги готов разтвор се разрежда багрило. Romanowsky-Giemsa багрило се състои от алкална (лазур II) и киселина (еозин) части. Azure II петно ​​на клетъчната структура, в светло синьо и еозин да rozovokrasnogo. Алкалните части от клетките се свързват и се оцветяват с кисели багрила и киселина - алкална.
Работа багрило разтвор се получава чрез разреждане на крайния разтвор дестилирана вода (1-2 капки мастило за 1 мл дестилирана вода). За добро намазка оцветяване боя качество вещество, вода и реакционната температура. Важно е дестилирана вода, в която се разтваря багрило, имаше неутрална реакция. Ако реакцията е кисела, действието на слабо багрилни компоненти алкални бели кръвни клетки се оцветяват слабо и лекарството става червена. Ако водата е алкална, отслабване на ефекта на елемент киселинна багрило, левкоцити се оцветяват твърде интензивни и лекарството е синьо. Реакцията се проверява чрез проба хематоксилин вода. В 4-5 мл вода се изхвърля пелети хематоксилин. Ако реакционната вода е tselochnuyu след това се оцветява по-рано от 3 минути. Ако се наблюдава петното след 5 минути, или това не се случи, след това водата е кисела. Ако водата е боядисан след 1-4 минути в розово-лилав цвят, тя е неутрална и е използваем. Когато се добавя на капки киселата вода за 1% разтвор на натриев карбонат до характеристиката на хематоксилин проба не стане неутрален вода. Когато се прибавя на капки 1% разтвор на оцетна киселина алкална реакция. За да се оцени правилно резултатите от пробата, чаша вода трябва да се постави върху лист бяла хартия.
оцветители намазки, получени чрез метод Romanowsky-Giemsa, както следва. Преди боядисване, първо трябва да се провери качеството на бои, цвят и гледане на няколко цикъла, за да настроите времето за най-добро оцветяване. Работа багрило разтвор се приготвя непосредствено преди боядисване. Лекарството се поставя надолу удар две стъклени (дървени) пръчки, поставен върху дъното на петриеви панички. Изсипете боя в процес на подготовка. Мръсна 20-40 минути. Тогава намазка се промива с течаща вода, суши се и mikroskopiruyut.
Когато оцветени кръвни намазки на метод Романовски-Giemsa, червените кръвни клетки са боядисани в бледо розово, клетъчните ядра - в синьо-лилаво гранули от еозинофили - в ярко червени, базофили - в синьо, цитоплазмата на лимфоцити и моноцити - синьо.

Видео: haemoscanning -"живея" капка кръв върху предметно TS