Leptospira - микробиология с техниката на микробиологични изследвания

Leptospira са причинители на остри заразни заболявания - лептоспироза, които инфектират човек, гризачи, едър рогат добитък, овце, свине, кучета и други животни.
За първи път патогенен Leptospira са били открити през 1914 г. от японски изследователи Inada и Идо, които ги изолира от органите на морско свинче, замърсени с кръв на пациенти с инфекциозни жълтеница. Тези спирохети са наречени от тях Spirochaeta icterohaemorrhagiae.
През 1928 г., SA Тарасов изолира патоген вода треска Leptospira grippotyphosa. Това име е дадено поради Leptospira някои клинични прилики вода треска с грип и отчасти с коремен тиф заболяване.
Две форми на лептоспироза: жълтеница инфекциозен или заболяване Weyl Василева (иктеричен лептоспироза - патоген L. icterohaemorrhagiae) и anicteric лептоспироза (воден треска, косене, треска Far и др.), Които са причинени от различни Leptospira grippotyphosa L., L. Батавия , L. canicola, L. DBA и сътр.
Морфология и багрилни свойства. Според морфологичните и културни характеристики на всички Leptospira подобни. Leptospira се характеризират с изключително малки множество къдри. Leptospira Дължината са 6-9 микрона и дебелина от 0,25 микрона. В центъра те са малко по-дебела и се протегна към краищата. Последно край корем сгъсти (фиг. 108). Leptospira притежават активна мобилност. Те съдържат в тялото им е много малък и затова е трудно да се нуклеопротеиновото боядисани (Романовски розово, когато serebrenii- в кафяво или черно). Освен това, тези методи на оцветяване така променят структурата на Leptospira които разпознават тях става изключително трудно. Поради това, научните изследвания в областта на оглед темпото на (в живото състояние) метод се използва, за да ги открие.
Отглеждане. Leptospira култура се получава лесно върху среда, съдържаща минимално количество протеин.

Фиг. 108. лептоспирии инфекциозна жълтеница (чиста култура).

Следната култура среда, използвана за култивиране на Leptospira:

1. Пептон разтвор в чешмяна вода (1: 1000) с няколко капки метафосфорна киселина.
2. Ulenguta среда, състояща се от стерилна чешмяна вода с 10% заешки серум, нагрява се при 56-58 ° в продължение на 30 минути.
3. Фосфат-серум среда TERSKIKH - смес от 10 мл Vi5 М разтвор на Na2HP04 и Vis М KH2P04 разтвор с 90 мл дестилирана вода: Сместа се стерилизира и се смесва с 10% топлинно заешки серум.

Сряда, след сеитба със слой от течен парафин или вазелин масло. Първите дни от засяването се препоръчва да се поддържа при температура от 32 °, следващите няколко дни - при 25-28 °. растеж Leptospira започва на 5-ти ден или по-късно. Leptospira не предизвика бульон мътност. Наличието на Leptospira се определя чрез микроскопско изследване на тъмно зрително поле.
Resistance. Отопление убива спирохети във вода в продължение на 30 минути при 50-55 °.

Anicteric лептоспироза - вода температура се появява по-доброкачествени, с ефекти на жълтеница и кървене. 4-7-дневно болест в областта на ключицата понякога се появява полиморфен обрив, който постепенно се разпространява по торса и крайниците. След 2-3 дни, обрив изчезва. Температурата се поддържа в продължение на около седмица. Обичайната изхода на заболяването - възстановяване.
Имунитет. Рецидивиращо заболяване са редки. В кръвта на пациенти покаже leptospiroliziny и аглутини.
Микробиологична диагноза. Материал за лабораторни изследвания е кръвта на пациента в първите дни на болестта, в присъствието на висока температура, урина 10-12-ти ден, когато менингеални явления гръбначно-мозъчната течност, според епидемиологични показания вода, храна, гнил материал (мъртви тела на хора и животни лептоспироза) ,
Използва се: 1) метод микроскопско изследване, 2) материал култура на хранителна среда, 3) серологични методи за разследване и 4) биологична проба.
За микроскопското изследване кръвта му печалба (2-3 мл) от вената в спринцовката с 4 мл от 1,5% разтвор на натриев цитрат. Сместа се излива в епруветка, центрофугира се, утайката се отделя. Урината и спинална течност може да бъде изследвана без лечение или след центрофугиране в продължение на няколко часа при 4000 об / мин. След центрофугиране, течността се излива, и пелетите се изследва. Спад на изпитваното вещество се прилага към тънките плъзгачите (не по-дебели от 1 mm) и се покрива със стъклен капак (не по-дебели от 0.2 mm). Получената лекарството "смачкани" капки разглежда в тъмно поле. Получаването ще се вижда тънък сребристо бели мобилен Leptospira.

Тъй микроскопско изследване осигурява малък процент на положителни резултати, е необходимо да се разпределят чиста култура на Leptospira. Пациент кръв, взета от вената (5 мл) се инокулират в 3 тръби (2 мл, 1 и 0.2 мл) в свободна от серум среда. Самата кръвта съдържа достатъчно хранителни вещества за растеж на Leptospira. Урината и цереброспинална течност се посяват при 0,5-1 мл в 3-4 тръби среда, съдържаща заешки серум. От човешки или животински труп вземат малки парченца бъбреците, далака, черния дроб, мозъка, смилат в порцеланов хаван с 2.3 мл физиологичен разтвор. Всичко това се прави е стерилна. Получената суспензия се излива в епруветки, се установява на 1 час. mikroskopiruyut супернатант topsheet, и след това се инокулира с 1 мл хранителна среда в епруветки 3-4. Култури поставят в термостат и на всеки 5 дни (за 3 месеца) от тях, препарати за тъмно поле микроскопия.
При сеитба замърсен материал (урина седимент, вода, и т. Д), заедно с възпроизвеждане на Leptospira наблюдава външен растеж микрофлора. В тези случаи, за да се получи чиста култура на Leptospira 3-4 мл от изпитваното вещество се прилага интраперитонеално морско свинче. След 10-15 минути, тя кървеше от сърцето и разпространението на култура без серум среда.
Когато кръвни култури на пациента в 80% от случаите има положителен резултат.
Серологичната диагностика на лептоспироза се основава на откриването на аглутини и комплемент-лизин антитела в серума на пациенти (от седмица 2-ри на заболяване). Аглутинацията - лизис е формулиран, както следва. От серум разреден от 1: 50 до 1: 10 000 и се излива в 0.2 мл (четири капки) в малки епруветки аглутинация, установени в множество редове (броят на серотипове на Leptospira, която се поставя реакция). За всички тръби на всеки ред се добавя равно количество жива култура на Leptospira специфичен тип L. ictefohaemorrhagiae, L. Казан., L. Weil- L. canicola, L. Батавия, L. grippotyphosa, L. DBA, L. kasachstanica I и сътр.
тръби контрол вместо серум се излива в 0,2 мл физиологичен разтвор и 0,2 мл култури на Leptospira. Епруветките се разклащат и поставят на 2 часа в термостат при температура от 25-30 °. От всяка епруветка получава лекарство "смачкани" и спад в областта на скоростта mikroskopiruyut.

Фиг. 109. аглутинация и лизис на Leptospira.
1 - Контрол 2 - аглутинация leptospir- 3 - началото на лизис - зърнеста
разпад.
В присъствието на серумни антитела в първите разреждания наблюдаван лизис: пълно разтваряне на Leptospira, частично лизиране или гранулиран подуване. Следващите разреждания намерят agglyutinatsiyu- натрупване на Leptospira като "паяци" (фиг. 109). Диагностична стойност има положителна реакция при серумно разреждане 1: 400.
При формулирането на комплемента пациенти фиксиране серум, разреден 1: 10, 1: 100. антигенът е култура на Leptospira или автолизат.
3 мл биологична проба кръвта на пациента през период температура от 5-10 мл урина или цереброспинална течност, 1 мл суспензия органи на човешки и животински трупове морско свинче се прилага интраперитонеално. Снимка на заболяването и резултатите от аутопсията на починал морско свинче са описани по-горе.
Лечение и профилактика. лечение leptospyrozov се извършва с пеницилин. Препоръчително е да се използва серум имунизирани Leptospira кон или възстановяващ серум.
Превантивни мерки от общ характер, включват: рехабилитация на зони ендемична инфекциозен жълтеница, увеличаване на киселинността на почвата и гризачи. Специфична профилактика е да се използва ваксина, съдържаща топлинно убити Leptospira 3 вида (ikterogemorragiya, грип tifozi и Monakova).